موضوع الرسالة

1. موضوع الرسالة انتشار ركتسية الحمى المجهولة (Coxiella burnetii) فى غزلان الإدمى (Gazella gazella) والريم (Gazella subgutturosa marica) المرباة فى مركز الملك خالد لبحوث الحياة الفطرية بالثمامة للطالب: إبراهيم بن محمد الخليفة Prevalence of Q-fever Agent (Coxiella burnetii) in Idmi (Gazella gazella) and Reem (Gazella subgutturosa marica) Gazelles At King Khalid Wildlife Research Center in Thumama By: Ibrahim M. Al-Khalifa

2. الحمي المجهولة(داء الكوكسيلة Coxiellosis ؛ حمى المسالخ؛ حمى الأميال التسعة؛ الحمى الاسترالية؛ حمـى كوينزلاند؛ مرض بيرنت؛ الحمـى الأمريكية) • من أهم الأمراض التي تنتقل من الحيوان إلى الإنسان. • تسببها كوكسيلة بيرنت (Coxiella burnetii) التي تدور في الطبيعة ما بين القراد والعديد من الثدييات البرية الصغيرة. • تكوّن أبواغ داخلية شديدة المقاومة للعوامل البيئية. • تبقي حية في البيئة وحظائر الحيوانات لفترات طويلة. • يحملها القراد في الطبيعة لمدد طويلة منتقلة عبر البيض من جيل إلى آخر.

3. أسباب زيادة أهمية الحمى المجهولة في السنوات الأخيرة: • تعدد مصادر العدوى. • اختلاف أشكال المرض. • تعدد العوائل القابلة والعوائل الخازنة في الطبيعة. • التواجد الكُلي للميكروب. • سهولة الانتقال بمختلف الطرق المباشرة وغير المباشرة. • شدَة العدوى للإنسان (تكفي خلية جرثومية واحدة لإحداث العدوى). • زيادة قابلية الإنسان (مرض الإيدز؛ زراعة الأعضاء؛ سوء التغذية) • العدوى عادة صامتة في الحيوانات ويصعب اكتشافها في أنسجتها ولحومها وحليبها.

4. نبذة تاريخية • في عام 1935م وصفت حمى متفشية بين عمال المسالخ في برسباني في استراليا وسمَيت الحمى المجهولة حيث لم يكن مصدرها معروفاً. • اشتبهBurnett et al. (1939) أن يكون المسبّب أحد أنواع الركتسية. وقاموا بإحداث عدوى في حيوانات التجارب وشاهدوا حويصلات مملوءة بمادة حبيبية وعصيات تشبه الركتسية في خلايا الطحال (Burnett and Freeman, 1937). • درس Derrick وفريقه السمات الوبائية للحمى المجهولة. وهم أول من أشار إلى إمكانية انتقال المرض عن طريق مفصليات الأرجل كالقراد، وأن الحيوانات البرية قد تكون الخازن الطبيعي الأساس للعدوى، بينما تمثل الحيوانات الأليفة خازناً ثانوياً (Derrick et al., 1939). • سمّي الميكروب في البداية ركتسية بيرنت (Rickettisa burnetii) ولكن (Philip, 1948) أقترح إنشاء جنس جديد هو جنس Coxiella وإعادة تسمية العامل المُسبّب للحمى المجهولة (حمى الأميال التسعة) باسم (Coxiella burnetii) على شرف كلاً من Burnet و Cox مكتشفي هذا الميكروب.

5. الخصائص العامة لكوكسيلة بيرنت • تتطفل إجبارياً داخل الخلايا. • غشاءها خارجي يشبه غشاء البكتيريا السالبة لصبغة جرام لكنها لا تصطبغ بتلك الصبغة ويستخدم طرق خاصة لصبغتها. • بيّنت التحاليل الوراثية أن جنس كوكسيلة ينتمي إلى المجموعة المسماة جاما Proteobacteria التي تضم أيضاً أجناس:Francisella و Legionella وRickettsiella(.(Weiss, 1989

6. تصنيف الكوكسيلة • Kingdom: Prokaryotes • Phylum: Proteobacteria • Class: Gamma Proteobacteria • Order: Legionellales • Family: Coxiellaeae • Genus: Coxiella • Species : Coxiell burnetii

7. تعتبر ركتسية بيرنت التي تسبّب الحمى المجهولة من أكثر الكائنات المعدية انتشاراً في الطبيعة. جميع الركتسيات تقريباً مخزونة في الطبيعة بواسطة مفصليات الأرجل كالقراد والقمل والبراغيث والحلم .

