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CONTROL CON MICROONDAS DE Fusarium oxysporum f. sp. melonis. JUSTIFICACIÓN DEL TRABAJO. Fusarium oxysporum f. sp. melonis ataca al melón produciendo una enfermedad conocida como “Fusariosis vascular”, “Marchitez vascular” o “Traqueomicosis” 1.- Distribución geográfica de la enfermedad
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JUSTIFICACIÓN DEL TRABAJO Fusarium oxysporum f. sp. melonis ataca al melón produciendo una enfermedad conocida como “Fusariosis vascular”, “Marchitez vascular” o “Traqueomicosis” 1.- Distribución geográfica de la enfermedad 2.- Importancia económica de la enfermedad 3.- Necesidad de investigación de nuevos métodos de control dada la limitaciones de los ya existentes. 4.- Posibilidad de utilización del microondas como método de control
Cuadro 1. Producción y superficie destinada al cultivo de melón en España
Parte experimental I:Estudio de lainfluencia del tratamiento térmico con microondas sobre la viabilidad del inóculo de F. oxysporum f. sp. melonis. Parte experimental II: Estudio de lainfluencia del tratamiento térmico con microondas sobre la patogenicidad de F. oxysporum f. sp. melonis en plántulas de melón. Parte experimental III: Estudio de lainfluencia del tratamiento térmico con microondas sobre la viabilidad del inóculo de F. oxysporum f. sp. melonis en substratos infestadosy comparar la efectividad del tratamiento cuando varía el grado de humedad del substrato. Parte experimental IV: Estudio de lainfluencia del tratamiento con microondas sobre un substrato que contiene clamidosporas de F. oxysporum f. sp. melonis. OBJETIVOS
Se estudió la influencia del tratamiento con microondas sobre la viabilidad de conidias de Fusarium oxysporum f. sp. melonis raza 2 en suspensiones acuosas Se realizaron dos ensayos Ensayo 1: 105 conidias/ml (concentración de la suspensión acuosa) Ensayo 2: 5·105 conidias/ml (concentración de la suspensión acuosa) PARTE EXPERIMENTAL I
Incremento del inóculo Tratamiento térmico con microondas Viabilidad del inóculo MÉTODO
Figura 1.- Filtrado de la suspensión de inóculo de Fusarium oxysporum f. sp melonis raza 2.
10 ml suspensión ajustada en cada tubo de ensayo de 30ml de capacidad Se realizan 15 tratamientos distintos: Tiempos: 1 minuto, 3 minutos, 6 minutos, 9 minutos y 12 minutos. Potencia: baja potencia (100w), media potencia (500w) y alta potencia (1000w). MÉTODO :Tratamiento térmico con microondas
Método de las diez diluciones Las placas inoculadas se mantienen en estufa a 27ºC Conteo diario del nº de u.f.c. que aparecen en cada una de las placas MÉTODO :Viabilidad del inóculo
1 ml Así sucesivamente hasta realizar 10 diluciones 1 ml DILUCIÓN 3 1 ml DILUCIÓN 2 MÉTODO DE LAS DIEZ DILUCIONES DILUCIÓN 1
ENSAYO I EFICACIA DE LOS DISTINTOS TRATAMIENTOS CON MICROONDAS SOBRE LA VIABILIDAD Fusarium oxysporum f. sp. melonis Raza 2EN SUSPENSIONES ACUOSAS
ENSAYO I RESUMEN DEL ANÁLISIS ESTADÍSTICO
ENSAYO II EFICACIA DE LOS DISTINTOS TRATAMIENTOS CON MICROONDAS SOBRE LA VIABILIDAD Fusarium oxysporum f. sp. melonis Raza 2EN SUSPENSIONES ACUOSAS
ENSAYO II RESUMEN DEL ANÁLISIS ESTADÍSTICO
COMPARACIÓN DE LA EFICACIA DEL TRATAMIENTO A BAJA POTENCIA (100W) CON MICROONDAS SOBRE LA VIABILIDAD DEL INÓCULO DE Fusarium oxysporum f. sp. melonis RAZA 2EN SUSPENSIONES ACUOSAS
1.- El tratamiento térmico con microondas reduce la viabilidad del inóculo de Fusarium oxysporum f. sp. melonis Raza 2. 2.- Los tratamientos durante 1 minuto y 3 minutos a baja potencia produce ya una reducción de la viabilidad del inóculo del hongo. CONCLUSIONESPARTE EXPERIMENTAL I
3.- En los tratamientos de 1 y 3 minutos a media y alta potencia, así como en los de 6, 9 y 12 minutos (baja, media y alta potencia) se consigue la erradicación del inóculo. 4.- La eficacia obtenida en los tratamientos de 1 y 3 minutos a baja potencia depende de la concentración del inóculo, ya que en el Ensayo 1 en el que el inóculo tiene menor concentración la eficacia obtenida es mayor que en el Ensayo 2. CONCLUSIONESPARTE EXPERIMENTAL I
Estudio de la influencia del tratamiento con microondas sobre la patogenicidad de Fusarium oxysporum f. sp. melonis raza 2 en plántulas de melón Amarillo Canario PARTE EXPERIMENTAL II
Incremento del inóculo Siembra de plántulas Tratamiento térmico con microondas Inoculación de las plántulas Evaluación de síntomas MÉTODO
-Temperatura: 27ºC 3ºC -Humedad relativa: 75 20% -Régimen luminoso:16 horas/día (cantidad de luz expulsada:450 mol E m-2s-1) CONDICIONES DE LA CÁMARA DE AMBIENTE CONTROLADO
Figura 2: Plántulas de melón Amarillo Canario en la Cámara de ambiente controlado.
