第五章繁殖辅助技术

第五章繁殖辅助技术 Assisted reproductive technology

第一节人工授精 Artificial Insemination （AI）

一、人工受精的概述 二、采精三、精液品质检查四、精液的稀释五、精液的保存六、输精操作七、精液冷冻保存技术第一节人工授精

一、人工受精的概述 第一节人工授精（一）定义（二）优越性（三）AI主要技术环节

一、人工受精的概述 （一）定义用器械采集公畜（禽）精液，经过检查处理，再用器械将一定量的精液注入到发情母畜生殖道的一定部位，以人工操作代替公母畜本交的一种畜牧技术。

一、人工受精的概述 发展简史在1780年意大利生理学家Spallanzani将犬的精子注入母犬体内，获得3只小犬； 1890年，法国兽医，马人工授精； 1914年，意大利，Amantea设计了假阴道； 1921年，俄国人Ivanoff，扩大到牛、羊、家禽； 1937年，丹麦兽医发明了牛直肠把握输精； 1949年，Polge，甘油，冷冻精液。中国从1950年以后开始。

一、人工受精的概述 （二）优越性就本交的几种方式而言的优越性有： • 公畜利用率 • 节约经济 • 加快改良 • 防病 • 提高受胎率 • 远距离交流和运输

一、人工受精的概述 （三）AI主要技术环节精液品质检查精液稀释保存采精母畜发情鉴定精液运输输精

二、采精 第一节人工授精（一）采精的方法种类及评价标准（二）采集技术

二、采精 （一）采精的方法种类及评价标准 1 假阴道法

二、采精 （一）采精的方法种类及评价标准 2 手握或筒握法

二、采精 （一）采精的方法种类及评价标准 3 电刺激或按摩法

二、采精 （一）采精的方法种类及评价标准 4 阴道收集法 5 海绵、集精袋法 6 外科瘘管法

二、采精 （一）采精的方法种类及评价标准原质全量评价标准简便无损伤

二、采精 （二）采集技术

场地：采精室要求宽畅、明亮、地面平整，安静，清洁，设有采精架、台畜、假台畜和精液操作室等必要设施场地：采精室要求宽畅、明亮、地面平整，安静，清洁，设有采精架、台畜、假台畜和精液操作室等必要设施二、采精 1 采精前准备（以假阴道为例）

台畜 1、健康、温顺、卫生 2、设计合理、方便

假阴道：

二、采精 公畜性欲体况适中饲料全价适当运动定期检疫定期清洗

二、采精 2 公畜采精调教法榜样示范法外激素法偷梁换柱法

二、采精 3 采精须知 ①采精者在公畜的右后侧（站住）； ②马性反射慢，压力重要； ③牛、羊性反射快，温度重要，勿触及阴茎，可触包皮； ④猪性反射慢，压力为节律性收缩； ⑤兔可用羊假阴道，倒向一侧并叫一声，表示射精； ⑥鸡按摩手法要准确实在。

二、采精 4 采精频率马、牛和猪每周2-6次，鸡每3天停1天，羊在春分之前最差，秋分时可达7～14次/周。牛：每周2天采精，当日采2次猪：隔日一次，最好3天一次羊：每周3天，当日采2次。犬：隔日一次主要根据精液品质与公畜的性机能状况而定。

在人工授精技术中，我们要采集公畜的精液，并在体外进行一系列的处理。那么精液的质量必然要受到公畜本身的生精能力、健康状况，以及采集方法、处理方法的影响。因此，检查精液品质是人工授精技术中一个非常重要的技术环节。在人工授精技术中，我们要采集公畜的精液，并在体外进行一系列的处理。那么精液的质量必然要受到公畜本身的生精能力、健康状况，以及采集方法、处理方法的影响。因此，检查精液品质是人工授精技术中一个非常重要的技术环节。第一节人工授精三、精液品质检查

第一节人工授精 三、精液品质检查（一）重要性（二）精液品质检查项目（三）精液品质检查方法

（一）重要性 1检查种公畜的配种能力 2公畜的饲养水平和性机能 3确定精液可稀释的倍数 4检查精液的处理方法是否正确 5检查精液产品的质量 6 反映技术操作水平三、精液品质检查

