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ARN VIH

IgG. p24 Ag. IgM. 0. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Semaines. Sensitivité des différentes générations tests de dépistage. ARN VIH. 4 ème Géné ou T. combiné 1997. Fenêtre sérologique. 3 ème Géné 1989. 2 ème Géné 1988 (P. recombinantes ). 1 ère Géné 1985 (viral lysat).

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Presentation Transcript

  1. IgG p24 Ag IgM 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Semaines Sensitivité des différentes générations tests de dépistage ARN VIH 4ème Géné ou T. combiné 1997 Fenêtre sérologique 3ème Géné 1989 2ème Géné 1988 (P. recombinantes ) 1ère Géné 1985 (viral lysat)

  2. Problème de Sensitivité des premiers tests combinés Les tests combinés apparus entre 1997 et 2000 présentent un seuil de détection élevé par rapport au test d’antigène p24 • Laperche et al., Transfus Clin Biol. 2000 • Ly et al., Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2001 • Weber, B. 2003. AIDS Problème de Spécificité des premiers tests combinés 99,5 à 99,6 % moins bonne que les tests de détection d’anticorps • Gürtler et al., J. Virol. Methods. 1998 • Weber et al., J. Clin. Microbiol. 1998 • Ly et al., J. Clin. Microbiol. 2000

  3. Sensitivité de la détection d’Ag p24 (panel d’Ag VIH SFTS : LAI sous-type B)

  4. Ly et al, Journal of Clinical Microbiology, 2000 “ Contribution of combined detection assays of p24 antigen and anti-human immunodeficiency virus (HIV) antibodies in diagnosis of primary HIV infection by routine testing. ” Séroprévalence élevée Population : 1.6% • 5 laboratoires • 29 657 échantillons 3ème génération et VIDAS HIV DUO VIDAS HIV DUO / 3rd Gen EIApos/pos pos/neg neg/pos 453 160 42 Western blot positif 449 0 0 p24Ag positif 17 Suivi Western blot positif 4/4 17/17 0 29 002 négatifs 17/470 (3.6%) VIH infection détectée par VIDAS HIV DUO Spécificité VIDAS Duo : 99.51% ; Spécificité 3èmeGen EIA: 99.85%

  5. 20 tests de dépistage ELISA disponibles en Europe 2008

  6. Could the new HIV combined p24 antigen and antibody (Ag/Ab) assays replace p24 antigen specific assays ? Ly et al.J. Virol. Methods 2007

  7. Spécificité 1 005 échantillons négatives en VIH provenant de 4 laboratoires privés français

  8. Sensitivité analytique: Limite de détection d’Ag VIH-1 (panel d’Ag VIH SFTS : LAI sous-type B)

  9. Panel BBI PRA 801 - pgVIH/ml(panel de référence française SFTS ou Afssaps) - pg p24/ml(DuPont) - mIU/ml (W.H.O: Worth Health Organization) x 3,6

  10. Sensitivité clinique 23 VIH-1 Seroconversion Panels • 9 panels BBI : • 923, 932, 941, 944, 952, 953, 954, 957, 958, • 11 panels de NABI : • SV-0251, 261, 281, 321, 331, 371, 401, 404, 4888, • 37748, 122399, • 3 panels de BCP : • 9013, 9016, 6243

  11. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Semaines Importance du choix des panels de séroconversion dans l’évaluation des tests Combinés 1 2 3 Test combiné ou 4ème génération IgG Test d’anticorps ou3ème génération Ag p24 IgM

  12. Retard par joursen moyenne vis à vis de PCR < 20 pg/ml 5 – 6 jours 2004-2005 Detect HIV v.4 < 30 pg/ml 2001-2002 PCR VIDAS DUO Ultra 4.04 VIDAS Ultro Quick 5 Coulter HIV-1 Ag 5.13 ARCHITECT HIV Combo 5.17 Genscreen HIV Ultra 5.5 AxSYM HIV Ag/Ab Combo 5.78 Cobas Core HIV Combi 6.17 6.78 Murex HIV Ag/Ab Combo 2004 7.76 Modular HIV Combi VIDAS HIV DUO 8.09 8.29 Genscreen Plus HIV Ag/Ab Combo Genscreen HIV 1/2 v2 8.78 < 2000 Enzygnost HIV Integral 9.37 Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab 10 Ortho HIV-1/HIV-2 Ab Capture 10.25 0 2 4 6 8 10 12 Days Classic Method: Maximum delay method Format Microplaque

  13. Retard par joursen moyenne vis à vis de PCR PCR 3.5 – 4.5 jours VIDAS DUO Ultra 2.35 ARCHITECT HIV Combo 2.74 2004-2005 VIDAS Ultro Quick 2.83 Coulter HIV-1 Ag 3.04 3.35 Genscreen HIV Ultra 3.48 AxSYM HIV Ag/Ab Combo 2001-2002 Murex HIV Ag/Ab Combo 3.86 Cobas Core HIV Combi 4.09 Genscreen Plus HIV Ag/Ab Combo 4.05 2004 4.73 Modular HIV Combi 5.17 VIDAS HIV DUO < 2000 6.15 Genscreen HIV 1/2 v2 6.25 Enzygnost HIV Integral 6.6 Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab 6.81 Ortho HIV-1/HIV-2 Ab Capture Jour 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Microplate format Paul Erhlich Institut (PEI) calculation method (negative + 1 day)