SEVERIDAD DE LA FUSARIOSIS VASCULAR EN PLÁNTULAS DE MELÓN AMARILLO CANARIOINOCULADAS CON CONIDIAS DE Fusarium oxysporum f. sp. melonisA LOS 17 DIAS DEL TRATAMIENTO
Nº DE PLÁNTULAS CON SÍNTOMAS DESPUÉS DE HABER SIDO INOCULADAS CON Fusarium oxysporum f. sp. melonis EN SUSPENSIÓN ACUOSA TRATADO A BAJA POTENCIA DURANTE 0´,1´,3´,6´,9´Y 12
Nº DE PLÁNTULAS CON SÍNTOMAS DESPUÉS DE HABER SIDO INOCULADAS CON Fusarium oxysporum f. sp. melonis EN SUSPENSIÓN ACUOSA TRATADO A MEDIA POTENCIA DURANTE 0´,1´,3´,6´,9´Y 12
Nº DE PLÁNTULAS CON SÍNTOMAS DESPUÉS DE HABER SIDO INOCULADAS CON Fusarium oxysporum f. sp. melonis EN SUSPENSIÓN ACUOSA TRATADO A ALTA POTENCIA DURANTE 0´,1´,3´,6´,9´Y 12
GRADO DE ATAQUE DE LA ENFERMEDAD
PORCENTAJE DE GRADO DE ATAQUE DE Fusarium oxysporum f. sp. melonis RAZA 2 EN PLÁNTULAS DE MELÓN
PORCENTAJE DE GRADO DE ATAQUE DE Fusarium oxysporum f. sp. melonis RAZA 2 EN PLÁNTULAS DE MELÓN
1.- El tratamiento térmico con microondas reduce la viabilidad del inóculo de Fusarium oxysporum f. sp. melonis Raza 2, consiguiéndose una mayor reducción de la incidencia de la severidad de la enfermedad en aquellos tratamientos en los que la potencia y el tiempo de exposición es más elevado. CONCLUSIONESPARTE EXPERIMENTAL II
2.- Los tratamientos de 1 minuto y 3 minutos a baja potencia consiguen reducir la patogenicidad del hongo, siendo esta reducción mayor en el tratamiento a 3 minutos baja potencia. 3.- En todos los tratamientos a media y alta potencia el grado de ataque es del 0%, con lo que el hongo pierde totalmente su patogenicidad. CONCLUSIONESPARTE EXPERIMENTAL II
Estudio de la influencia del tratamiento térmico con microondas sobre la viabilidad de F. oxysporum f. sp. melonis raza 2 en diferentes substratos: PARTE EXPERIMENTAL III
S1= Turba rubia:arena (1:1), mojada S2= Turba rubia:arena (1:1), en seco S3= Turba rubia, mojada S4= Turba rubia, en seco S5= Turba rubia: turba negra: perlita: vermiculita (61:24:7,5:7,5), mojada S6= Turba rubia: turba negra: perlita: vermiculita (61:24:7,5:7,5), en seco PARTE EXPERIMENTAL III
Incremento del inóculo Infestación del substrato Tratamiento con microondas del substrato infestado Viabilidad del inóculo MÉTODO
Método: Infestación del substrato • El substrato es esterilizado en autoclave durante 2 días seguidos aplicando cada día 121ºC, 1kg/cm2 de presión, durante 60 minutos. • Se introduce el substrato en “minibandejas” de 6 alvéolos de poliestireno expandido. • Se procede a la infestación del substrato. • En cada bandeja tratada se dejan 2 alvéolos sin inocular, que sirvieron como testigo sin inóculo, tratándolo de la misma manera que los alvéolos infestados. • Además del testigo sin inóculo se infestó una bandeja con substrato con la misma cantidad de suspensión, dejándolo sin tratar con microondas, para así poder determinar la eficacia del tratamiento, mediante comparación con la cantidad de inóculo superviviente en cada una de las pruebas.
Substrato 1 • Tipo substrato: Turba rubia:arena (1:1 en v), mojada • Cantidad de inóculo/alvéolo: 5·106 conidias/alvéolo • Peso substrato seco/alvéolo: 34gr • Concentración de la suspensión: 5·105 conidias/ml • Cantidad de suspensión ajustada/alvéolo: 10ml • Agua destilada esterilizada/alvéolo: 1,22ml • Peso substrato mojado/alvéolo: 45,22 gr • Humedad: 33%
Substrato 2 • Tipo substrato: Turba rubia:arena (1:1 en v), seca • Cantidad de inóculo/alvéolo: 5·106 conidias/alvéolo • Peso substrato seco/alvéolo: 34gr • Concentración de la suspensión:106 conidias/ml • Cantidad de suspensión ajustada/alvéolo: 5ml • Peso substrato después de la inoculación con la suspensión: 39 gr/alvéolo • Humedad después de la inoculación: 15%