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竹荪 水溶性 多糖 的浸提工艺及其性质的研究

竹荪 水溶性 多糖 的浸提工艺及其性质的研究. 报告人： 巩贵丽 导师： 吴松海 副教授 报告日期： 2012.08.30. 1. 6. 5. 4. 3. 2. 主要内容. 研究背景. 研究内容 及意义. 研究方案. 实验方法. 课题创新点. 课题进展规划. 研究背景. 1 、简述. 竹荪是一种珍贵的食、药两用真菌，其 种类繁多。 其药材基原为竹荪的子实体。

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竹荪 水溶性 多糖 的浸提工艺及其性质的研究

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Presentation Transcript

  1. 竹荪水溶性多糖的浸提工艺及其性质的研究 报告人： 巩贵丽 导师： 吴松海 副教授 报告日期：2012.08.30

  2. 1 6 5 4 3 2 主要内容 研究背景 研究内容及意义 研究方案 实验方法 课题创新点 课题进展规划

  3. 研究背景 1、简述 竹荪是一种珍贵的食、药两用真菌，其种类繁多。其药材基原为竹荪的子实体。 竹荪多糖是具有高活性的大分子物质，在抗肿瘤、抗凝血、抗炎症、刺激免疫以及降血糖方面都有一定的疗效，对艾滋病也有抑制作用。短裙竹荪多糖具有一定的清除超氧阴离子自由基作用，可抑制人工细胞膜的脂质过氧化。

  4. 研究背景 1、竹荪多糖的研究情况 • Yaw-BeeKer等[1]从竹荪子实体中分离到竹荪多糖并研究了其结构特点和抗氧化能力 • AoxueLuo等[2]从竹荪子实体干品中分离得到竹荪多糖并研究了其体外自由基清除能力 • 林玉满等[3]从短裙竹荪子实体中分离到竹荪多糖Dd、Dd-S3P、Dd-2DE

  5. 研究背景 2.1 多糖的常用提取方法

  6. 研究背景 2.2 多糖的酶提取法

  7. 研究背景 3、优化设计方法

  8. 参考文献 [1] Yaw-BeeKeretal. Structural Characteristics and Antioxidative Capability of the Soluble Polysaccharides Present in Dictyophoraindusiata(Vent.ExPers.)Fish Phallaceae[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine,2011. [2] AoxueLuoetal. In vitro free radicals scavenging activities of polysaccharide from PolygonumMultiflorumThunb[J]. Medicinal Plants Research,2011,5(6)：966~972. [3]林玉满.短裙竹荪菌丝体多糖DdM-S提取及其性质[J].中国科学院上海冶金研究所 ,2000. [4] 张文超，蔡妙颜.金针菇子实体多糖提取最佳工艺研究[J].食用菌，2000，6（3）：5-9. [5] Hong Liu etal.Optimisation of Enzyme Assisted Extraction of Silybinfrom the Seeds of SilybumMarianumby Box–Behnken Experimental Design[J].PhytochemicalAnalysis，2009，20：475-483. [6] Tao Wangetal. Enzyme-enhanced extraction of antioxidant ingredients from red algae Palmariapalmata[J]. LWT - Food Science and Technology，2010，43：1387-1393. [7] 侯轩，周家容，田允波.复合酶法提取白术多糖的工艺研究[J].食品与发酵工业，2002，28（10）：45-48. [8]Jiao Zhang etal. Optimization of enzyme-assisted extraction of the Lyciumbarbarum polysaccharides using response surfacemethodology[J].Carbonhydrate Polymers，2001，86：1089-1092. [9]于淑娟.超声波酶法提取灵芝多糖的机理研究[J].华南理工大学学报，1998，26(2)：2. [10] 刘振学，黄仁和，田爱民 编著，实验设计与书籍处理.化学工业出版社，2005。 [11]C.F.Jeff Wu, Michael Hamada 著，张润楚译， Experiments planning analysis, and parameter design optimization，中国统计出版社，2003.

