1 / 62

به نام پروردگار

به نام پروردگار. یادآوری. گروه بندی و انتخاب موضوع تحقیق؟ نحوه ارایه: پاورپوینت- تحقیق در چند صفحه همراه منابع تعریف بیوتکنولوژی مثالهایی از بیوتکنولوژی کلاسیک بیوتکنولوژی مدرن کلونینگ چیست؟ تراریخت چیست؟ انسان شبیه سازی شده؟. بیوتکنولوژی. جلسه دوم PCR. واكنش زنجيره‌اي پلي‌مراز.

dasha
Télécharger la présentation

به نام پروردگار

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. به نام پروردگار

  2. یادآوری • گروه بندی و انتخاب موضوع تحقیق؟ • نحوه ارایه: پاورپوینت- تحقیق در چند صفحه همراه منابع • تعریف بیوتکنولوژی • مثالهایی از بیوتکنولوژی کلاسیک • بیوتکنولوژی مدرن • کلونینگ چیست؟ • تراریخت چیست؟ • انسان شبیه سازی شده؟

  3. بیوتکنولوژی جلسه دوم PCR

  4. واكنش زنجيره‌اي پلي‌مراز Polymerase chain reaction

  5. 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ Primase 5’ Single strand binding proteins Laging Strand 5’ 5’ 3’ 5’ RNA Primers DNA Polymerase 5’ 3’ Helicase Leading Strand 5’ 3’ همانند سازی DNA Okazaki fragment

  6. آنزیم های کلیدی در همانند سازی DNA • DNA Polymerase • DNA Ligase • Primase • Helicase • Topoisomerase • Single strand binding protein

  7. PCRچیست؟ • روشی که در آن قسمت خاصی از DNA الگو توسط آنزیم پلیمراز در سیکلهای گرمایی تکثیر می گردد • جایگزین روش کلونینگ ژن در باکتری: • ساده تر • کم هزینه تر • سریعتر

  8. تاریخچه • 1985كری موليس • 1993 برنده نوبل

  9. دلایل پیشرفت این روش • DNAپلیمراز مقاوم به حرارت • دستگاههای ترمال سایکلر

  10. مواد مورد نیاز • آب دیونیزه • پلیمراز((Taq • نوکلئوتید (dNTPs) • پرایمرها • بافر آنزیم • کوفاکتور(Mg) • الگو(DNA)

  11. مراحل واکنش PCR • دناتوراسیون اولیه • مراحلی که چندین سیکل تکرار می شوند • دناتوراسیون • اتصال پرایمرها • طویل شدن • طویل شدن نهایی

  12. Overview of PCR • Temperature Cycling • Denaturation 94° • Annealing 55° • Extension 72° • 2. Every cycle DNA between primers is duplicated

  13. PCR Amplification

  14. Exponential Amplification

  15. Melting 100 94 oC Temperature 50 0 T i m e 3’ 5’ 5’ 3’ PCR

  16. Melting 100 94 oC Temperature 50 0 T i m e 3’ 5’ PCR Heat 5’ 3’

  17. Melting Melting 100 94 oC 94 oC Extension Annealing Primers Temperature 72 oC 50 oC 50 0 T i m e 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 3’ PCR

  18. 30x Melting Melting 100 94 oC 94 oC Extension Annealing Primers Temperature 72 oC 50 oC 50 0 T i m e 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 3’ PCR Heat Heat 5’

  19. 30x Melting Melting 100 94 oC 94 oC Extension Annealing Primers Temperature 72 oC 50 oC 50 0 T i m e 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ PCR

  20. 30x Melting Melting 100 94 oC 94 oC Extension Annealing Primers Temperature 72 oC 50 oC 50 3’ 5’ 0 5’ T i m e 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ PCR Heat Heat

  21. 30x Melting Melting 100 94 oC 94 oC Extension Annealing Primers Temperature 72 oC 50 oC 50 3’ 5’ 0 5’ T i m e 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ PCR

  22. 30x Melting Melting 100 94 oC 94 oC Extension Annealing Primers Temperature 72 oC 50 oC 50 3’ 5’ 0 5’ T i m e 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ Fragments of defined length 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ PCR

  23. Plateau phase Linear phase End point analysis on agarose gels Exponential phase Polymerase Chain Reaction PCR Product Cycles

  24. الکتروفورز

  25. عوامل موثر در PCR • Reagent and instrument • User mistakes • Template • Primers

  26. برخی کاربردها • تشخیص بیماری ژنتیکی • تعیین هویت افراد • تشخیص بیماری ویروسی • تیتر ویروسی توسط Real-Time PCR • تکثیر قطعه خاص ژنی برای ژن کلونینگ • ایجاد جهش برای ژن کلونینگ • اضافه کردن قطعات خاص برای ژن کلونینگ • بررسی بیان ژن RT-PCR

  27. مقدمه ای بر Real Time PCR

  28. What’s Wrong With Agarose Gels? • * Low sensitivity • * Non-automated • * Size-based discrimination only • * Results are not expressed as numbers • * Ethidium bromide staining is not very quantitative

  29. Three general methods for the quantitative detection: 1-TaqMan, Beacons, Scorpions 2. Hybridisation probes 3. DNA-binding agents (SYBR Green) The first two methods are specific formats.

  30. Fluoresces when bound to dsDNA

  31. DNA Polymerase 5' exonuclease activity

  32. Taqman probes are “hydrolysis” probes Polymerization TaqMan® Probe Forward Primer R Q 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ Reverse Primer

  33. Displacement R Forward Primer Q 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ Reverse Primer

  34. Hydrolysis R Q 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’

  35. Polymerization Completed R Q 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 5’

  36. Excitation FRET P Emission Amplicon Hybridization probes

  37. 95oC Denaturation

  38. Excitation FRET P Fluorimeter Reading Emission Tm 55oC Primer/Probe Annealing

  39. 72oC Primer Extension

  40. Molecular Beacons

  41. Scorpion

More Related