Técnica de Conservación por Liofilización

1. BIOTECNOLOGÍA TECNICA DE CONSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACIÓN UNAM ILO-PERÚ 2022 ESTUDIANTE: Diego Waldir Hancco Larota DOCENTE: Hebert Hernan Soto Gonzales

2. 1.Historia Los orígenes de la técnica de conservación mediante la liofilización remontan en la época de los Incas, ene el siglo XV, este proceso era utilizado para la conservación de los alimentos, llevándolos a la cima de montañas, donde las bajas temperaturas congelaban sus reservas de alimentos y el agua del interior de los alimentos es evaporada lentamente a bajas presiones del aire en esas altitudes. Un ejemplo conocido es la elaboración del chuño, que tras pasar las papas por estos procesos podemos obtener el producto del chuño y se puede conservar a más de 4 años. 2.Diseño de conservación El diseño de conservación de microrganismo mediante el proceso de liofilización contempla los siguientes pasos: Crecimiento de cultivo bacteriano Formulación Proceso de liofilización Reconstitución Almacenamiento Sellado al vacío a.Formulación Es de importancia para optimizar la eficiencia de la liofilización, estabilidad, la seguridad y la fácil aplicación del producto. En la etapa de cultivación, hay dos tipos, una de ellas es por medio líquido, se centrifuga y se suspenden en un medio adecuado para la liofilización, lioprotector. Otro tipo de cultivo es el uso de agar, en este caso solo se realiza el lavado con el medio lioprotector. Evitando el paso de centrifugado. Dato a tomar es cuenta es de que los cultivos estén en etapa de crecimiento activo. Algunos de los lioprotectores son: la leche en polvo descremada, glicerol y sacarosa. b.Proceso de liofilización Contempla 3 etapas: congelado, secado primario y secado secundario. i.Congelado: Permite la inmovilización de los componentes de solución, reduce la desnaturalización del producto por calor en el secado y previene la ebullición evitando así la formación de espuma. Se puede congelar en un congelador a - 12°C, -20°C o -80°C, someterlo a una congelación progresiva -4°C, -12°C y -20°C o utilizando nitrógeno líquido (17,26,27). ii.Secado Primario Sublimación, es el paso en el cual se eleva la temperatura de la muestra congelada y se da la migración del agua desde la misma. Existe un punto, el punto triple, en el cual los tres estados coexisten, a presiones atmosféricas el hielo puede convertir directamente en vapor mediante sublimación.

3. La sublimación al vacío minimiza los efectos de concentración de producto lo cual garantiza un producto poroso, seco, activo y fácilmente soluble. Se debe mantener la temperatura a la que el producto es liofilizado. Para mantener la integridad del producto congelado y que sea una temperatura que maximice la presión de vapor del producto. iii.Secado Secundario Durante este proceso, la húmeda residente ligada es removida para lograr una estructura seca. Inicia por el aumento de la temperatura manteniendo baja presión para reducir el contenido de agua residual hasta el nivel deseado, para alcanzar un estado estable. iv.Sellado Los viales deben ser sellados al vacío, evitando el ingreso de reactivos, gases atmosféricos y aire húmedo que puedan provocar una desestabilización o contaminación del producto. v.Almacenamiento Alcanza mayor supervivencia cuando menor sea la temperatura de almacenamiento. vi.Reconstitución Adición de diluyente a la torta seca, los celulares viables se ven afectada por diferentes condiciones como el volumen de rehidratación, la temperatura, el pH y osmolaridad. 3.Insumos y Equipos a.Liofilizador de cultivos microbianos. i.Manivela de sellado. ii.Cámara de secado. iii.Condensador. iv.Sensor de temperatura y presión. v.Bomba de vacío. b.Congelador c.Vial para liofilizacion y tapas de goma 4.Bibliografía • Grauer, A. , Grunberg, K. y Zardo, S. (2015). Puesta a punto de un protocolo de liofilización para la creación de bancos bacterianos. Recuperado de : https://dspace.ort.edu.uy/bitstream/handle/20.500.11968/3172/Material%20co mpleto.pdf?sequence=-1&isAllowed=y • Castro F., Jean Franco (ed.) (2020) Conformación de colecciones de cultivos microbianos [en línea]. Chillan: Boletín INIA - Instituto de Investigaciones Agropecuarias. no. 428. Disponible en: https://hdl.handle.net/20.500.14001/6945 (Consultado: 9 mayo 2022).