实验三 DIC 的造病和实验室检测

实验三 DIC的造病和实验室检测

【目的要求】 1.通过DIC动物模型的复制，了解DIC的病因及发病机制。 2.观察急性DIC各期血液凝固性的变化，并分析这些变化的原因及其病理意义。 3.了解DIC的诊断标准，熟悉常用的实验室检查指标及其意义。

【实验动物】 家兔，体重 1.5～2.0 kg。【药品与器材】 1%普鲁卡因，血小板稀释液，兔脑匀浆，4%肝素。兔手术台，显微镜，离心机，721 型分光光度计，水浴箱、手术器械，微量加样器，动脉插血小板计数板，注射器、肝素抗凝管、枸橼酸钠抗凝管等。

【实验步骤】 1.称重、麻醉和固定家兔 1%普鲁卡因作颈部局部麻醉，颈前正中切口。分离家兔一侧颈总动脉，动脉插管，备放血用。 2.取肝素抗凝管和枸橼酸钠抗凝管各3个，分别做好标记。

3. 正常血标本各项指标的的制备 ■用玻璃纸，接兔血1滴，并立即取10l血放入2.0 ml血小板稀释液内充分混匀，作血小板计数。 ■分别在肝素抗凝管内放入兔血1.5ml，在枸橼酸钠抗凝管放入兔血3.5ml。迅速混匀后，离心、取上层血浆，另置入干净小试管，并加上标记。（肝素抗凝所制备的血浆用以测定Fbg；枸橼酸钠抗凝所制备的血浆用以测定PT和3P试验）

4. DIC的造病：取兔脑匀浆，以8ml／Kg体重剂量，经耳缘静脉以1ml/min的速度匀速推注。 5. 兔脑匀浆注射完毕后，立即采集血样和30或45min 后采血样一次。进行BPC，PT测定，3P试验和 Fbg含量的测定。【附录】 1. 血小板计数（BPC）将试管内已稀释血液滴到计数板上静置10min，用高倍镜计数。准确数出计数板中央l大方格的血小板数，乘以2000就是每立方毫米的血小板数。

2．凝血酶原时间（Prothrombin Time简称PT） ■取被检血浆0.lml，置于试管内，37℃水浴预温。 ■加入P试液0.2ml，并轻轻地侧动试管，至液体停止流动或出现颗粒为止，记录PT测定值（秒）。 ■重复3次测定，取平均值作为测定结果。 3．血浆鱼精蛋白副凝试验（3P试验） ■取被检血浆0.5ml，置于试管内，37℃水浴3min。 ■加入硫酸鱼精蛋白液50l，混匀，37℃水浴15min。观察有无白色纤维或凝块出现。如纤维或凝块出现为阳性；无纤维或凝块为阴性。

测定光密度值 × 1000 ＝ mg% 纤维蛋白原含量 0.5 4．纤维蛋白原定量（饱和氯化钠法） ■实验管：取血浆0.5ml，加入饱和NaCl 4.5ml，充分混匀，置37℃水浴3min，取出后再次摇匀。 ■对照管：取生理盐水0.5ml，加入饱和NaCl 4.5ml，同上操作。 ■选用波长520nm，以对照管试液调零点，然后测定被检样品试液的光密度。

【思考题】 1．静脉注入兔脑浸液后为何能复制出家兔DIC模型？试述其发生机制。 2．讨论急性DIC产生的原因、机制及各项结果间的关系。【注意事项】 1．采集抗凝血需掌握好血液与抗凝剂的比例。 2．注射兔脑匀浆前，做好第二次采血的准备工作。 3．静脉推注兔脑匀浆的速度快慢是实验成败的关键，故密切注意动物的反应。

表2-3-1注入兔脑匀浆前后动物呼吸与状态观察 注兔脑匀浆前注兔脑匀浆后腹式呼吸一般状态表2-3-2 DIC实验指标的测定记录项目注射前注射后（立即）注射后（30/60min） BPC PT(sec) 3P试验 Fbg量【实验结果记录】

血小板计数 10倍镜下 40倍镜下

凝血酶原时间测定 TF+ Ca2+ + 被检血浆，测定凝血时间，使凝血酶原变为凝血酶，再进一步促进纤维蛋白形成。正常值：12~14秒

3P试验 纤维蛋白单体FM可与纤维蛋白（原）的降解产物X片段形成可溶性复合物SFMC，当加入硫酸鱼精蛋白或乙醇后可使复合物中的 FM游离，重新聚集，即血浆重凝固。意义：反映纤溶功能

肝素（heparin） 1. 来源：肠粘膜肥大细胞，是一种酸性粘多糖； 2. 作用： A、加速AT-III、HC-II的作用，也影响TFPI、PC作用； B、增强EC的抗凝和纤溶功能； C、与血小板结合，抑其表面凝血酶生成； 3. 清除：细胞清除和体液中和。

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