8. كوكسيلة الحمى المجهولة في طبقة الخلايا الغاذية في مشيمة نعجة.

9. دورة حياة الكوكسيلة في الخلية المعيلة

10. انتقال العدوى في الإنسان والحيوان • الاستنشاق: • سوائل الولادة (بليون جرثومة/جرام من المشيمة نعجة مصابة)؛ • البول؛ البراز؛ الحليب. • الرذاذ المحمول بواسطة الرياح . • اللمس • الابتلاع. • الوسائط غير الحية • القراد • طرق أخرى

11. داء الحمى المجهولة في الإنسان والحيوان

12. الإنسان

13. الحمى المجهولة الحادة • تشبه الأنفلونزا الحادّة. • فترة الحضانة: 1-3 أسابيعفترة دوام المرض: 1-3 أسابيع • معظم الحالات تحدث كعدوى مهنية • الأعراض: • ارتفاع مفاجئ في حرارة الجسم ورعشة • تصبّب العرق • صداع • فقد الشهية • آلام بالعضلات والصدر • سعال.

14. الحمى المجهولة المزمنة • تستمر فترة طويلة وهي أخطر من النوع الحاد. • الأعراض الرئيسة: • حمى طفيفة • تعرّق ليلي آلام مفصلية (متلازمة إلانهاك ) • التهاب تنبتي في صمامات القلب • تضخم الكبد والطحال • طفح جلدى (أحيانا) • أعراض عصبية (أحيانا)

15. الحيوانات الزراعية • المصدر الأساس لانتقال المرض إلي الإنسان. • العدوى في هذه الحيوانات غالباً لا تسبب أعراض. • أحياناً تسبّب في الحيوانات الزراعية: • اجهاض • التهاب المشيمة • التهاب الرحم وانخفاض الخصوبة • التهابات في الكبد، الرئة وغيرهما من الأعضاء الداخلية.

16. الحيوانات البرية • تصيب كوكسيلة الحمى المجهولة مئات الانواع من الحيوانات البرية • لها اهمية خاصة في ذوات الثدي الصغيرة كالفئران والأرانب والبندقوط • تصيب ايضا الطيور (البرية والمستأنسة)والزواحف والبرمائيات • عزلت ايضا من عدد من اللافقاريات

17. تصاب مشقوقات الحافر البرية بأنواع مختلفة من الركتسيات مثل ركتسية القلب المائي، وداء الحوصلة المرارية والحمى المجهولة. عزلت ركتسية الحمى المجهولة أو تم تشخيصها مصلياً في عدة أنواع من الغزلان والظباء والأيائل وسبّبت فيها أحيانا الإجهاض. شكلت هذه الحيوانات في بعض الحالات مصدر عدوى للحيوانات الزراعية والإنسان. ركتسيات الغزلان

18. الحمى المجهولة في الغزلان والظباء والأيائل

19. تابع الحمى المجهولة في الغزلان والظباء والأيائل

20. تابع الحمى المجهولة في الغزلان والظباء والأيائل

21. أهم طرق تشخيص الحمى المجهولة • عزل الميكروب في المختبر • اختبارات اللصف المناعي Immunofluorescence Assays (IFA) • الاختبارات المناعية الأنزيمية (اختبارات الادمصاص المناعي الإنزيمي) Enzyme linked Immunosorbent Assays (ELSA) • اختبار تثبيت المتممة (CFT) Complement Fixation Test • اختبار ويسترن المناعي (Western Immune Blotting) • الاختبارات المناعية الإشعاعية Radio–Immunoassays (RIA) • الاختبار البوليمراز التسلسلي Polymerase chain Reaction ( PCR)

22. الفصل الثانيالمواد وطرق العمل

23. أجريت الدراسة في مركز الملك خالد لأبحاث الحياة الفطرية وإنمائها بالثمامة قرب الرياض في وسط المملكة العربية السعودية. استخدم في المسح المصلي 555 رأس من غزلان الريم والأدمى والمها العربي. منطقة الدراسة

