Introdução/Objetivos : O estudo do processo oxidativo em sistemas biológicos é

1. EFEITOS DE ANTIOXIDANTES EM ERITRÓCITOSDE PACIENTES PORTADORES DE DOENÇAS HEMOLÍTICAS Patrícia Santos Carvalhinho Lopes - PIBIC / CNPq Introdução/Objetivos : O estudo do processo oxidativo em sistemas biológicos é relevante para a compreensão de diversos mecanismos fisi- opatológicos de doenças que o envolvem, como as doenças hemolíticas, nestas ocorre a exacerbação da formação de espécies reativas de oxigênio (ERO)(BARREIROS e DAVID, 2006). O presente estudo teve como objetivo estabelecer um protocolo para a pesquisa de ERO em eritrócitos humanos, padronizando-se concentrações, tempos de incubação e leitura. Resultados e Discussão Os resultados obtidos para as diferentes concentrações de t-BHP foram, respectivamente: médias±desvios padrão de: 31203±11429; 8228±1742; 5142±2790; 4672±2726 e 3026±1843 uf/g.hb. Já para a análise após a adição de vitamina C obteve-se: médias±desvios padrão de 13081±1197; 9808±747; 8250±658,3; 3083±1538 e 825,9±624,4 uf/g.hb. Método:Foram coletadas amostras de sangue em EDTAK3 de 10 indivíduos saudáveis. As amostras foram centrifugadas, retirando- se o plasma e a camada de leucócitos e, em seguida, os eritróci- tos foram lavados e ressupensos em solução salina gelada para volume globular de 10%. Estas suspensões de eritrócitos foram in- cubadas com a sonda extenso DCFH-DA 10 µmoles/l por 30 min. a 37º C, na ausência de luz., e diluídas 1:10 em PBS 10 mmoles/l. O agente oxidante testado foi o terc-butil hidroperóxido(t-BHP), reco- nhecidamente um agente produtor de ERO, em microplacas, nas concentrações de 10, 1, 0,7, 0,5 e 0,3 µmoles/l, em incubações de 15 min/37°C, com posterior leitura fluorimétrica em 488 e 528 nm (Fluorímetro Promega modelo GlomaxÒ - Multi+). Em outro experi- mento, amostras foram incubadas com vitamina C 5, 25, 50, 75 e 100 µmoles/l por 30 minutos a 37ºC e, em seguida, com t-BHP 75 µmoles/L. GRÁFICO 1 – QUANTIDADE DE ERO PRODUZIDA EM DIFERENTES CONCENTRA- ÇÕES DE VITAMINA C E EM DIFERENTES TEMPOS DE EXPOSIÇÃO Conclusão:Demonstrou-se que a técnica é sensível, observando-se que o tempo e concentração são condições que influenciam no resultado. Pelo pequeno tamanho amostral, mais estudos são necessários para a compreensão da sua utilidade como ferramenta diagnóstica e de acompanhamento terapêutico em doenças que envolvem o estresse oxidativo. Referências:BARREIROS, A.L.B.S.; DAVID, J.M. Estresse oxida- tivo: Relação entre geração de espécies reativas e defesa do organismo Rev. Química Nova, v.29, n.1, p. 113-123, 2006.