（二）精液品质检查的项目 1 直观检查项目 2 微观检查项目三、精液品质检查

1 直观检查项目 射精量色泽气味云雾状 PH值美兰退色试验三、精液品质检查

A 射精量的测定方法 B 射精量不正常的原因三、精液品质检查 1 直观检查项目射精量

A 射精量的测定方法 概念: 射精量是指每次射精的体积测定: 以连续3次以上正常采集到的精液的平均值代表测定方法: 可用体积测量容器如刻度试管或量筒,也可用电子秤称重近似代表体积三、精液品质检查 1 直观检查项目

B 射精量不正常的原因 三、精液品质检查 1 直观检查项目

色泽三、精液品质检查 1 直观检查项目

云雾状分级标准 +++ 翻明显而且较快 ++ 翻明显但较慢 + 仔细看才能看到精液的移动 - 无精液移动三、精液品质检查 1 直观检查项目

2 微观检查项目 精子活力估测密度测定:计数板计数、比色计测定畸形率：形态畸形率、顶体畸形率三、精液品质检查

（1）活力的估测 A 概念:37℃下,精液中前进运动精子占总精子数的百分率 B 主要测定方法:估测法三、精液品质检查

活力测定时精液的稀释用品 三、精液品质检查

例：牛精子活力检查的程序 三、精液品质检查取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片用100倍和400倍观察载玻片预温精液稀释取样检查镜检将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37℃，然后放在载玻片活力估测活力记录判断视野中前进运动精子占的百分率按10级制评分和记录

（2）密度测定 三、精液品质检查 A 密度的概念及表示方法单位体积精液中所含的精子数表示方法:个/ml 或亿/ml,也可以用个/ul表示 B 各种家畜精液的精子密度

C 精子密度的测定方法 精子密度计数板(器)简介精液的稀释精液注入计数室精子计数精子密度计算三、精液品质检查（2）密度测定

a精子密度计数 精子计数室长宽各1mm,面积1mm2高度0.1mm,体积0.1mm3 由双线或三线组成25个(5X5)中方格每个中方格内有16个小方格(4X4) 共计400个小方格三、精液品质检查

精子计数室及一个中方格 三、精液品质检查

b、精液的稀释 将精液注入计数室前必须对精液进行稀释,以便于计数稀释的比例根据动物精液的密度范围确定稀释方法:用5-25ul移液器和100-1000 ul移液器,在小试管中进行组合不同的稀释.如牛精液稀释100倍,为5ul原精+500ul稀释液稀释液:3%氯化钠溶液,用以杀死精子,便于计数三、精液品质检查

注入计数室前各种家畜精液建议稀释比例 三、精液品质检查

c、精液注入计数室 将洁净的计数板放在载物台上固定好,盖上干净的盖玻片取25ul稀释后的精液,将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处缓慢注入精液,使精液依靠毛细作用吸入计数室三、精液品质检查

用吸管稀释后精液注入计数室 共有两个对称的计数室注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！

用移液器注入精液 三、精液品质检查

d、精子计数 将计数板固定在显微镜的推进器内，用100倍放大找到计数室，再用400倍找到计数室的第一个中方格。计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的原则进行计数格线上的精子。三、精液品质检查

进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共5个中方格进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共5个中方格也可以是从左角到右下角五个中方格

三、精液品质检查 以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数

计算精子密度 精子密度=5个中方格总精子×5×10×1000 × 稀释倍数三、精液品质检查

例：牛精子密度测定程序 取25ul小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入,使其自行吸入计数室中用100倍和400倍观察放计数板于载物台上取样稀释精液精液注入计数室镜检计数板和盖玻片一定要清洁取500ul 3%氯化钠于小试管中,加入5ul原精液,混合均匀密度计算精子计数计数五个中方格的总精子数,计数以头部为准,在格线上的数上不数下,数左不数右 • 精子密度= 5个中方格总精子数5×10×1000 × 100

第五章 繁殖辅助技术