24. الأدمى من الغزلان الكبيرة ويصل ارتفاعه إلى 150سم ووزنه إلى 50 كج؛ قادر على تسلق الصخور والعيش في البيئات المرتفعة (الجبال والتلال) كما في السهول معالم وجهه بارزة ولون شعره أسمر الداكن – لذا سمي الإدمي ومعناها الأسمر تميل غزلان الإدمى للعيش بمفردها أو في قطعان صغيرة تتزاوج طيلة العام. غزال الأدمى (الغزال الجبلي)

25. يصل وزن الريم البالغ إلى حوالي 22 كيلوجرام ويوجد لدى الذكور قرنان منحرفان للخارج، أما الأنثى فعادة ليست لها قرون وإن وجدت فهي صغيرة ونحيفة. موسمية التزاوج ومدّة حملها حوالي 5 أشهر يكون موسم التزاوج في نهاية أكتوبر وبداية نوفمبر بينما تتم الولادات في أواخر مارس وبداية ابريل – أي في فصل الربيع. عادة ما تلد توائم. غزال الريم (الغزال الرملي)

26. يتميز المها العربي عن بقية البقريات بالقرون الطويلة ( 70-75 سم ) المستقيمة أو شبه المستقيمة والمائلة قليلاً إلى الخلف يبلغ ارتفاع الذكر البالغ حتى الكتف حوالي 90 – 120 سم ووزنه حوالي 100 كجم أو أكثر. العيون واسعة وجميلة والأنثى لها قرون مثل قرون الذكر. المها العربي (الوضيحى)

27. أعداد الحيوانات المستخدمة في الدراسة وبياناتها

30. جمع العينات • تم إمساك الحيوانات بواسطة مصيدة بوما. • وضع كل حيوان بمفرده في صندوق خشبي مناسب للحد من حركته والإمساك به لجمع العينات. • جمعت عينات مصل (5-10 مل) لاختبار (ELISA) من الوريد الودجي في أنابيب شفط خالية من مانعات التجلط. وتركت الأنابيب بوضع مائل ساعتين على الأقل في درجة حرارة الغرفة لفصل المصل بالطرد المركزي وحفظت العينات عند -20º م لحين اختبارها • جُمعت عينات دم كامل في أنابيب بها (EDTA) وعينات مصل من نسبة (sub-sample) من الحيوانات الإيجابية والسلبية لاختبار الحمى المجهولة لمعرفة تأثير العدوى على مكونات الدم المختلفة.

31. الاختبار الإنزيمي المناعي غير المباشر: (Indirect Enzyme immunosorbent assay) • استخدم الاختبار الإنزيمي المناعي (Enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA) غير المباشر لكشف الأجسام المضادة لكوكسيلة بيرنت في أمصال الحيوانات. • يستخدم في الاختبار جسم مضاد ثان مربوط مع أنزيم لاكتشاف الجسم المضاد الابتدائي النوعي (الجسم المضاد الأول أو لنوعي في عينة المصل) مع الميكروب المثبّت على طبق الاختبار. • يتميّز الاختبار بحساسيته (sensitivity) ونوعيته (specificity) العالية وسهولة إجراءه. • يمتاز علي الاختبار المباشر بالتالي: • توفر عدّة أنواع من الأجسام المضادة الثانوية المربوطة مع الأنزيمات تجاريا • إمكانية الكشف عن عدّة أنواع من الأجسام المضادة الابتدائية (الأولي؛ النوعي) بواسطة جسم مضاد ثانوي واحد • عدم الحاجة إلي ربط الجسم المضاد الابتدائي (النوعي) إلي الأنزيم مما قد يؤثر أحيانا علي قدرته علي الارتباط مع المستضد • إمكانية استخدام كاشفات (أنزيمات) مختلفة للكشف على الجسم المضاد الابتدائي. • يتطلب خطوة إضافية بالمقارنة مع الاختبار المباشر ونادراً ما يسبّب تفاعلات مشتركة (cross-reactions).

