1 / 27

PRINSIP DASAR & METODE KULTUR JARINGAN HEWAN

PRINSIP DASAR & METODE KULTUR JARINGAN HEWAN. Tim Biologi Unair. Kultur jaringan hewan : budidaya jaringan dalam media kultur sehingga mampu tumbuh dan membelah Kultur jaringan merupakan upaya memanfaatkan sifat totipotensi sel secara in vitro. Media Kultur Jaringan Hewan.

noelani-jeremiah
Télécharger la présentation

PRINSIP DASAR & METODE KULTUR JARINGAN HEWAN

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. PRINSIP DASAR & METODE KULTUR JARINGAN HEWAN Tim BiologiUnair

  2. Kulturjaringanhewan: budidayajaringandalam media kultursehinggamamputumbuhdanmembelah • Kulturjaringanmerupakanupayamemanfaatkansifattotipotensiselsecara in vitro

  3. Media KulturJaringanHewan • Optimalisasi media: meliputi pH, tekanan, sumberenergidansumberkarbon, asam amino, vitamin, mineral dan air. • Media dasartersusun: asam amino, asamlemak, glukosa, ion, vitamin danko-faktor ,dll. Misalnya: • Serum • Aditif : antibiotikpenisilindansteptomycin , antifungi: fungizone0,5%, danMercapto Ethanol • Sistempenyangga : sodium bikarbonat • Berdasarkanasalnya, dibagimenjadi 2, yaitu: • Media alami, yaitu media yang berasaldaricairanjaringanembriodan medium plasma darah • Media sintetik, yaitu media yang dibuatsecarakimia, misalnya: MEM, RPMI

  4. Media alami: Plasma darah • Komponenterbesar (90%) dalamdarah • Plasma darahberfungsiuntukmengangkut sari makanankesel-selsertamembawasisapembakarandariselketempatpembuangan • Bahanalamidikelompokkandalamtigakategori, yaitu: • Koagulat, misalnyakoagulan plasma darahdankolagen. • Cairanbologis, misalnya serum. • Ekstrakjaringan, misalnyaekstrakembrio

  5. Media sintesis dibagimenjadi 3, yaitu: • Minimum essential medium (MEM), yaitu medium dasar yang tersusunatasasam amino esensialdan vitamin. • Medium pemelihara (maintenance medium/MM), untukmemeliharaseldalammetabolismerendahdanjangkawaktuagak lama. Medium initerdiridari MEM & serum konsentrasirendah (2 – 5 %). • Medium penumbuh (growth medium) yaitu, medium yang diperkayadengannutrienuntukmenumbuhkankulturselsecaracepat, medium iniditambahkan serum cukupbanyak (10 – 20 %).

  6. EksplanKulturJaringanHewan • Berasaldariembriodanjaringandewasa. • Jaringanembrionik yang digunakanharussteril. • Jaringanembrionikdapattumbuhdengancepat, tidaktergregasidanbermigrasidengancepat. • Mitosis padajaringanembrioniksegeraterjadisetelahdikultur. • Jaringandewasa yang tumbuhcepatadalahselepiteldanjaringan tumor.

  7. TeknikKulturJaringanHewan • Dilakukanpadaukurantertentuuntukmeminimalkanterjadinyakontaminasi. • Harusdiperhatikan (harussteril): • Lingkungandidalamkultur (media) dandiluarkultur (udara, manusia, kondisilaboratorium) • Selamakultur, faktorfisiksepertiunsurharadanhormon. • Semuasumberkontaminasi (ruanganlaboratorium, laminerdanalat-alatbedahuntukkultur) harusditiadakan.

  8. Berdasarkantempatuntukkulturjaringanhewanterdapat 3 teknikkulturjaringanyaitu : • Slide Culture, yaitumenumbuhkankulturselpadagelasobyekcekung. • Flask Culture, yaitumenumbuhkankulturselpadacawankultur. • Test-tube Culture, yaitumenumbuhkankulturselpadatabungreaksi, botolterutamauntukjenissel yang tidakmelekat.

  9. Flask Culture memberikankeuntunganlebihjikadibandingkandengan slide culture. Karenajaringandapatdikultursampaibertahun-tahun. • Wadah yang baikuntuk flask culture adalah Carrel flask. • TerdapatduatipeFlask Culture, yaitu • Thick Clot Culture, sangatbaikuntukpertumbuhan yang cepatdarisuatukulturjaringan • Thin Clot Culture, sangatbaiksebagaiujipengaruhmakananpada medium terhadapkultur.

