Sa vremene mikrobiološke metode kontrole hrane

1. Savremene mikrobiološke metode kontrole hrane

2. Hrana kao predmet analize • Poseduje velike varijacije u hemijskom sastavu • Sadrži veliki broj ingredijenata • Može da sardrži specifičnu mikrofloru

3. Mikrobiološke metode mogu biti podeljene na “tradicionalne”ili klasične i savremene brze metode!

4. Klasične metode u mikrobiologiji su: • Spore • Zahtevaju dosta materjala • Zahtevaju radno angažovanje • Nisu uvek pogodne za odredjivanje kvaliteta i roka trajanja Zato razvoj i primena brzih novih metoda postaje imperativ!

5. Moderne metode • Prednost u skraćenom periodu analize • Mogućnost da se smanji manuelno angažovanje • Mogućnost automatizacije • Medjutim vreme inkubacije ostaje nepromenjeno • ELISA, PCR i ATP metode su dominantne • Evidentan je nedostatak postupaka validacije • Većina nije prihvaćena kod zvaničnih provera

6. Kriterijumi validnosti metode • Preciznost:stepen slaganja izmedju individualnih rezultata testova • Specifičnost: sposobnost da se odredi specifičan mikroorganizam u odredjenom uzorku • Linearnost:sposobnost brojanja mikroorganizama koja je direktno prorcionalna broju u uzorku • Opseg:donje i gornjevrednosti broja mikroorganizama • Limiti detekcije: najmanji mogući broj • Reproducibilnost:stepen reproducibilnost u zavisnosti od uslova testiranja-različita oprema, različito osoblje, različite laboratorije • Primenljivost :pogodnost metode da ne bude pod uticajem promena u pogledu promene sastava medija, reagensa i uslova inkubacije.

7. Since 1998, the market value for food microbiology testing has grown significantly, and has had an annual growth rate of 8.7%. Based on SCI research, the food microbiology testing market is expected to grow to 969.2 million tests in 2013 with a market value approaching $2.4 billion, which represents a projected annual growth rate of 5.6% in testing volume. Source: Strategic Consulting, Inc.Posted: October 7, 2008

8. Nonetheless, in 2008 traditional methods still account for approximately 58% of the microbiology tests performed worldwide in the food market. The rapid micro counterparts (including convenience-based, immunoassay-based, and molecular-based methods) account for 42%, amounting to 307 million tests. Importantly though, over the past 3 years, food micro tests utilizing rapid methods have increased by 37% and are up from 224 million tests in 2005. During this same 3-year period the growth in total testing increased only 18%. So, the growth rate of rapid methods is more than twice that of the growth in testing.

9. Since 1998 the market value for food microbiology testing has grown significantly and has had an annual average growth rate of 9.2%. However, as food processing companies have characterized their plants for microbiology issues, made process improvements, changed production practices, increased employee training, and generally become much more proactive, the rate of growth in microbiology testing has normalized. In fact, during the past year the market value for food microbiology testing grew at only a 6.8% rate. Source: Strategic Consulting, Inc.Posted: October 20, 2005

10. Odredjivanje ATP • Brza metoda kojom se odredjuje čistoća površina u pogonu • Rezultati se dobijaju u toku 1 min. čime se pruža mogućnost za korektivne mere • Nisu potrebne posebne prostorije • Test je jednostavan tako da ga svako može izvesti

11. Šta se meri Nečistoća Mikroorgsnizmi= ATP Ostaci hrane = ATP Slobodni ATP

12. Uticaj postupka sa uzorkom na ATP rezultate

13. ATP "Pogonsko gorivo" ćelije Šta je ATP? Adenosin trifosfat je jedinjenje koje e nalazi u svakoj biljnoj i animalnoj ćeliji, u ćelijama mikroorganizama, kao i u hrani i ostacima hrane

14. ATP je prisutan u svim živim ćelijama • Prisustvo ATP može da ukažena: • život (sve od ljudi do mikroorganizama) • Izvor hranljivih sastojaka Nedostak ATP = nedostatak života ili izvora hrane Nedostak ATP znači da je površina ČISTA

15. ATP Bioluminiscencija + LUCIFERIN LUCIFERASE ATP Reakcija se zove BIOLOUMIniscencijai meri se u RELATIVE LIGHT UNITS (RLU)

16. ‘Other’ ATP Microbial ATP ATP Bioluminescence Technology CFU / ATP correlation Nije selektivna samo za mikrobni ATP CFU RLU With pure culture of micro-organisms, without other residues, RLU correlate well with CFU With these typical proportions of ATP on a swab RLU does not correlate with CFU but with “cleanliness”

17. 1. Swab 2. Activate 3. Read Luminometar

20. 1. Swab 2. Activate 3. Read

24. Protočna citometrija Kombinacija fluorescentne mikroskopije i biohemijske analizeu cilju merenja mikroorganizama u tečnostima Fizička svojstva (veličina ćelije, oblik, unutrašnja gradja) ićelijske funkcije mogu biti detektovane florescetnom bojom Metoda je brza i osetljiva! Kod većih volumena ima problema Koristi se u prehrambenoj industriji za detekcijuListeria and E. coli, kvasaca i plesni kod mlečnih proizvoda

26. Foss Bactoscan

27. Merenje impedancije Impedance measurement, which can be used to detect small electrical variations and detect the presence of microorganisms long before a colony is visible in the culture, is the principle of the Bactometer test. The molecules of the culture medium (proteins, carbohydrates, etc.), which are electrically neutral or slightly ionized, are transformed by the action of the microorganisms into several molecules with higher mobility and electrical charge (amino acids, lactate, etc.). These modifications can be measured between two electrodes in the culture medium.

28. Brza i jednostavna mikrobiološka kontrola higijene površina i ispiraka

29. Petrifilm™

33. Hromogene i fluorogene podloge • sadrže enzimske substrate povezane sa hromogenom (bojena reakcija), fluorogenom (svetlosna reakcija) ili kombinovano • enzimski substrati su specifični za pojedine mikroorganizme kao ONPG, CPRG, and MUG. • ispitivana populacija se karakteriše putem enzimskog sistema koji metabolizuje substrat pri čemu dolazi do promene boje podloge ili pojave flurescencije pod uticajem UV svetlosti • period inkubacije je kraći a neki put je test dovoljan za determinaciju • promena temperature može da unapredi selektivnost

36. MicroFoss™

38. Automatski brojači kolonija Celsis cell scan inovate za UHT mleko

39. Indirektna metoda • Nije potrebno razredjenje • Pripremi ploču s agaromrotateplate gradually • Nanesi uzorak • Spiral plate count (SPLC) • Prebroj kolonoje na označenom prostoru 25-250 CFU

41. Dali su značajne brze mikrobiološke metode