  14. Sensibilité de la détection des anticorps: Panel BCP9017 Ratio (s/co)= > 1 : Positif - < 0,9 : Négatif

  15. Importance de la qualité des anticorps monoclonaux utilisés dans les trousses pour la détection d’Ag p24. Tersmette et al., Virology, 1989“Detection and subtyping of HIV-1 isolates with a panel of characterized monoclonal antibodies to HIV p24 gag” : problème de détection d’Ag p24 avec les anticorps monoclonaux sur certaines souches virales. Maniez et al, Spectra biologie, 1997« Évaluation des trousses de dépistage de l’Ag p24 du VIH »: 7 trousses d’Ag p24 avec problème de sensibilité vis-à-vis de certaines souches VIH-1.

  16. Diversité du VIHConséquences pour la détection d’Ag p24 • 31 surnageants de culture de sous-types VIH-1: 1 A; 8 CRF01_AE (circulating recombinant ); 7 B; 5 C;3 D; 3 F; 1 G; 1 O; et 2 CRF02_AG Chaque surnagent ayant 4 concentrations différentes titrées avec la trousse Innotest HIV Antigen (Innogenetics): 4 - 24 pg VIH /ml 10 - 75 22 - 150 61 - 356

  17. Limite de détection de l’Ag VIH avec 31 panels d’Ag Arcitect AxSym Murex Vidas Ultra Vidas Duo Modular Cobas Genscreen Ultra Genscreen Plus 6,6-41,2 15,2-110 12-72,7 6,3-83,5 29,2-456 86,9-280,7 29,7-234,5 7,3-180,7 42,3-> 500

  18. Sensibilité de détection des anticorps anti-VIH-1/2 chez les patients infectés dans différentes régions du monde (n=669) • 553 échantillons VIH-1-M : 113sous-type A: Cameroun, Ghana, Uganda, Grande Bretagne, France 75 sous-type B: Brésil, Cameroun,Thaïlande, Afrique du Sud, Grande Bretagne, France 71 sous-type C: Afrique du Sud, Uganda, Grande Bretagne, France 40 sous-type D: Cameroun, Afrique du Sud, Uganda, Grande Bretagne, France 11 sous-type F: Argentine, Brésil, Cameroun, France 9 sous-type G: Cameroun, Ghana, 83 CRF01-AE: Thaïlande 92CRF01-AG: Cameroun, Grande Bretagne 59 Mosaïques : Argentine, Brésil ,Cameroun, Ghana, Uganda, Grande Bretagne, France • 6 échantillons VIH-1-O (France, USA, Espagne, Cameroun: ESP2, 08692A, ABB009/96, ABB141/98, Ess, Rue) • 110 échantillons VIH-2 (Afrique de l’Ouest)

  19. VIDAS DUO 1 VIH-1 sous-type F, Genscreen v.2 1 VIH-1 groupe O, Enzygnost 1 VIH-1 sous-type C Genscreen Plus 1 VIH-1 sous-type B Échantillons pré-séroconversions

  20. Nouveaux tests Combinés apparus après 2000 Spécificité: nette amélioration trouvée dans certains tests Sensibilité de détection d’Ag: nette amélioration. Presque tous ont un seuil de détection inférieur à 50 pg VIH/ml Problème de détection d’Ag des différents sous types VIH-1 Sensibilité de détection d’Ac: peut être moins bonne dans la détection des taux très faibles

  21. Biomnis: Paris et Lyon Août 2007-juillet 2008

  22. Conséquence de Recommandation HAS sur 20 tests de dépistage ELISA

  23. Seuil de détection de l’Ag VIH-1SFTS (souche LAI sous-type B) Vidas Duo Ultra 11,5 pg VIH/ml Vidas Duo Quick 13 Genscreen Ultra HIV Ag/Ab 13 Architect HIV ½ Combo 18 Axsym HIV Combo 21 Murex HIV Ag/Ab Combo 29 Modular HIV Combi 126,5 Vironostika Uniform II Ag/Ab 150 50 ? version 2006 Enzygnost HIV Integral II < 50? 23 version 1 Detect HIV (v.4) 31 19,5

  24. Existence d’une variabilité du seuil de détection d’Ag p24 d’un lot à lot des tests combinés ? Architect Combo : < 50 pg/ml • Rôle de l’Afssaps dans l’application de la recommandation HAS ? • -Liste officielle des tests combinés • Contrôle des lots : fabricants ou Afssaps ?

  25. Remerciements S. Laperche, INTS S. Gonzalo, Biomnis Lyon A. Bianchi, Laboratoire Départemental de Bondy B. Lécolier (CEF) J. Lupu (Centre Suchet, Paris) J.Y. Mascart, AJ Morvan (Laboratoire Morvan Mascart, Paimpol) J.P. Tréguier, JJ Lemoine (Laboratoire Tréguier Lemoine, Lannion) S. Devare, P. Leroux, C. Brennan,(Abbott Laboratories) L. Santucci, J.M. Jego, S. Gadelle, (Bio-Rad Laboratories) O. Paour, (BioMérieux) T. Vidalenc, B. Studer (Dade Behring) F. Eberle, (Roche Diagnostics Laboratories)

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