1 / 35

交叉配血的方式与选择

骆群. 交叉配血的方式与选择. 交叉配血： 确保输血配型相符的正确方法 有同 种 抗体的病人： - 进行间接抗人球试验 无同 种 抗体的病人： - 进行盐水试验 由于绝大多数储存血都作了成分处理，若只输入储存红细胞，则不做次侧配血。. 红细胞抗原. 血型系统 （ Blood group systems ） 29 245 血型集合 （ Blood group collections ） 6 12 血型系列 （ series ）： 低频率系列（ 700 series ， low-incidence

oakley
Télécharger la présentation

交叉配血的方式与选择

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 骆群 交叉配血的方式与选择

  2. 交叉配血：确保输血配型相符的正确方法 有同种抗体的病人：- 进行间接抗人球试验 无同种抗体的病人：- 进行盐水试验 由于绝大多数储存血都作了成分处理，若只输入储存红细胞，则不做次侧配血。

  3. 红细胞抗原 • 血型系统（Blood group systems）29 245 • 血型集合（ Blood group collections）6 12 • 血型系列（series）： 低频率系列（700 series，low-incidence antigens) 19 高频率系列 (901 serise,high-incidence antigens) 9

  4. 红细胞抗体(1) • 预期抗体：若已知红细胞ABO血型，按 Landsteiner´s法则可预知的ABO血型 抗体，即抗-A和抗-B。 预期抗体也叫做规则抗体 • 意外抗体：抗-A或抗-B以外的抗体。在ABO亚型 中，变异的抗-A1或某种抗-B等抗体， 也称为意外抗体。 意外抗体过去也叫做不规则抗体

  5. 红细胞抗体(2) • 天然抗体：没有可察觉的抗原刺激，而机体对抗原免疫应答的产物。天然抗体多为IgM抗体，能与含有相应抗原的红细胞结合，在盐水介质中出现肉眼可见的凝集反应，所以也叫盐水抗体。IgM抗体的最适反应温度为0-25℃。 • 免疫抗体：抗原刺激机体而产生的。免疫抗体多为IgG抗体，在盐水介质中只能致敏含有相应抗原的红细胞，但不产生凝集，需要采用抗球蛋白搭桥、酶处理细胞或聚凝胺介导等方法，才能产生凝集反应。IgG抗体的最适反应温度为37℃。

  6. 免疫血液学的传统方法 • 凝集实验和溶血实验 • 玻片法/试管法/微孔板法 • 抗人球实验（冲洗）

  7. 在抗原抗体反应中的去离子和低离子 盐水凝集法： 例如，ABO血型鉴定试验 包括玻片法、试管 法和微孔法 但灵敏度相对较低，只在 一些基层医院血库使用 低离子强度盐水法： 通过降低介质溶液离子强度，减少红细胞膜外围的离子云，促进红细胞凝集，因而其灵敏度有所提高。

  8. 聚凝胺试验 • 原理：聚凝胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减小，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝聚。如果是抗体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集不可逆；无抗体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集解散。 • 程序：按试剂盒说明书操作。

  9. 聚凝胺凝集法： 通过多聚季氨盐溶液提供大量正电荷来中和红细胞表面负电荷，减少红细胞间的排斥，促进红细胞凝集，其灵敏度有较大提高。此方 法目前在国内使用较多。（Rh,Duffy）

  10. 抗人球试验 - 检测IgG 抗人球试验： 在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促进红细胞的凝集。可分为直接和间接抗人球试验。 K, k, Fya, Fyb, JKa, JKb, Kpa, Kpb, S, s, Lua, Lub

  11. 抗人球试验 - 检测IgG（阳性与假阴性）

  12. REACTION MEDIA • 22% albumin • decreases zeta potential by buffering • allows Ab-coated cells to come closer together • Low Ionic Strength Solution (LISS) • decreases zeta potential • serum/cells very important; increase amount of serum with caution • Polyethylene glycol (PEG) • removes water, concentrating Ab • use monospecific AHG with anti-IgG (else, false positives) • do not read aggl. microscopically (false positives)

  13. 间接抗人球蛋白试验(IAT) • 经典IAT • LISS-IAT:试管法 卡 • PEG-IAT • 酶－IAT • 聚凝胺－IAT

  14. 经典IAT 程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，37℃孵育45-60分钟，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。用抗体致敏的红细胞检测试验结果的正确性。

  15. LISS-IAT • 原理：通过降低红细胞周围的离子氛，使抗体易于接近抗原，促进抗体在更短的时间内致敏红细胞，再使用抗人球蛋白试剂，使被致敏的红细胞产生凝集 • 程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，加2-4滴LISS液后混匀，37℃孵育15分钟，离心观察细胞的凝集情况，用生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。

  16. PEG-IAT • 原理：PEG是一种水溶性的中性多聚体，当含有抗原与相应抗体的溶液中加入PEG时，由于空间排斥效应作用，使溶液中的抗体饱和度提高，加速溶液中的抗原-抗体复合物的形成。 • 程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，加4滴PEG溶液后混匀，37℃孵育15分钟，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。

