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Vettori e clonaggio

Vettori e clonaggio. Clonaggio di un frammento di DNA = = produzione di molte copie identiche del frammento di DNA. Vettori e clonaggio. Il frammento di DNA viene inserito in una molecola-vettore che può replicarsi quando è inserita in una cellula ospite, di solito un batterio.

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Vettori e clonaggio

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Presentation Transcript

  1. Vettori e clonaggio Clonaggio di un frammento di DNA= =produzione di molte copie identiche del frammento di DNA

  2. Vettori e clonaggio Il frammento di DNA viene inserito in una molecola-vettore che può replicarsi quando è inserita in una cellula ospite, di solito un batterio

  3. Vettori e clonaggio -Enzimi di restrizione -DNA ligasi -Vettori

  4. Vettori e clonaggio Sistema di restrizione/metilazione del DNA

  5. Vettori e clonaggio Frammenti di restrizione del DNA genomico di adenovirus 2

  6. Vettori e clonaggio Reazione ligasica di frammenti di restrizione

  7. Vettori e clonaggio Vettori Plasmidi Fagi Cosmidi YACBAC

  8. Vettori e clonaggio Plasmide Molecola circolare di DNA a doppio filamento, normalmente presente nella cellula batterica, in grado di replicarsi autonomamente dal cromosoma.

  9. Vettori e clonaggio

  10. Vettori e clonaggio Replicazione di un plasmide

  11. Vettori e clonaggio Clonaggio di un frammento di DNA in un plasmide

  12. Vettori e clonaggio Formazione di un plasmide ricombinante

  13. Vettori e clonaggio Il marker di selezione permette permette di selezionare le cellule batteriche contenenti il plasmide

  14. Vettori e clonaggio Clonaggio in un plasmide e selezione su un terreno contenente un antibiotico

  15. Vettori e clonaggio La possibilità di selezionare i batteri trasformati è molto importante perché la trasformazione batterica è un processo poco efficiente

  16. Vettori e clonaggio Clonaggio di diversi frammenti di DNA in un plasmide

  17. Vettori e clonaggio Regione di clonaggio (=polylinker): regione che contiene una copia di diversi siti di restrizione

  18. Vettori e clonaggio

  19. Vettori e clonaggio Lunghezza massima del DNA clonabile in un plasmide: circa 20 Kb

  20. Vettori e clonaggio I virus sono piccoli parassiti non in grado di replicarsi. Dopo aver infettato una cellula-ospite utilizzano i suoi sistemi di replicazione e sintesi delle proteine per riprodursi

  21. Vettori e clonaggio I batteriofagi (o fagi) sono virus che infettano i batteri.

  22. Vettori e clonaggio Ciclo litico del fago T4

  23. Vettori e clonaggio Il fago più utilizzato in biologia molecolare è il fago 

  24. Vettori e clonaggio Ciclo litico e lisogenico del fago 

  25. Vettori e clonaggio Assemblaggio di un fago 

  26. Vettori e clonaggio Mappa del genoma del fago 

  27. Vettori e clonaggio Clonaggio di frammenti di DNA nel fago 

  28. Vettori e clonaggio Formazione di cloni fagici

  29. Vettori e clonaggio L’infezione dei batteri con il fago  è circa 103 volte più efficiente della trasformazione con un plasmide

  30. Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in un fago: 20-25 Kb

  31. Vettori e clonaggio Un cosmide è un plasmide contenente la sequenza COS dal fago 

  32. Vettori e clonaggio

  33. Vettori e clonaggio Clonaggio di frammenti di DNA in un cosmide

  34. Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in un cosmide: circa 45 Kb

  35. Vettori e clonaggio YAC=yeast artificial chromosome

  36. Vettori e clonaggio Dimostrazione sperimentale degli elementi funzionali di un cromosoma

  37. Vettori e clonaggio Vettore YAC: sequenze ARS CEN TEL

  38. Vettori e clonaggio

  39. Vettori e clonaggio Lunghezza del DNA clonabile in uno YAC: fino a 1000 Kb

  40. Vector Type Cloned DNA (kb) Vettori e clonaggio Approximate Maximum Length of DNA That Can Be Cloned in Vectors 20 Plasmid 25 λ phage 45 Cosmid 100 P1 phage 300 BAC (bacterial artificial chromosome) 1000 YAC (yeast artificial chromosome)

  41. Vettori e clonaggio Vettore di espressione

  42. Vettori e clonaggio

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