32. تغير اللون الجسم المضاد الثاني مرتبطاً مع الأول الركيزة الجسم المضاد الأول مرتبطا مع الميكروب الأنزيم

33. يتحوّل لون الركيزة إلي الأزرق في العينات الإيجابية يتحوّل اللون من الأزرق إلى الأصفر بعد لإضافة محلول إيقاف التفاعل

34. جهاز قراءة اختبار ELISA

35. حساب نتائج الاختبار الكثافة الضوئية للعينة – متوسط الكثافة الضوئية للشاهد السالب X 100 الكثافة الضوئية لمتوسط الشاهد الموجب ـ الكثافة الضوئية للشاهد السالب

36. استخدم جهاز (Coulter Counter ) لقياس أعداد كرات الدم الحمر والبيض ونسبة الهيموجلوبين ونسب وأعداد الكرات البيض المختلفة. تحليل عينات الدم الكامل للمكونات الخلوية

37. تم قياس حجم الكرات الحمر للبلازما ”الهيماتوكريت“ (packed cell volume) بواسطة (Hematocrit Centrifuge). تم حساب معايير الكرات الحمر الأخرى (MCV; MCH; MCHC) من نتائج أعداد الكرات وتركيز الهيموجلوبين والهيماتوكريت.

39. التحليل الكيميائي والبيوكيميائي للمصل • تم بواسطة باستخدام جهاز VetScan ( VS2) . • استخدم في التحليل قرص (PROFILEY) الذي يكشف عن التالي في مصل الدم: • الألبيومين أو زلال الدم (ALB) • البروتين الكلي (Total protein TP) • الجلوبيولين الكلي (Total globulin GLOB) • البليروبين الكلي Total bilirubin (TBIL) • نتروجين يوريا الدم Blood Urea Nitrogen (BUN) • الكرياتنين (Creatinie CRE) • الجلوكوز (GLU) • الشوارد الكهربية (+Na) و(+K) و(2+Ca) والفوسفات (P+). • يحتوى قرص الاختبار على حفر كل واحدة منها لتقدير أحد المواد المذكورة، حيث بتم وضع 100 ميكرولتر من عينة المصل في داخل القرص وتنتشر في أنحاء القرص ثم توضع الأقراص داخل جهاز VS2 الذي يقوم بعملية طرد المركزي ليتم التفاعل في خلال 10 ـ 15 دقيقة. • تم قراءة الامتصاص الضوئية للتفاعلات المختلفة وسجلت النتائج بواسطة مُسجل الكتروني.

40. جهاز التحليل الكيميائي والبيوكيميائي لمصل الدم

41. التحليل الإحصائي • استخدم اختبار مربع كاى لدراسة الاستقلالية بين نسبة الإصابة بالحمى المجهولة وكلاً من النوع والجنس والعمر. • تم حساب التوزيع التكراري لهذه العوامل وتقييم معاملات الارتباط بينها باستخدام طريقة سبيرمان (SAS 2000). • تم تحليل التباين بواسطة المعادلات الخطيّة العامّة في برنامج التحليل المتبع في نظام (Statistical Analysis Systems) لتحديد تأثير النوع والجنس والعمر على مكوّنات الدم الخلوية والكيميائية والبيوكيميائية. • تم تحديد الفروق المعنوية بين متوسطات هذه المكونات باستخدام اختبارات أقل فرق معنوي.

42. النتائج نتائج المسح المصلي لعدوى كوكسيلة الحمى المجهولة (كوكسيلة بيرنت) في الريم والأدمى والمها العربي

43. نسبة الإيجابية للأجسام المضادة للحمى المجهولة وتأثير العمر والجنس في غزال الريم * (p<0.05) X2 : مربع كاي

44. نسبة الإيجابية للأجسام المضادة للحمىالمجهولة وتأثير العمر والجنس في غزال الأدمى غ م: غير معنوي X2 : مربع كاي

45. نسبة الإيجابية للأجسام المضادة للحمىالمجهولة وتأثير العمر والجنس في المها * (p<0.05)

46. تأثير النوع على نسبة الحالات الايجابية لاختبار الحمى المجهولة ** (p<0.01)

47. تأثير الجنس على نسبة الحالات الايجابية لاختبار الحمى المجهولة ** (p<0.01)

48. العلاقة بين النوع والعمر في الحيوانات الايجابية * (p<0.05)

49. عناصر الدم الخلوية في الريم والأدمي المختبرة لكوكسيلة الحمى المجهولة

50. متغيرات سلسلة كرات الدم الحمر • العدد الكلي للكرات الحمر RBC • الهيموجلوبين HB • نسبة حجم الخلايا الحمر للبلازما (الهيماتوكريت) PCV (HCT) • متوسط هيموجلوبين الكرية الحمراء MCH • متوسط تركيز هيموجلوبين الكرية الحمراء MCHC