1 / 37

Semen Analysis

Semen Analysis. 高雄醫學大學附設中和紀念醫院 檢驗醫學部 江建華. Hardware: PC Phase contrast microscope   Videodigitizer CCD camera Software : Windows NT 4.0 Microsoft Office 2000 CASA software . The computer age (I). Image analysis Amplitude of head displacement Velocity.

enya
Télécharger la présentation

Semen Analysis

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Semen Analysis 高雄醫學大學附設中和紀念醫院檢驗醫學部 江建華

  2. Hardware: PC Phase contrast microscope   VideodigitizerCCD camera Software: Windows NT 4.0 Microsoft Office 2000CASA software The computer age (I)

  3. Image analysis Amplitude of head displacement Velocity The computer age (II)

  4. Inaccurate at low & high concentration Cellular debris Cost QC The computer age (III)

  5. Normal values of semen variables (WHO 1992)

  6. Sample collection and delivery • Masturbation, condom, coitus interrupts. • 48 hours and no longer than 7 days of sexual abstinence. • Collect the whole volume. • Deliver specimen to the laboratory in 30 min. • Avoid extreme temperature while transport the sample.

  7. Macroscopic evaluation • Appearance • Volume • pH • Viscosity (consistency) * The thread should not exceed 2 cm.

  8. Microscopic investigation (I) • Motility: makler counting chamber nine or sixteen squares • Estimation of sperm concentration makler counting chamber 50℃~60℃ water bath • Sperm viability: eosin y stain

  9. Microscopic investigation (II) • Morphological characteristics Papanicolaou stain, HE or Liu’s stain • Cells other than spermatozoa polygonal cells spermatogenic cell WBC

  10. MAKLER counting chamber (I)

  11. MAKLER counting chamber (II)

  12. MAKLER counting chamber (III) • Advantages • Dilution is unnecessary, accuracy of analysis is enhanced through the elimination of various steps required by the usual hemocytometric technique. • The specimen can be analyzed quickly. • The chamber is quickly and easily available for reuse.

  13. A Look at Sperm Morphology.

  14. Evaluating Sperm Morphology by Kruger’s Strict Criteria.

  15. Sperm function test • The hamster egg penetration assay • The in-vitro acrosome reaction • The cervical mucus penetration test • The hypoosmotic swelling test • Antisperm antibody

  16. 臨床意義（Clinical significance） • 男性不孕症（infertility）的評估。 • 輸精管切除手術的評估。 • 法醫學（medico legal）的目的。

  17. 採檢須知

  18. 精液之檢測時間 • pH值必須馬上檢測。 • 凝固及液化檢查：30分鐘內必須檢測。 • 運動率：收集時間後1小時及2小時各檢查一次。

  19. 退件原則 • 檢體標示與申請單不符。 • 檢體未依標準容器採檢。 • 檢體滲漏、污染申請單。

  20. 品質管制程序 • 精蟲數檢查： • 自製品管品： • 取一臨床正常檢體，精蟲數約20~30 x 106/ mL檢體，以10%中性福馬林固定，作為陽性品管。 • 固定後測定精蟲數由醫檢師以Makler counting chamber 計數20次求平均值（Mean）作為Target value。並計算SD值。 • 另取Normal saline作為陰性品管，其值為零。

  21. pH值試紙: • 執行品管時機： • 每次執行測試時。 • 至少每月一次。 • 以pH meter校正標準品（SUNTEX Instrument）之高值及低值液進行品管操作。 • 同一片試紙一半進行品管，另一半進行檢體測試。

  22. 作業步驟（Procedural steps） • 當檢驗室人員收到精液檢體時，需詢問病患收集時間，記錄在檢驗單，詢問病患是否符合採檢說明書之各項收集要點並注意是否溫度異常。

  23. 外觀及顏色： • 用肉眼觀察精液的外觀及顏色，並記錄在檢驗單。 • 凝固及液化： • 操作方法： • 每隔5'～10'看Semen是否液化，用竹棒挑起Semen看是否有粘 液，若粘液絲超過2公分表示未完全液化，不超過2公分表示液化，然後將液化的時間寫下。

  24. 量： • 操作方法： • 用一支5 mL空針，拔掉針頭，吸取Semen測其量。 • pH值： • 操作方法：以pH試紙沾精液後判讀。 • 試紙的使用： • 從冊子撕下一張試紙。 • 將試紙快速沾溶液並迅速移除。注意：試紙不可浸泡太久。 • 輕甩試紙移除過多的溶液。 • 在明亮區域立即和標準顏色比對（color standard）。

