1 / 14

Lehrerfortbildung Juli 2011

Lehrerfortbildung Juli 2011. Schülerversuch Geninduktion am Beispiel des lac-Operons von E.coli Prof. Dr. Andreas Beyer cand. stud. Yvonne Floer cand. stud. Karina van den Broek

lyneth
Télécharger la présentation

Lehrerfortbildung Juli 2011

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Lehrerfortbildung Juli 2011 Schülerversuch Geninduktionam Beispiel des lac-Operons von E.coli Prof. Dr. Andreas Beyer cand. stud. Yvonne Floer cand. stud. Karina van den Broek Ein Schul-tauglicher Versuch zur Untersuchung genetischer Regulation bei Bakterien: – Induktion und Repression –

  2. Das lac-Operon Lac tose RNA -Pol CAPbs Promotor Operator lacZ lacY lacA Term lacZ,Y,A-mRNA Gal + lac-Permease ßGal trans-Ac Glc

  3. Das lac-Operon: Der Repressor lacZ,Y,A-mRNA lac-Permease ßGal trans-Ac RNA -Pol Promotor lacI Term lacI-mRNA LacR RNA -Pol CAPbs Promotor Operator lacZ lacY lacA Term

  4. Das lac-Operon: Der Repressor lacZ,Y,A-mRNA lac-Permease ßGal trans-Ac Lac tose RNA -Pol Promotor lacI Term lacI-mRNA LacR RNA -Pol CAPbs Promotor Operator lacZ lacY lacA Term

  5. Das lac-Operon: Glc-Repression lacZ,Y,A-mRNA lac-Permease ßGal trans-Ac Lac tose RNA -Pol Promotor cAMP-RP Term cAMP CRP-mRNA CRP RNA -Pol RNA -Pol CAPbs Promotor Operator lacZ lacY lacA Term LacR

  6. Regulation des lac-Operons • negatives Regulations-Element im Promotor:lacR bindet an Operator  blockiert Transkription in Abwesenheit vom LaktoseInduktor Laktose bindet an lacR LacR kann nicht mehr binden, Transkription ist entblockt • positives Regulations Element im Promotor:aAMP-CRP komplex bindet an CRP-Bindestelle Transcriptionslevel wird erheblich gesteigert (Mechanismus der Katabolit-Repression)

  7. Regulation des lac-Operons Lac tose lac-Operon CAPbs Promotor Operator lacZ lacY lacA Term LacR X X ++ ++ CRP cAMP Transkription des lac-Operons

  8. Das Versuchsprinzip lacZ  ß-Gaslactosidase als Reporter:Quantifizierung des Aktivitätsstatus‘ des lac-Operons über Aktivitätsmessung der ß-Gal. via Chromogen:proportionale Umsetzung von oNPG durch das Enzym Quelle: chemgapedia

  9. Vorversuch: Wachstumskinetik Extinktion Zeit t in Minuten

  10. Vorversuch: Wachstumskinetik  Glycerin verworfen

  11. Setup des Versuchs • E.coli H3000: intaktes lac-Operon • Sicherheitsstamm (keine S-Stufe!) • frische Übernacht-Kultur Standard-Medium LB • 1:5 Verdünnung mit div. C-Quellen (Kinetik über 1h): • nur LB • Glucose • Laktose • Glucose + Laktose • Zentrifugation, Zellaufschluss • Zugabe von oNPG  definierte Zeit  Stopp • optische Auswertung (semiquantitativ) • Analyse: Korrelation mit den C-Quellen

  12. Setup des Versuchs 1:5 Verdünnung bei t=0 E.coli H3000: frische Übernacht-Kultur (Standard-Medium LB) • nur LB …+Glc …+Lact …+Glc +Lakt Probennahme alle 20min Farb-test Zellaufschluss (Lysozym)

  13. Ergebnis

  14. semiquantitative Auswertung (Semi-)Quantifizierung mit Photoshop

More Related