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甜草化学成分研究. 答辩人：刘文基 指导教师：李厚金 副教授 中山大学有机所. 内容提要. 一、前言 二、研究目的 三、实验内容 四、实验结果 五、结论 致谢. 一、前 言. 甜草是我国南方的一种民间草药，是茜草科植物，在 《 江西草药 》《 中国草药大全 》 有其药用记载， “ 性平，味甘，有治疗黄疸型肝炎、糖尿病、外伤出血、清热解毒的功效 ” 。其叶子榨汁，可用于蜜蜂、黄蜂等蜂类的蛰伤，疗效显著。. 二、研究目的. 目前尚未见到关于甜草 Oldenlandia cantonensis How 的研究报告。甜草化学成分的研究可发现新的具有药用价值的化合物。.
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甜草化学成分研究 答辩人：刘文基 指导教师：李厚金 副教授 中山大学有机所
内容提要 • 一、前言 • 二、研究目的 • 三、实验内容 • 四、实验结果 • 五、结论 • 致谢
一、前 言 甜草是我国南方的一种民间草药，是茜草科植物，在《江西草药》《中国草药大全》有其药用记载，“性平，味甘，有治疗黄疸型肝炎、糖尿病、外伤出血、清热解毒的功效”。其叶子榨汁，可用于蜜蜂、黄蜂等蜂类的蛰伤，疗效显著。
二、研究目的 目前尚未见到关于甜草Oldenlandia cantonensis How的研究报告。甜草化学成分的研究可发现新的具有药用价值的化合物。
三、实验内容 （一）甜草的采集与提取 原料甜草，2004年7月份采集于江西省地区的向阳山坡，取地上全草，收集后晒干剪碎，用95%乙醇多次浸泡，合并浸泡液，用旋转蒸发仪浓缩至干，浓缩物再用甲醇溶解，溶解液拌硅胶。硅胶拌样后吹干进行下一步分离操作。
三、实验内容 （二）分离提纯 实验用柱层析，薄层层析，以及重结晶的方法分离提纯甜草中的化学成分。用GCMS，紫外光谱法，红外光谱法，质谱法，核磁共振等方法分析确定甜草化学成分。
将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态，进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱，然后依次用PE:EA=10:1， 5:1， 3:1， 2:1， 1:1， 1:2， 1:3溶液梯度冲洗柱子。对初次柱层析得到的溶液进行再次的柱层析分离操作。用重结晶方法对化合物进一步提纯，分离得到的低极性成分用GCMS分析，中等极性成分中得到四个化合物成分（A，B，C，D）。
四、实验结果 表1 甜草Oldenlandia cantonensis How的低极性成分及相对含量 低极性成分分析,液体油状物用氯仿溶解，进行GC-MS分析。
中等极性成分分析 共分离得到4个纯化合物，分别为十二碳脂肪酸，谷甾醇，2个三萜化合物，其中1个三萜是新的化合物。2个三萜化合物活性显著,对人肝癌细胞株Bel-7402的IC50值分别为6.5g/ml，7.0g/ml ，对人胃腺癌细胞株Mcg-803的IC50值分别为8.0g/ml，7.0g/ml。
化合物A为浅白色奶油状固体，微加热即融化，1H-NMR（CDCl3,TMS,ppm)：7.223，3.634，2.340，2.316，2.291，2.272，2.246，1.277，1.232，1.144，1.123，0.877，0.855，0.832，0.810。化合物A为浅白色奶油状固体，微加热即融化，1H-NMR（CDCl3,TMS,ppm)：7.223，3.634，2.340，2.316，2.291，2.272，2.246，1.277，1.232，1.144，1.123，0.877，0.855，0.832，0.810。 A红外光谱，IR/cm－1（KBr）：3448，2920，2851，2366，2342，1740，1652，1545，1463，1438，1378，1172。 鉴定A为十二碳脂肪酸。
