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Seminar 1

Seminar 1. Nachweis des Proteins NHE-7 in roten Blutzellen. Claudia Hahn 25.04.2012. Inhalt. Na + /K + -Transport Leak-Transport NHE Familie Versuchsabläufe Referenzen. Na +. Na +. Na +. Na +. Na +. K +. K +. K +. K +. K +. K +. K +. K +. Na +. K +. Na +. Na +. Na +.

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Presentation Transcript

  1. Seminar 1 Nachweis des Proteins NHE-7 in roten Blutzellen Claudia Hahn 25.04.2012

  2. Inhalt Na+/K+-Transport Leak-Transport NHE Familie Versuchsabläufe Referenzen

  3. Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ K+ Na+ K+ Na+ Na+ Na+ http://3imgsrv.fotofinder.com/archive/thumbnail/EE/EE375CF1C176A17E.jpg

  4. Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ K+ K+ H+ H+ K+ K+ Na+ K+ H+ K+ H+ K+ H+ Na+ K+ Na+ Na+ NHE Familie Na+ http://3imgsrv.fotofinder.com/archive/thumbnail/EE/EE375CF1C176A17E.jpg

  5. Na+ K+ Na+ Na+-K+-Transport Na+ Na+ Na+ Na+ Na+ K+ K+ Na+ K+ Na+ Na+ K+ K+ Na+ Na+ H+ Na+ K+ H+ H+ Na+ NHE Familie Na+ http://3imgsrv.fotofinder.com/archive/thumbnail/EE/EE375CF1C176A17E.jpg

  6. Na+ K+ Na+ Na+-K+-Transport Na+ Na+ Leak-Transport Na+ Na+, K+ K+ K+ Na+ K+ K+ K+ K+ Na+ K+ K+ K+ Na+ K+ K+ Na+ K+ Na+ K+ Na+ Na+ NHE Familie Na+ http://3imgsrv.fotofinder.com/archive/thumbnail/EE/EE375CF1C176A17E.jpg

  7. Na+/K+-Transport Natrium-Kalium-Pumpe 3 Natrium raus 2 Kalium rein unter ATP Verbrauch (gegen Konzentrationsgefälle) http://de.wikipedia.org/w/index.php?title=Datei:Scheme_sodium-potassium_pump-de.svg&filetimestamp=20100611205409

  8. Leak-Transport Definition: Unidirektionaler K+ und Na+ Einfluss und Ausfluss während alle bekannten Transportwege (Pumpen, Kanäle, Carrier) inhibiert sind durch Ouabain + Bumetanide + EGTA Na+/K+ Pumpe, der Na+/K+/2Cl- Kotransport und der Ca2+-aktivierte K+ Kanal sind inhibiert Der "leak" Na+ Fluss ist komplizierter als der "leak" K+ Fluss Größere Anzahl von spezifischen Transportsystemen Der "leak" K+ und Na+ Transport kann nicht über Elektrodiffusion erklärt werden

  9. NHE Transmembrane Antiporter (Na+/H+ Austauscher) Regulieren den pH-Wert und die Ionenhomöostase Wird durch verschiedene Signalwege reguliert Hoch konserviert bei den Säugetieren Neun Isoformen NHE1 bis NHE9

  10. Zwölf transmembrane Segmentantiporter Im neutralen pH sind die NHEs inaktiv; Aktivierung erfolgt bei Ansäuerung Struktur des Na+/H+ Austauschers Popova M. Characterization of the interaction between Na/H Exchanger Isoform 7 (NHE-7) and Calmodulin (CAM). The university of british Columbia. 2007

  11. NHE-Familie NHE 1 in nahezu allen Geweben, Zelltypen und Spezies Konstanthaltung von pH und Zellvolumen Reguliert die Proliferation Aktivierung des Na+/H--Austauschs durch intrazelluläre Säurebelastung NHE 2 vor allem im Gastrointestinaltrakt (Magen und Darm) ähnliche Aufgaben wie NHE1

  12. NHE 3 Beim Menschen in Niere und Dünndarm, aber auch in vielen anderen Geweben zu finden Volumenregulation NHE 4 beim Kaninchen im Magen exprimiert, mittelstark im Dünndarm und Kolon und schwach in Niere, Gehirn, Herz, Uterus, Skelettmuskel und Leber Könnte an der Volumenregulation beteiligt sein

  13. NHE 5 im Gehirn hoch exprimiert NHE 6 nur in den Mitochondrien, Herz, Gehirn, und Skelettmuskel pH-, Volumen- und Elektrolytregulation

  14. NHE-7 kommt im Golgi-Netzwerk, Endosomen und Plasmamembran vor reguliert die Ionenhomöostase Durch intrazelluläre Akkumulation von Ca-Ionen und die Bindung von Calmodulin (CaM) aktiviert (Bindung an IL2)

