Logros alcanzados

1. Logros alcanzados Objetivos 2º año • Colaboración con 2 grupos de esta línea. • Puesta a punto de la síntesis de los péptidos HAIYPRH y THRPPMWSPVWP, lanzaderas que utilizan el receptor de transferrina para cruzar la barrera hematoencefálica. • Diseño, síntesis y optimización de una lanzadera peptídica capaz de cruzar la barrera hematoencefálica por difusión pasiva. • Síntesis de Sweet Arrow Peptide (SAP) preparado para funcionalizar los dendrimeros de Frechet y PAMAM (colaboración con J. L. Serrano) • Puesta a punto de la metodología de conjugación de SAP a nanopartículas funcionalizadas con diversos grupos (Colaboración con M. Arruebo y J. M. de la Fuente). • Colaborar con más grupos • Poner a punto la síntesis de una lanzadera peptídica basada en el virus de la rabia y su capacidad de cruzar la barrera hematoencefálica. • Evaluar el transporte de las diferentes lanzaderas en el modelo celular de barrera hematoencefálica para escoger las más prometedoras (colaboración con G. Egea). • Funcionalización de nanopartículas con las mejores lanzaderas y caracterización de los conjugados nanopartícula-lanzadera. (PCB) E. GIRALT 1 LÍNEA DE CONJUGACIÓN DE NANOPARTÍCULAS

2. Objetivos 2º año Logros alcanzados Colaboración con 2 grupos de esta línea y 2 de otra. Puesta a punto de técnicas de MTT, viabilidad y fagocitosis con diversas líneas celulares humanas, y de ratón. Técnica de fagocitosis con bacterias Puesta a punto de SEM y TEM con líneas celulares. Optimización de técnicas de ROS, LDH y C´ (pruebas) Producción de anticuerpos anti-tumor (DR) para conjugar con NPs Dot blot circular (pruebas) Organización de Jornadas internacionales “Nanotecnología en Medicina” Vigo, con Luis Liz Preparación de manuscrito Proyecto Xunta: nanotecnología Colaboración con 4 grupos de esta línea. Estudio de respuesta inmune específica. Preparación de anticuerpos anti- tumor y colaboración en la conjugación con diversas nanopartículas Preparación de antígenos para conjugación con NPs para desarrollo de biosensores Colaboración en el desarrollo de dotsblots con NPs magnéticas Colaboración péptido-Barrera HE Publicación de artículos Grupo Vigo (África González-Fernández)

3. Objetivos 2º año Logros alcanzados • Optimización e implantación a gran escala del modelo de BBB. • Ensayos de internalización (transcitosis) de nanopartículas a través de la BBB. • Análisis ultraestructural de la BBB y de la internalización de nanopartículas. (IN2 UB)G. EGEA • Puesta en marcha de un modelo in vitro de barrera hematoencefálica (BBB) para el ensayo funcional de nanopartículas conjugadas con péptidos o anticuerpos. • Este modelo consta de una monocapa de células endoteliales de cerebro bovino sobre un lecho de astrocitos de rata

4. Logros alcanzados Objetivos 2º año • Construction of toxin carriers (dendrimers). Colaboración con los grupos de Zaragoza (envío de la estudiante contratada por el Consolider) • Encapsulamiento de dendrímeros dentro de liposomas y control de la liberación de los dendrímeros Intraeritrocitariamente. • Search for new candidate proteins (collaboration with Chema Bautista,Complutense Univ.) • Presentación del proyecto “Aplicación de nanovectores a la liberación dirigida de antimaláricos” a diferentes convocatorias estatales e internacionales • Puesta a punto de los protocolos de microscopía electrónica, microscopía confocal, generación de liposomas y funcionalización de nanopartículas de oro sólidas y de nanopartículas liposomales • Generation of Abs against Band 3 peptides • Check for Ab recognition of RBCs • Construction of liposomal nanovector capsules • Participación en la constitución de la Plataforma Ibérica de Malaria (Lisboa, 15 y 16 de noviembre de 2007). (PCB) X. FDEZ 4 LÍNEA DE CONJUGACIÓN DE NANOPARTÍCULAS

