Download
1 / 12
130 likes | 286 Vues
«Внедрение инновационных технологий в Центре лабораторной медицины АО «Республиканский диагностический центр». Масс-спектрометрия - высокая точность и качество исследований в микробиологической практике ». Л. Евстафьева. Определение чувствительности к антимикробным препаратам.
E N D
«Внедрение инновационных технологий в Центре лабораторной медицины АО «Республиканский диагностический центр» Масс-спектрометрия - высокая точность и качество исследований в микробиологической практике» Л. Евстафьева
Определение чувствительности к антимикробным препаратам Правильная идентификация возбудителя Эффективное лечение Микробиологическая служба оказывает существенную помощь лечащему врачу в выборе наилучшей схемы лечения инфекционной патологии
Время от первичного посева до получения результата идентификации на автоматических и полуавтоматических анализаторах 48-72 часа Время от первичного посева до получения результата идентификации на масс-спектрометре 24 часа
MALDI-TOF масс-спектрометрия метод идентификации молекул путем измерения отношения их массы к заряду в ионизированном состоянии Масс-спектрометрия MALDI (MatrixAssisted LaserDesorption 'lonization) ионизация вещества с помощью матрицы и лазерного излучения. TOF MS (TimeofFlight Mass-Spectrometry) время-пролетная масс-спектрометрия. Масса молекулы оценивается по времени пролета от источника ионизации до детектора.
Анализатор VITEK MS приобретен в 2014 г. В настоящее время, это единственный в Казахстане прибор для идентификации микроорганизмов на внутривидовом уровне методом спектрального анализа, используемый в клинической практике.
Преимущества метода масс-спектрометрии Высокая производительность 100% специфичность и чувствительность Высокая скорость анализа Определение спектра белков напрямую из бактериальной колонии, взятой с чашки первичного посева материала Увеличение базы данных (755 клинически значимых видов микроорганизмов)
Этап 1: подготовка образца Кристаллизация лизированного материала с веществом-матрицей, переход молекул лизата в газовую фазу и их ионизации. Смешивание колонии бактерий со специальной матрицей 1 2 3 4
Этап 2: Идентификация • Слайд помещают в анализатор, в котором молекулы матрицы и анализа (белков) переходят в газовую фазу, а протонированные молекулы матрицы взаимодействуют с белками, перенося на них положительный заряд. Под действием электрического поля ионизированные белки движутся от источника ионизации к детектору с ускорениями обратно пропорциональными их атомным массам. • Программное обеспечение прибора оценивает время пролета частиц и преобразует эту информацию в спектр молекулярных масс (масс-спектр). Масс-спектр сравнивается со спектрами из базы данных и на основании сведений о массах белков происходит идентификация микроорганизмов. Бактериальная клетка Белки Видовоеопределение Протеом V oyagerSpec#1=>AdvBC(32,0.5,1.0)=>NF0.7[BP=4423.9,2117] 4424.2 9476.2 100 2117.3 90 80 70 60 50 40 30 20 10 4861.0 8823.5 % I ntensi ty 5897.8 6271.2 8054.3 6629.0 7424.9 12271.4 4535.6 4765.4 4738.6 700090001100013000 Массамолекулы 6786.7 6984.6 7209.8 8383.8 6533.3 8903.3 9075.2 3132.3 3311.8 3491.4 10110.8 6137.3 10975.2 10493.9 8610.6 4026.9 9611.5 0 3000 5000 Mass(m/ z)
Масс-спектрометр Автоматизированная система идентификации Шаг 1 Целевой слайд Бактерии, плесень, дрожжи, Шаг 4 Загрузка Шаг 2 Добавление 1.0 мкл матричного раствора Шаг 5 Создание спектра ( 2 мин на 1 образец) Шаг 3 Просушивание: 1-2 мин.
Результаты исследований На идентификацию одного микроорганизма требуется около 2 -х минут времени 99,9% достоверности результатов
Что дало нам приобретение автоматического анализатора VITEK MS: Полная автоматизация стандартных биохимических методов идентификации микроорганизмов Увеличение скорости исследования Стандартизация микробиологических исследований Повышение качества проводимых исследований Расширение спектра выделяемых патогенов Сокращение времени на проведение идентификации и сокращение срока выдачи результата • эффективное лечение пациента • снижение смертности • существенное сокращение сроков госпитализации • экономия бюджетных средств.
