Boas Práticas Laboratoriais Preparo de soluções

1. Boas Práticas LaboratoriaisPreparo de soluções Disciplina de Reumatologia 2011

2. http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/schedules/Talks/Solutions_dilutions/BIOEDmixtures.htmhttp://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/schedules/Talks/Solutions_dilutions/BIOEDmixtures.htm

3. O que fazer antes do preparo • Vc sabe quais são os reagentes? • Todos os reagentes estão disponíveis? • Quanto vc vai preparar? • Solução estoque ou de uso? • Vai usar algum produto tóxico? Veja no rótulo • Que água vc vai usar? • Onde vai guardar sua solução?

4. Soluções • Estoque – ex. tampões concentrados • PBS, TBS, TAE, NaCl – sempre colocar nome e concentração do reagente, pH, quem fez e data • Solução de uso – quantidade suficiente para a reação • Alíquotas – substâncias sensíveis a congelamento/descongelamento

5. Preparo de soluções • Solvente universal – água • As soluções podem ser: • peso/volume (g/v ou w/v) – x gramas de soluto em um dado volume final de solução (ex 1g em 100ml = solução 1%), • volume/volume (v/v)– x ml de soluto em x em um dado volume final de solução (líquidos), • peso/peso – x gramas de soluto em 100 gramas de solução (uso em gradiente)

6. Molaridade (M) • A molaridade de uma solução indica quantos moles da substância existem em 1 litro de solução. • O mol é o peso molecular (PM) expresso em gramas e seu valor é encontrado no rótulo do frasco.

7. Você sabia? • 1 mol equivale ao peso de 6.02214078×1023 moléculas do composto • Esse é o número de átomos de 12C presentes em 12g desse isótopo de carbono • Esse número é conhecido como a constante de Avogadro

8. Ajuda dos universitários • http://www.graphpad.com/quickcalcs/molarityform.cfm • Chemical and radiochemical data • Create and convert molar solutions

9. Preparar a solução a partir de reagente sólido: • • Qual o peso (ou massa) molecular do reagente? Veja no frasco – MW, mol wt, MMs, PM • • Qual o volume de solução você vai preparar em litros, V. • • Qual a molaridade da solução, M. • • Calcule as gramas (g) de soluto necessárias usando a equação: • g = MW x M x V • • Exemplo: Preparar 800 mL de NaCl 2 M (MW = 58.45 g/mol). • g NaCl= 58.45 g/mol x 2 mol/L x 0.8 L • g NaCl= 93.52 g NaCl • Dissolva 93.52 g de NaCl em 400 mL de água destilada e então adicione mais água até completar o volume de 800 mL.

10. Exemplo Preparar 200 mL de solução 0,4M de NaCl • PM de NaCl=58,43g/mol • Solução 1M de NaCl - 58,43g em 1L • g=58,43g/mol x 0,4mol/L x 0,2L • g=4,674g

11. Molaridade a partir de solução em % • Determine a molaridade de HCl 37,2% (peso) (densidade 1,19 g/mL. MW 36,4 g/mol). • Calcule a massa de 1L da solução = 1000 mL x 1,19 g/mL = 1190 g • Calcule quanto dessa massa é de HCl = 1190 g x 0,372 = 442,68 g • Calcule quantos moles correspondem a essa massa = 442,68 g/36,4 g/mol = 12,1 moles • Portanto a molaridade é 12,1 M

12. Normalidade (N) • N é o nº de equivalentes grama (Eq) de soluto por litro de solução. O nº de Eq é o mol dividido pela valência (nº de H+ ou de OH-). • Ex: uma solução 1M de H2SO4 tem 1 mol por litro (peso molecular=98g). Como são 2 H+, o Eq do H2SO4 é 98/2=49g. Como temos 98g do soluto, e o Eq é 49g temos 2 Eq por litro e a solução é 2N. • Como regra, a Normalidade é a Molaridade multiplicada pela valência.

13. Grau de pureza • ACS grade • Mais alta qualidade possível (often equals or exceeds the latest purity standards set by the American Chemical Society (ACS). • Reagent grade • Pureza geralmente semelhante ao grau ACS. Adequado para trabalho analítico e para laboratórios em geral. • USP grade • Pureza suficiente para passar nos testes da U.S. Pharmacopoeia (USP).

14. Diluições Para diluir uma solução acrescentamos apenas solvente, a quantidade de soluto não é alterada adicionar solvente Solução inicial

15. Diluições • A partir de uma solução estoque mais concentrada pode-se obter uma solução mais diluída empregando a fórmula abaixo: Ci x Vi = Cf x Vf • Ci = concentração inicial (estoque) • Vi= volume da solução inicial (estoque) • Cf = concentração final desejada • Vf = volume final desejado

16. Diluições • Diluição 1:2 (ex.diluir soro em PBS) • 1 parte do soluto (soro) + 1 parte de solvente (PBS) – o volume final é o dobro do inicial • Diluição 1:10 • 1 parte do soluto + 9 partes do solvente • O volume final é dez vezes o volume inicial

17. Atenção • Em muitos protocolos encontramos: • Prepare uma solução 100mM de cloreto de cálcio pH 7,5 (11,09 g de CaCl2 em 1L de água, acertar pH com HCl 1N) • Quanta água devo colocar para dissolver o cloreto de cálcio? • Só tenho CaCl2.2 H2O quanto devo pesar?

18. Acertando o pH • Cuidados ao acertar o pH • O pHmetro está calibrado? • Sei calibrar? • Cuidados com os padrões de pH • Qual ácido ou base usar? • Tenho as soluções de ácido ou base que vou usar? Não? • Sei preparar?

19. Dicas • Tris, Trizma-base, Tris-Cl o que significam? • Como diluir um ácido ou base concentrados?

20. Acessórios

21. Sites úteis • http://www.flinnsci.com/sections/safety/chemicalSafety/L1051-1065_HS_SOLUTION_PREP.pdf • http://www.carolina.com/category/teacher+resources/instructions+and+buying+guides/chemistry+instruction+manuals/solution+preparation+manual.do