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FASES PARA CROMATOGRAFÍA

FASES PARA CROMATOGRAFÍA. Licda. Carol villatoro de santisteban Análisis Instrumental Departamento de Fisicoquímica Escuela de Química USAC. GENERALIDADES. Fase estacionaria (FS) Fase móvil (FM) Sistema cromatográfico

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FASES PARA CROMATOGRAFÍA

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Presentation Transcript

  1. FASES PARA CROMATOGRAFÍA Licda. Carol villatoro de santisteban Análisis Instrumental Departamento de Fisicoquímica Escuela de Química USAC

  2. GENERALIDADES Fase estacionaria (FS) Fase móvil (FM) Sistema cromatográfico Elección según propósito del análisis, características de la muestra, características de los analitos Interacción FS-analito Polaridad

  3. Fases estacionarias

  4. FASES ESTACIONARIAS • Factor clave para la SEPARACIÓN • Características de la FS • Identidad química • Estructura física: (Partículas de soporte, configuración en el espacio, tipos de interacción) • Forma de contacto entre fases (plano, columnas) • Configuración del soporte (partículas de relleno, pared del capilar)

  5. ADSORCIÓN • Fase estacionaria sólida y polar • Carbonato de calcio • Sílica • Alúmina Na2SiO3 +H2O + 2HCl = Si(OH)4 + 2NaCl

  6. REPARTO Fase estacionaria líquida Partículas de soporte: sílica, vidrio+sílica, polímeros FS unida físicamente o químicamente (reparto o fase enlazada) Película superficial de fase estacionaria sobre partícula de soporte

  7. FASE ENLAZADA Unión covalente soporte-FS Sílica – Siloxanos Equivalente a película muy fina Características de la partícula determinantes para grado de sililación

  8. AFINIDAD Aplicación bioquímica Interacción antigeno-anticuerpo Alta selectividad

  9. INTERCAMBIO IÓNICO • Analitos con carga eléctrica • FS (enlazada) cargada • Intercambiadores aniónicos (FS +, analito -) • Intercambiadores catiónicos (FS -, analito +) • FM con contraión • Competencia (intercambio) analito-contraión

  10. EXCLUSIÓN O PERMEACIÓN EN GEL Interacción FS-analito puramente física Tamaño y forma --- Peso molecular y conformación Poros o canales – recorridos distintos

  11. Fases Móviles

  12. FASES MÓVILES • Factor clave para la ELUCIÓN • Características de la FM • Composición química (polaridad) • Estabilidad (estado físico, composición, interacción con otras sustancias, interferencias instrumentales)

  13. Polaridad Armonización en las polaridades analito-FS-FM Similitud FM-analito – tiempo de retención

  14. Polaridad

  15. Mezclas Elución isocrática Uno o varios solventes Composición constante Elución en gradiente Dos o más solventes Composición varía en función del tiempo Índice de polaridad de la mezcla: sumatoria de índices individuales por fracción en volumen

  16. INTERACCIONES

  17. Interacciones C. de adsorción: Analito y FM compiten por adsorberse sobre la FS Fase Normal Gradiente: aumento de polaridad

  18. Interacciones C. de reparto (incluyendo fase enlazada): Analito se transfiere entre FM y FS en la interfase Fase Normal Gradiente: aumento de polaridad Fase Reversa Gradiente: disminución de polaridad Polaridad de la FM influye en conformación molecular de la FS

  19. Interacciones C. de exclusión y c. de gases: FM sólo transporta al analito libre. Poca interacción FM con FS Poca interacción FM con analito

  20. Interacciones C. de afinidad Elución en gradiente Fase de retención: FM sólo transporta al analito Fase de elución: FM interactúa con el analito o con la FS FM compite con FS por enlazarse con el analito FM modifica o se une a FS, evitando la unión FS-analito.

  21. Interacciones C. de intercambio iónico Analito y FM compiten por adsorberse sobre la FS Elución en gradiente Fase de acondicionamiento: FM se une a FS (atracción electrostática) Fase de retención: FM y analito compiten Fase de elución: FM interactúa con el analito o con la FS FM se une a FS FM modifica al analito evitando la unión FS-analito

  22. FIN Gracias por su atención

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