  9. 研究内容及意义 一、研究内容 • 利用复合酶法在一定条件下分别提取不同产地的三种竹荪的粗多糖 • 对提取的三种粗多糖进行得率的比较，以寻求得率最高的竹荪粗多糖 • 利用响应面法对该竹荪粗多糖的提取条件进行优化

  10. 研究内容及意义 一、研究内容 • 利用热水浸提法分别提取三种竹荪粗多糖 • 对复合酶法及热水浸提法得到的竹荪粗多糖进行抗氧化性的研究并分别对其进行横向和纵向的比较

  11. 研究内容及意义 二、研究意义 • 由于竹荪多糖的特殊活性作用，所以研究高效的竹荪多糖的提取条件具有重要意义。 • 对竹荪粗多糖进行体外抗氧化性的研究，并比较不同产地竹荪多糖的抗氧化性，对于预测多糖的药用活性方面具有重要意义。

  12. 研究方案 一、 竹荪（上海） 竹荪（福建） 竹荪（四川） 竹荪多糖的提取 （复合酶法） 从而获得同样提取条件下多糖得率最高的一种竹荪

  13. 1、单因素实验 研究方案 二、对上步得率最高的竹荪进行提取条件的优化 纤维素酶（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%） 木瓜蛋白酶（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、 2.5%） 复合酶量 的优化 果胶酶（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%） 2、正交实验（采用L9（34）表）

  14. 研究方案 二、 PH（3.5、4.0、4.5、5.0、5.5） 1、单因素实验 温度/℃（30、40、50、60、70） 浸提时间/min(30、60、90、120、150） 其他提取条件 的优化 2、响应面法——Box-Behnken 设计

  15. 研究方案 三、 竹荪（上海） 竹荪（福建） 竹荪（四川） 竹荪多糖的提取 （热水浸提法）

  16. 研究方案 四、 1、对DPPH自由基清除能力 测定所得竹荪粗多糖 的抗氧化性 2、对O2-·自由基的清除能力 3、还原能力的测试

  17. 实验方法 1、材料、试剂和仪器 (1) 主要材料和试剂 竹荪子实体、纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、葡萄糖 （2）主要仪器 粉碎仪、分析天平、紫外可见分光光度计、恒温水浴锅、 离心机

  18. 实验方法 提取液 乙醇醇沉 粗多糖 沉淀 2、多糖提取过程 +复合酶溶液 粉碎过目 竹荪子实体 竹荪粉末 冷冻干燥

  19. 多糖的水溶液 一定量的DPPH液 实验方法 3、多糖测定法 苯酚——硫酸法 以葡萄糖做标准曲线 4、DPPH自由基清除实验 避光反应30min 517 nm 处吸光度值

  20. 多糖的乙醇溶液 +2.5 ml 水 水溶反应20min 700 nm处A +0.5 ml FeCl3 (0.1%) PH 6.6；50℃ 实验方法 5、对O2-·的清除能力实验采用邻三苯酚自氧化法 6、测试还原能力的实验 2.5 ml 10% 三氰乙酸 2.5 ml 1%的 铁氰化钾

  21. 课题创新点 • 用复合酶提取三种竹荪多糖，并对三种竹荪多糖进行抗氧化性的比较。 • 用响应面法对竹荪多糖的提取条件进行优化。

  22. 课题进展规划 已完成的工作 • 苯酚——硫酸法所测标准曲线

  23. 不同浓度木瓜蛋白酶所提多糖得率

  24. 不同浓度果胶酶所提多糖的得率

  25. DPPH自由基清除能力的对比

  26. DNS显色法的标准曲线

  27. 准备毕业论文与答辩 13年02~06月 做抗氧化性实验 12年12~13年01月 撰写小论文 12年08~11月 做提取优化实验 • 近期规划 • 实验进展规划 单因素试验 正交实验 响应面法 14年01~05月 13年07~12月 补充数据

  28. 谢谢

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