  15. Popova M. Characterization of the interaction between Na/H Exchanger Isoform 7 (NHE-7) and Calmodulin (CAM). The university of british Columbia. 2007

  16. Popova M. Characterization of the interaction between Na/H Exchanger Isoform 7 (NHE-7) and Calmodulin (CAM). The university of british Columbia. 2007

  17. NHE-8 Am proximalen Tubulus der Niere entdeckt im ER (endoplasmatisches Retikulum) und bis zum trans Golgi nachweisbar Elektrolyttransport NHE9 Im späten Endosom

  18. Versuchsablauf Gewinnung von Blut Isolierung der Membranproteine Trennung der Proteine nach Größe mittels SDS-Page Anfärben über Coomassie-blau Western Blot Detektion mit Antikörpern

  19. http://o.elobot.de/s/bot6/01307.jpg

  20. http://o.elobot.de/s/bot6/01307.jpg

  21. http://www.imb-jena.de/~rake/Bioinformatics_WEB/gifs/sds_page1.gifhttp://www.imb-jena.de/~rake/Bioinformatics_WEB/gifs/sds_page1.gif

  22. Proteine roter Blutkörperchen nach der SDS-Gelektrophorese und Coomassie-Färbung Diplomarbeit Jennifer Lang, Universität des Saarlandes

  23. http://www.medizin.uni-greifswald.de/physiol/images/blot.jpg

  24. http://www.leinco.com/includes/templates/LeincoCustom/images/WesternBlotFinal.gifhttp://www.leinco.com/includes/templates/LeincoCustom/images/WesternBlotFinal.gif

  25. Western Blot zum Nachweis des NHE 7 mit Antikörpern Diplomarbeit Jennifer Lang, Universität des Saarlandes

  26. Ausblick Weitere Nachweise mittels verschiedener Methoden: MALDI-ToF Kapillarelektrophorese Flüssigchromatographie Polymerase-Kettenreaktion

  27. Referenzen Attaphitaya S, Park K and Melvin JE. Molecular cloning and functional expression of a rat Na+/H+ exchanger (NHE5) highly expressed in brain. J Biol Chem 274: 4383-4388, 1999. Baird NR, Orlowski J, Szabo EZ, Zaun HC, Schultheis PJ, Menon AG and Shull GE. Molecular cloning, genomic organization, and functional expression of Na+/H+ exchanger isoform 5 (NHE5) from human brain. J Biol Chem 274: 4377-4382, 1999. Bookstein C, DePaoli AM, Xie Y, Niu P, Musch MW, Rao MC and Chang EB. Na+/H+ exchangers, NHE-1 and NHE-3, of rat intestine. Expression and localization. J Clin Invest 93: 106-113, 1994. Bookstein C, Musch MW, DePaoli A, Xie Y, Rabenau K, Villereal M, Rao MC and Chang EB. Characterization of the rat Na+/H+ exchanger isoform NHE4 and localization in rat hippocampus. Am J Physiol 271: C1629-38, 1996. Goyal S, Vanden Heuvel G and Aronson PS. Renal expression of novel Na+/H+ exchanger isoform NHE8. Am J Physiol 284: F467-F473, 2003.

  28. Hoogerwerf WA, Tsao SC, Devuyst O, Levine SA, Yun CH, Yip JW, Cohen ME, Wilson PD, Lazenby AJ, Tse CM and Donowitz M. NHE2 and NHE3 are human and rabbit intestinal brush-border proteins. Am J Physiol 270: G29-41, 1996. Kapus A, Grinstein S, Wasan S, Kandasamy R and Orlowski J. Functional characterization of three isoforms of the Na+/H+ exchanger stably expressed in Chinese hamster ovary cells. ATP dependence, osmotic sensitivity, and role in cell proliferation. J Biol Chem 269: 23544- 23552, 1994. Lang J, Untersuchungen zur Existenz von NHE-Isoformen in Plasmamembranen humaner Erythrozyten 2012 Numata M and Orlowski J. Molecular cloning and characterization of a novel Na+,K+/H+ exchanger localized to the trans-Golgi network. J Biol Chem 276: 17387-17394, 2001. Numata M, Petrecca K, Lake N and Orlowski J. Identification of a mitochondrial Na+/H+ exchanger. J Biol Chem 273: 6951-6959, 1998. Pizzonia JH, Biemesderfer D, Abu AA, Wu MS, Exner M, Isenring P, Igarashi P and Aronson PS. Immunochemical characterization of Na+/H+ exchanger isoform NHE4. Am J Physiol 275: F510-F517, 1998. Popova M. Characterization of the interaction between Na/H Exchanger Isoform 7 (NHE-7) and Calmodulin (CAM). The university of british Columbia. 2007

  29. Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit

  30. http://www.zum.de/Faecher/Materialien/beck/bilder/cellm7.jpg

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