  10. MekanismeKulturSelHewan • Menyiapkanperalatankultur . • Mencuci organ ataujaringandidalam PBS • Organ dicincangsampaihalusdenganguntingdanpinset . • Dicucikembalidengan PBS • Dipindahkandalambotolsteril • PenambahansenyawaTripsinuntukmenghancurkan organ • Cairandipindahdalambotolsteril • Organ yang belumhancurditripsinasiulangdancairan yang terkumpuldisaring, disentrifugasi . • Supernatandibuang, diganti MEM, diinkubasi . • Setelah 2-3 hari, biakansel yang sudah monolayer dapatdiperbanyakdengancarapasase .

  11. PembuatanKulturJaringanHewandenganMenggunakan Media Alami • Mensterilkan Laminar Air Flow danruangandengansinar UV, 2 jam. • Menyiapkanalat yang telahdisterilkan (spet; membranmilipore; botolkaca ; aluminium foil; pembakarspiritus) • Menyiapkanbahan (darahayamsegar yang diberiamoniumoksalatsebagaiantikoagulan; alkohol 70%; spirtus) • Mensentrifugedarah (plasma darah (bag atas) danseldarah (bag bawah). • Menempelkanmembranmiliporepadamulutbotoldenganbantuanspetsecaraaseptik. • Menyaring plasma darahkedalambotolmelaluimembranmilipore. • Setelahsemua plasma darahtersaringkedalambotol, lalumengambilmembranmiliporedanmenutupbotoldenganpenutupnya. Kemudianditutuplagidenganaluminium foil.

  12. KulturMesenchymal Stem Cells (MSCs) dari 3 macamjaringan (amandel, adiposa, sumsumtulang) menjadibanyakmacamsel (ototpolos, osteosit, kondrosit, saraf, danlemak)

  13. Kulturjaringanepitelususembrioayam

  14. Pengaturanpelepasan growth factor untukregenerasijaringan • Pelepasan GF diperlukanuntukpembentukanjaringanbaru, misaljaringanpembuluhdarahdarimiokardium • GF untukpembuluhdarah : basic fibroblast growth factor (bFGF)

  15. Kulturjaringantulang • Pertumbuhandandiferensiasiosteoblastdarimesenkim stem cell akandistimuliolehkontakinterseluler, faktor media (microenvironment) , stimulasifisik, danbentukpermukaansel/jaringan

  16. Bentukpermukaansel/jaringantulangtergantungpadakomposisisenyawapenyusunmatriksekstraseluler (protein, polisakarida, growth hormone) • Pertumbuhanselterjadikarenaadanyainteraksiantarakontakreseptordenganmatrikekstraseluler

  17. Implantasi : strategipotensialuntukmemfasilitasiregenerasijaringantulang yang rusakkarenapenyakit, trauma • Cetakanpenggantitulangterbuatdaribiokeramikpolimer, bahanlogam, dankomposittulang • Keberhasilanregenerasidansistemvaskularisasijaringantulangditentukanolehkesesuaiandngcatakannya

  18. Deteksi stem cell (selinduk) yang ditransplantasikankejaringan lain menggunakanmetodepencitraan (magnetic resonance imaging , MRI)

  19. Metodekulturjaringankulit

  20. Kulturjaringankulit • Digunakanuntuktransplantasikulitbabikekulitlukabakar • Alternatif lain menggunakanbahankolagensapi, kolagentulangrawanikanhiu

  21. Manfaatteknikkulturjaringankulitdalamoperasiplastik, cream anti-aging, dll

  22. Jaringankulitdiambildaripasiendandikulturkandalamcawanpetri

  23. KelebihanPenelitianmenggunakanKulturSelHewan • Mudahdikontrolfisikokimialingkungannya (pH, suhu, tekananoksigen, dan CO2) • Pengambilankesimpulanrelatiflebihmudahdenganmenggunakanpopulasisel yang homogen . • Kultursel primer tetapmemilikiintegritasmorfologidanbiokimiawidalamjangkawaktu lama, dengandemikianmemungkinkanmelakukanpenelitianulang (reproducible) danterkontrol . • Ekonomis, tidakperlumemakaibanyakhewancoba . KekuranganKulturSelHewan • Memerlukankeahlian, selalumenjagaaseptis, tertibdansabar . • Gambaranhistologissudahtidaknampak . • Dalamkasuskulturseltelahmengalamiperubahansifataslinya, makahasilpengamatan yang diperolehakanmenyimpang . • Tidakadapengaruhsistemikdankerjasamaantar-sel yang berbedadalamsuatujaringan yang kemungkinanmemegangperanpentingdalamaktivitasfisiologis .

More Related