1 / 13

Présenté par: - Nathalie ROUSSEAU -Sarah MERAD - Adiza SEYDOU

Master MICROBIOLOGIE, ECOLOGIE Parcours Recherche « Ecologie Microbienne » Université Claude Bernard Lyon 1 Secrétariat : Batiment G.Mendel - 4éme étage 43 boulevard du 11 novembre 1918 69 622 VILLEURBANNE CEDEX Tél : 04 78 77 86 57 - Fax : 04 78 77 86 58

jadon
Télécharger la présentation

Présenté par: - Nathalie ROUSSEAU -Sarah MERAD - Adiza SEYDOU

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Master MICROBIOLOGIE, ECOLOGIE Parcours Recherche « Ecologie Microbienne » Université Claude Bernard Lyon 1 Secrétariat : BatimentG.Mendel- 4éme étage 43 boulevard du 11 novembre 1918 69 622 VILLEURBANNE CEDEX Tél : 04 78 77 86 57 - Fax : 04 78 77 86 58 Courriel : master2. ecomi@univ-lyon1.fr Présenté par: - Nathalie ROUSSEAU -Sarah MERAD -Adiza SEYDOU Identification des déterminants de virulence de Haemophilusducreyi responsable d’ulcére par la technique STM-Signature-TaggedMutagenesis -

  2. Introduction • Haemophilusducreyi(bacille de Ducrey) coccobacille, Gram – • sexuellement transmissible • chancre mou facteur favorisant la pénétration et transmission de VIH • Ulcérations génitales • Prostituées • Hommes++++ • Femmes ++

  3. Introduction Objectif Identifier in-vivo les facteurs de virulence responsables de la formation d'ulcères exprimés dans le génome d’H. ducreyipar technique STM.

  4. Matériels et méthodes • Souches utilisées: Haemophilusducreyisauvage 35000HP H. ducreyitransformée électroporation E-coli TOP10: cellule hôte clonage • Modèle animal: TDRM Temperature-dependentrabbit model

  5. Matériels et méthodes Signature-TaggedMutagenesis -STM- méthode de sélection négative But : détecter les gènes de virulence (ou gènes indispensables à l’infection) dans le génome bactérien • Technique : • Inactivation aléatoire de gènes grâce à des transposons • Comparaison in vitro/in vivo des souches sauvages et mutantes

  6. Matériels et méthodesPrincipe général

  7. Matériels et méthodes • Construction des STM • Construction du STM contrôle positif • Obtention des souches mutantes d’ H. ducreyi(pool de mutants) • Inoculation à l’animal • Comparaison « input » - « output » : PCR

  8. Clonage dans E.coli TOP 10

  9. Matériels et méthodes • Obtention des souches mutantes d’ H. ducreyi • Incorporation des plasmides construits dans H. ducreyipar électroporation • Insertion uniqueet aléatoire des transposons + tag dans génome bactérien  « Bibliothèques » de mutants : # 500 mutants • Mise en culture • Sélection des souches mutantes de croissance rapide (essais de compétition) : pool « input » = pool in vitro • Inoculation à l’animal  pool « output » = pool in vivo

  10. Inoculation à l’animal et comparaison des pool input et ouput

  11. Résultats et discussion Gènes virulents : • hgbA (contrôle positif) • hicB Gènes associés à une faible virulence : • dnaK • tdhA

  12. Conclusion Les gènes responsables de la pathogenèse d’H. ducreyipeuvent servir de cibles thérapeutiques potentielles pour le traitement du chancre mou.

  13. Merci pour votre attention

More Related