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La qualità in IHC “A SCANNER DARKLY”

La qualità in IHC “A SCANNER DARKLY”. Claudio Ceccarelli e Stefano Simonazzi U.O. Anatomia Patologica - Prof. G. N. Martinelli. LA STANDARDIZZAZIONE DEL RISULTATO. A. A. 02/05/2004 Ab XXX Kit Meliorstain AUTOMAT K. 12/12/2012 Ab YZZ Kit SuperColor ROBOSTAINER.

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Presentation Transcript

  1. La qualità in IHC “A SCANNER DARKLY” Claudio Ceccarelli e Stefano Simonazzi U.O. Anatomia Patologica - Prof. G. N. Martinelli

  2. LA STANDARDIZZAZIONE DEL RISULTATO A A 02/05/2004 Ab XXX Kit Meliorstain AUTOMAT K 12/12/2012 Ab YZZ Kit SuperColor ROBOSTAINER RISULTATO UGUALE A TEMPI DIVERSI - CON REAGENTI DIVERSI CON STRUMENTI DIVERSI OUTPUT = qualità + PRODUTTIVITA’

  3. STANDARDIZZATO TUTTO QUELLO CHE VEDO E’ LA VERITA’ / LA REALTA’ A UN OSCURO SCRUTARE

  4. NON CI CHIEDIAMO MAI SE ESISTONO CONDIZIONI ALLE QUALI IL MATERIALE NON SI PRESTA AD UNA STANDARDIZZAZIONE DEL RISULTATO BISOGNA PROCESSARE TUTTO BISOGNA VALUTARE TUTTO A LA QUALITA’ MORFOLOGIA COME UNICO CRITERIO DI ADEGUATEZZA

  5. Utilizzo di IHC in algoritmi di diagnostica differenziale (risposta qualitativa SI/NO) LE TECNICHE IHC NON SONO QUANTITATIVE !

  6. PROGRAMMI DI VALUTAZIONE ESTERNA DI QUALITA’ Cromogranina A, RUN 18, 2006 94 Lab. 30/94 OTTIMALE (32,0%) 36/94 BUONA (38,0%) 21/94 BORDERLINE (22,0%) 7/94 INSUFFICIENTE (8,0%) NordiQC CDX-2, RUN 22, 2008 56 Lab. 17/56 OTTIMALE (30,0%) 19/56 BUONA (34,0%) 14/56 BORDERLINE (25,0%) 6/56 INSUFFICIENTE (11,0%) NON SONO NEMMENO COSI’ RIPRODUCIBILI

  7. LE TECNICHE IHC SONO “PER DEFINIZIONE” TECNICHE NON QUANTITATIVE GLI STESSI REAGENTI E PRINCIPI PER IL SAGGIO “ELISA” QUANTITATIVO EPPURE Il punto di vista dei reagenti

  8. LE TECNICHE IHC SONO “PER DEFINIZIONE” TECNICHE NON QUANTITATIVE QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA FFPE Fresco = FFPE Il punto di vista dei materiali

  9. ALLORA, A CERTE CONDIZIONI, IL RISULTATO DI UNA COLORAZIONE IMMUNOISTOCHIMICA PUO’ ESSERE VALUTATO SECONDO CRITERI QUANTITATIVI

  10. PERCHE’ DOBBIAMO PORCI QUESTO PROBLEMA?

  11. VALUTAZIONE QUANTITATIVA DELLA ESPRESSIONE DI PROTEINE MEDIANTE IHC

  12. QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE Qualsiasi intensità I valori sono riportati in percentuale esempio: ER = 100 % USO DEI METODI AR STANDARDIZZAZIONE

  13. QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE < 10 % Negativo 15 % 0 % FALSO NEGATIVO ??

  14. QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE SCORE 0 +1 +2 +3 (% e Intensità) Score +2 Score 0

  15. APPLICAZIONE DEI CONCETTI DELLA MEDICINA DI LABORATORIO CONCETTO DI “TOTAL TEST APPROACH” Aspetti del test considerati: pre-analitici analitici post-analitici

  16. Fattori analitici del test COMPRENDONO: REAGENTI Anticorpi Sistemi di rivelazione Tamponi   PROTOCOLLI Procedura IHC (tempi e temperature) AR AUTOMAZIONE NUOVI AR ?

  17. Fattori pre-analitici del test COMPRENDONO: PREPARAZIONE DEL CAMPIONE Asportazione/Fissativo Spessore/tipo di tessuto Tempo di fissazione Temperatura del processo Processazione post-fissazione

  18. Interazione fra diversi fattori del test DALLA INTERAZIONE FRA REAGENTI Anticorpi SISTEMI AR E PRE-ANALITICA

  19. PROBLEMA DI RIPRODUCIBILITA’ DELLE TECNICHE IHC CONDIZIONI DI VARIABILITA’ PRE-ANALITICHE COMBINAZIONE DI QUESTE CON LA METODICA IHC SCARSA PRESERVAZIONE DEL TESSUTO > SENSIBILITA’ ALLA DEGRADAZIONE DELL’EPITOPO PRESCELTO

  20. PROBLEMA DI RIPRODUCIBILITA’ DELLE TECNICHE IHC CONDIZIONI DI VARIABILITA’ PRE-ANALITICHE SCARSA PRESERVAZIONE DEL TESSUTO

  21. SCARSA PRESERVAZIONE DEL TESSUTO DEGRADAZIONE – MANCATA FISSAZIONE

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