5. Objetivos 2º año Logros alcanzados • Colaboración con 2 grupos de esta línea. Con África González y con Ernest Giralt a los que hemos suministrado distintos tipos de nanopartículas (FeC, Fe3O4/SiO2, SiO2) para estudios de citotoxicidad y de anclaje del SAP, resp. • Síntesis de nanopartículas magnéticas de 15 nm (núcleo) recubiertas de DMSA con un tamaño hidrodinámico de  200 nm. Se han anclado a estas nanopartículas el anticuerpo anti-hcg y la enzima glucosa oxidasa • Síntesis de nanopartículas de sílice de 80 nm recubiertas de PEG de tamaño hidrodinámico de  200 nm donde la adsorción de BSA es reducida. • Publicación de 5 artículos científicos agradeciendo la financiación del Consolider en el año 2007. Un artículo fruto de la colaboración con África González está en proceso de redacción. • Síntesis de nanopartículas magnéticas de Fe3O4/PMAO con grupos funcionales OH y COOH sobre su superficie y con un tamaño de 6-10 nm. • Síntesis de nanopartículas magnéticas de Fe3O4/Au, funcionalizadas con cadenas de PEG y grupos COOH y NH2 • Funcionalización de nanopartículas comerciales de Estapor con el anticuerpo anti-hcg. • Participación en 8 congresos (6 internacionales y 2 nacionales) con dos comunicaciones orales y 6 pósters. • Resolver los problemas de aglomeración de la mayor parte de las nanopartículas existentes y optimizar dichas síntesis. • Utilizar nuevas metodologías físicas y químicas para la síntesis de nanopartículas estables en medios acuosos. • Optimizar la funcionalización de anticuerpos y enzimas para mejorar su actividad. • Medidas de relajatividad de las diferentes nanopartículas sintetizadas en el consorcio con el equipo Minispec de reciente adquisición en el INA. • Utilizar las nanopartículas magnéticas sintetizadas y funcionalizadas con los correspondientes anticuerpos en el biosensor magnético. • Enviar las nanopartículas de nueva generación del INA al grupo de África González para probar su biocompatibilidad y citotoxicidad. • Enviar nuevas nanopartículas con condiciones óptimas de estabilidad, tamaño y funcionalidad química al grupo de E. Giralt para su funcionalización con el péptido SAP. • Interactuar con otros grupos del CONSOLIDER para la funcionalización de nanopartículas empleando nuestras metodologías. INA (V. Grazú, M. Arruebo, J. M. de la Fuente, J. Galbán)

6. Objetivos 2º año Logros alcanzados Preparación de Dendrosomas a partir de dendrímeros anfifílicos con interior lipofílico para encapsular fármacos de carácter hidrofóbico (colaboración con el grupo de M.J. Alonso). Estudios de citotoxicidad de los dendrímeros y dendrones preparados. Conjugación de dendrones cargados con doxorrubicina a SAP. Conjugación de dendrones a ácido fólico y/o marcadores fluorescentes. Puesta a punto de la metodología sintética para la preparación de sistemas “drug delivery” basados en dendrímeros tipo “PAMAM” Puesta a punto de la metodología sintética para la preparación de tres generaciones de dendrímeros tipo Fréchet de naturaleza anfifílica. Puesta a punto de la metodología para la unión de doxurrubicina a dendrones tipo Fréchet a través de un enlace hidrazona sensible al medio ácido. Se han preparado cuatro generaciones de dendrones. Colaboración con el grupo de E. Giralt para la puesta a punto de la preparación de dendrones Fréchet conjugados a SAP. J.L. SERRANO-T. SIERRA