化合物B，白色粉末固体，1H-NMR（CD3COCD3，TMS，ppm）：5.226，5.215，2.793，2.057，2.049，1.293，1.171，1.128，0.988，0.969，0.952，0.943，0.918，0.898，0.884，0.865，0.839，0.810，0.783。化合物B，白色粉末固体，1H-NMR（CD3COCD3，TMS，ppm）：5.226，5.215，2.793，2.057，2.049，1.293，1.171，1.128，0.988，0.969，0.952，0.943，0.918，0.898，0.884，0.865，0.839，0.810，0.783。 IR/cm－1（KBr）：3421，2927，1690，1651，1574，1456，1407，1273，1185。通过数据比较确定其为谷甾醇。
化合物C，白色固体，可结晶成透明针状晶体。 1H-NMR（CD3COCD3，TMS，ppm）：7.981，5.222，5.208，5.197，2.794，2.250，2.213，2.045，1.957，1.943，1.933，1.922，1.902，1.891，1.168，1.125，0.982，0.964，0.949，0.937，0.914，0.894，0.870，0.835，0.777。 IR/cm－1（KBr）：3428，2927，2856，2337，1736，1689，1632，1574，1458，1404，1385，1274，1254，1170，1107，1042，997。 此化合物比较复杂，为三萜类化合物，结构确定工作尚在进行中。
位置编号 DEPT 13C NMR 1H NMR 1 CH2 38.2 1.54 2 CH2 23.7 1.50, 1.91 3 CH 76.8 3.00 4 C 38.3 —— 5 CH 54.7 0.66 6 CH2 26.9 1.46 7 CH2 32.6 1.57 8 C 46.7 —— 9 CH 46.9 1.45 10 C 41.6 —— 11 CH2 22.7 1.86 12 CH 124.5 5.13 13 C 138.1 —— 14 C 41.5 —— 15 CH2 27.5 1.80 16 CH2 17.9 1.46, 1.30 17 CH2 32.6 1.25,1.43 四、实验结果 表2 化合物D的NMR数据(DMSO-d6, TMS, 500MHz)
18 CH 52.3 2.11 19 CH3 15.9 0.68 20 CH3 28.1 0.90 21 CH3 15.1 0.87 22 CH3 16.9 0.76 23 CH3 23.2 1.04 24 CH 38.3 0.94 25 C 178.1 —— 26 CH2 30.0 1.42 27 CH 38.4 0.95 28 CH3 16.8 0.82 29 CH3 20.9 0.92 3-OH —— 4.15 25-COOH —— 11.8 分子式为 C29H48O3, FABMS：m/z 445[M+1]+，相对分子量为444。元素分析结果：C, 78.33; H, 10.90; N, 0.000。IR（KBr）：3420, 2970, 2928, 2871, 1693, 1575, 1455, 1407, 1313, 1279, 1249, 1142, 1091, 1032, 996, 758, 661, 568。
化合物D 的结构： 新化合物
对化合物D衍生物制备 将D与苯甲酸反应 +
产物编号 结构 产物来源 IC50 （μg/mL） C 三萜类 甜草 18 D 三萜 甜草 15 对化合物C，D进行药理测试得到以下结果。 表3 对拓扑异构酶（hTOP I ）的IC50测定结果
产物编号 产物编号 结构 结构 产物来源 产物来源 IC50 （μg/mL） IC50 （μg/mL） C C 三萜类 三萜类 甜草 甜草 6.5 8.0 D D 三萜 三萜 甜草 甜草 7.0 7.0 表4 对肝癌细胞株Bel-7402的IC50值测定结果 表5 对人胃腺癌细胞株Mcg-803的IC50值测定结果
五、结论 实验成功分离到预期的化合物，并对化合物的种类及结构进行了鉴定。 对分离所得到的2个三萜类化合物进行了结构鉴定， 确定其中1个化合物结构式，为新化合物，另外1个还在测定过程中。 同时对2个三萜类化合物进行了药理测试，得到明显的药理效果。确定甜草中具有抗肿瘤活性的三萜类化合物。对这些化合物进行深入的药理研究，有助于抗肿瘤药物的发明。
致 谢 • 本实验是在李厚金副教授的亲自指导下完成的。在实验中碰到不少困难，李老师都耐心仔细的给予指导，引导我从实验中发现问题、分析问题和解决问题。致诚挚的感谢！ • 同时也得到实验室其他师兄、师姐的帮助，在此一并向他们表示感谢。 • 谢谢朋友给我的支持与帮助。