  25. pH 試紙使用注意事項： • 顏色深的溶液其buffer capacity很大。 （用水稀釋溶液去減少試紙受顏色的影響）。 • 混濁溶液或溶液有沉澱將試紙一面弄濕，用另一面去判讀。 • 黏稠檢體把試紙直接接觸溶液表面。 • Buffer capacity很小的溶液。 • 試紙不應該單獨用在Buffer capacity很小的溶液例如: 蒸餾水、自來水、海水、河水或含<0.01%的HCl或NaOH水 溶液，為了要得到正確的pH值必須用玻璃電極測量，得到的pH值和pH試紙比較可求得校正因子，當用試紙測pH值可代入校正因子即可。 • 若工作區域有酸或鹼的蒸氣將無法得到正確的結果。 • 若溶液中含有氧化劑或還原劑會將試紙脫色導致不正確的結果。 • 測量pH試紙時必須在室溫。溫度增加，試紙的顏色反應成分會消失導致錯誤結果 • 若試紙不常使用顏色會輕微變色，這不影響後續測試的準確性品質。

  26. 精蟲運動性： • 操作方法 : • 採用Makler counting chamber，以竹棒將Semen拌勻，沾一滴Semen於chamber中心點上，蓋上Cover glass, 避免產生氣泡，以200倍鏡檢隨機看一正方形區域 （9或16小格），計算運動率，操作兩次取平均值。 • 計算運動率：

  27. Forward Progression ： • 係檢查精子“向前衝”的活動力。 • 依序為ABCD級：將活動精蟲依下列等級區分，以%表示。 • A級：表示精子可快速且直線地向前衝。 • B級：表示精子慢速直線地或曲線狀地向前行。 • C級：表示精子原地運動但不前進。 • D級：表示精子無活動性。

  28. 精蟲形態： • 操作方法： • 將Semen 以wedge-pull film technique推片，smear 之working area必須精蟲分佈均勻，無overlapping。以Wright-Giemsa stain染色。 • 油鏡觀察，至少計算200隻精蟲。若精蟲數稀少需整片閱畢。

  29. 判讀：依1992 WHO 3rd Edition Methods criteria。 • 正常精蟲形態： • 頭部從正面看為卵圓形（oval form），側面看為西洋梨形，具正常平滑輪廓，頂體可明顯區分出來佔頭部區域40 ~ 70 %；液泡佔頭部區域小於20 %。 • 頭部：長度4 ~ 5.5 µm寬度2.5 ~ 3.5 µm長/寬比為1.5 ~ 1.75。 • 不可有細胞質小滴大於正常精蟲頭部的1/3 。 • 中節部分沒有異常。 • 尾部連接插入頭部不可大於頭部縱軸的90 %。 • 尾部無任何缺陷。

  30. 異常精蟲形態： • 利用上述分類大綱，不符合之精蟲皆視為不正常。 • 頭部缺陷：雙頭形、巨大形、矮小形、邊緣不整、空泡形、縮頭形、缺頭形、雙叉頭、不成熟。 • 頸部缺陷：彎曲或太細。 • 尾部缺陷：太短、太寬、尾部彎曲、尾部彎曲或尾端有小滴。 • 若正常型態之精蟲<30%，需由實驗室主管進行確認。

  31. 精蟲數： • 操作方法： • Markler counting chamber，以竹棒將精液混合均勻後，沾一滴Semen於chamber中心點上，蓋上cover glass, 避免產生氣泡，以200倍鏡檢，計算chamber內連續性10小格，所得之精蟲數乘以106即為每mL精蟲數。 • 隨機選取另10小格操作，兩次取平均值。

  32. Pellet Examination： • 以Makler counting chamber 計數精蟲數，若沒有發現精蟲則進行此檢查，特別是輸精管結紮（Vasectomy）術後評估。 • 將精液以Normal Saline 1：1 混合，裝於15 mL 離心管以1500 rpm離心10分鐘。 • 取底部沉澱物進行鏡檢。 • 若觀察到精蟲則報告Pellet Examination：" sperm present "。

  33. 計數WBC： • 操作方法： • 精液滴於玻片上蓋上蓋玻片，以光學顯微鏡400倍觀察計算WBC 數目。 • 注意事項：round cell有兩種，一是不成熟的精細胞（immature germ cell），具高濃染的單核或雙核伴隨大區域的細胞質，另一為多核性白血球（polymorphonuclear leukocyte）比germ cell小，N/C ratio也更小。

  34. 計數RBC： • 操作方法： • 精液滴於玻片上蓋上蓋玻片，以光學顯微鏡400倍觀察計算RBC 數目。 • 計數上皮細胞： • 操作方法： • 精液滴於玻片上蓋上蓋玻片，以光學顯微鏡400倍觀察計算上皮細胞數目。

  35. Spermatozoon with normal, oval-shaped head.

  36. Immature spermatozoon with tail coiled around its head.

  37. Spermatozoon with large head.

More Related