  17. 微柱凝胶技术(卡) • 原理：微管内有凝胶颗粒和试剂。凝胶颗粒具有分子筛作用，离心后，不凝集的红细胞通过全程进入微管底部，而凝集的红细胞则悬浮停留在颗粒中。 • 程序：按厂家说明操作

  18. 抗人球蛋白试验(Coombs试验) • 直接抗人球蛋白试验(DAT) 检测红细胞是否在体内被抗体或补体致敏,用于检测自身免疫溶血性贫血、药物引起的溶血、新生儿溶血病、溶血性输血反应 • 间接抗人球蛋白试验(IAT) 在体外抗体致敏红细胞,用于抗体筛选和鉴定、交叉配血、血型鉴定

  19. 酶试验 • 原理：蛋白水解酶可将红细胞表面的多肽链打断，使多肽链带负电荷的唾液酸也一起离开红细胞表面，减少了红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，容易产生凝集反应 • 程序：2滴血清、1滴2-5%红细胞，加入2滴酶，37℃孵育15分钟，离心看结果。 注：酶会破坏一些抗原结构，如M、N、Fya、Fyb等

  20. 影响输血效果的免疫血清学问题 • 速发型输血后溶血反应 血管内溶血 主要原因: ABO血型不和 • 迟发型输血后溶血反应 血管外溶血 主要原因: 针对红细胞抗原的同种抗体 血型抗原的同种免疫 红细胞抗原免疫强弱依次为Rh (D > c > E > C > e )、Kell、Duffy、Kidd

  21. 传统方法的局限性 • 不利于标准化管理 • 重复性较差 • 要求操作者的经验丰富 • 难以实现自动化操作

  22. 凝胶凝集试验

  23. 凝胶凝集试验 - 原理 (1) • 通过离心使红细胞被挤过装有过滤介质的小柱 • 凝集的红细胞被阻挡在小柱中过滤介质的顶部或中央，而未凝集的红细胞则到达小柱的底部 • 血型或AHG试剂被加入到过滤介质 • 由于红细胞和血清成分以不同的速度通过小柱（重力加速度不同），从而消除了血清中未结合的球蛋白中和AHG的可能性，因而，在抗人球试验中，不用清洗红细胞

  24. 凝胶凝集试验

  25. 凝胶抗人球试验 新技术——卡式检测法： 1986年法国Dr.Yves Lappierre发明了用于分离凝集红细胞的凝胶卡式检测法。经过不断改进和临床的大量应用，目前在发达国家已作为临床常规的红细胞血型血清学检测新技术。 1994年凝胶卡式检测法用于临床常规的红细胞血型血清学检测，已得到美国FDA权威机构的认证。

  26. 凝胶酶试验 酶法： 利用木瓜酶或菠萝酶来破坏红细胞表面的唾液酸， 使细胞膜表面失去电荷，减少红细胞间的排斥；同时暴 露某些隐蔽抗原，增强凝集反应。主要用于一些不完全 抗体的检测。

  27. 凝胶凝集试验 - 原理(2) • 标准化的孵育时间 • 标准化的离心时间 • 标准化的判读 - 消除主观因素对弱反应结果的判读 • 结果稳定保存

  28. 凝胶试验方法的历史 • 1984 - 发明建立 (Dr. Y. Lapierre, Lyon, France) • 1985 - 申请专利 • 1988 - 提供商品化试剂盒 市场上的凝胶检测系统： • Diana System (Grifols) … 葡聚糖100凝胶, 多种大小颗粒 • DiaMed ID -葡聚糖100凝胶 • Ortho BioVue - 玻璃珠 • Pasteur ScanGel -葡聚糖凝胶 • Gamma REAct - 蛋白G和蛋白A凝胶

  29. 凝胶试验应用于血型血清学 • 血型实验室中的一次革命 • 在全世界许多发达国家已被公认为是常规免疫血液学实验的“金标准”。

  30. 凝胶试验应用于血型血清学 • 1990年，卡式检测法的发明人Dr. Yves Lapierre等用低离子强度盐水法（试管法）、聚凝胺试验（试管法）和卡式检测法（凝胶）研究了400例已知抗体的样本。血清与细胞的比例是按照试管法标准配置。结果为： • 卡式检测法检出359例（检出率为90%） • 低离子强度盐水法检出243例（检出率为61%） • 聚凝胺试验检出301例（检出率为75%）

  31. 凝胶试验应用于血型血清学 结果判断模式

  32. 卡式血型/配血系统 • 系统特点： • 灵敏度高 • 特异性高 • 重复性好 • 客观性强 • 不需洗涤细胞 • 结果可保留一周 • 节约样品和试剂 • 易于标准化 • 易于自动化 • ISO9000/CE认证

  33. 自动化配血系统

  34. 自动化配血系统

  35. 谢 谢 Thank you

More Related