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  1. Hierro-Sodio-Ácido Áscórbico Método Absorción Atómica Fe y Na Valoración oxidimétrica Vit C

  2. Validación de un método analítico. • Una vez desarrollado un método analítico, al igual que toda técnica analítica deberá validarse, es decir, se debe confirmar y documentar que los resultados producidos por el método son confiables. • En general, para validar existen 3 tipos de validación: • -Validación Prospectiva: es aquella validación realizada a métodos analíticos nuevos. • -Validación Retrospectiva: Para métodos analíticos antiguos, pero que se usan en forma rutinaria, y que no han sido validados. • -Revalidación: repetición parcial o total de una validación debido a cambios efectuados, que puedan afectar a la capacidad del método validado. (1) • La validación se puede realizar mediante estudios intralaboratorio o interlaboratorios. • -Estudios Intralaboratorio: este tipo de validación lo realiza un laboratorio individualmente, utilizando materiales de referencia, comparación con otro método, utilizando muestras blanco o muestras positivas fortificadas, etc. • -Estudios interlaboratorios: conjunto de mediciones a un nivel o varios niveles de concentración del analito problema, ejecutadas independientemente, por varios laboratorios, sobre muestras de un material dado. (11)

  3. Validación • Al momento de validar un método analítico se requiere actuar mediante procedimientos correctos entre los que se incluyen; una buena organización funcional; personal adecuadamente adiestrado en la aplicación del método; instalaciones adecuadas y suficientes; equipos, reactivos y material de laboratorio apropiado y en perfectas condiciones para su uso; métodos escritos, actualizados y aprobados. De esta forma se puede garantizar la calidad de los resultados obtenidos en el laboratorio.

  4. Parámetros Fundamentales de Validación. • Una vez que se ha realizado el ajuste de los parámetros y se ha probado con éxito el método en muestras, se está en condiciones de realizar la validación del método, para poder confirmar y documentar que los resultados obtenidos por el método son seguros y confiables • En el proceso de validación, los parámetros que generalmente son evaluados son: • -Selectividad • -Linealidad • -Precisión • -Exactitud • -Sensibilidad

  5. Validación • Selectividad () • La selectividad de un sistema depende de la interacción de todos los componentes, Longitud de onda, interferentes, etc y muestra.

  6. Selectividad o especificidad. • La selectividad o especificidad de un método analítico se refiere a la capacidad de un método de producir una señal medible debida sólo a la presencia del analito, libre de interferencias de otros componentes en la matriz de muestra, estas interferencias pueden ser productos de degradación, metabolitos del mismo analito en un fluido biológico, etc. • La selectividad se puede controlar simplemente por la adición, por ejemplo del doble de estándar puro, verificando el aumento de su señal.

  7. Linealidad. • La linealidad de un método analítico se refiere a la capacidad de un método de obtener resultados linealmente proporcionales entre la concentración de analito y su respuesta. Este parámetro se considera como un criterio inicial de validación, y es necesario verificarlo si se va a trabajar con un sólo estándar en las determinaciones de rutina. Al trabajar con estándares múltiples se puede aceptar métodos no lineales,. • Junto con establecer la linealidad del método se puede estimar el rango de linealidad del método, es decir, el intervalo de concentraciones para el cual el método ha demostrado responder en forma lineal y dentro del cual se puede estimar la cantidad de analito por interpolación. • Para determinar la linealidad se prepara una serie de, al menos, cinco diluciones de un estándar, las cuales deben estar de acuerdo con las cantidades esperadas de analito en la muestra. Se efectúa el análisis siguiendo exactamente el procedimiento descrito. • En procedimientos cromatográficos se recomienda efectuar las inyecciones por triplicado, a no ser que se use un patrón interno.. Para Absorción atómica a lo menos el promedio de 3 lecturas por concentración.

  8. El coeficiente de correlación(r) • a) Coeficiente de correlación (r). • El coeficiente de correlación refleja el grado de relación o ligazón entre las variables x (concentración), y (respuesta). El valor r = 1 indica una recta perfectamente lineal de pendiente positiva, r = -1 una recta perfectamente lineal de pendiente negativa y r =0 la no correlación entre x e y. En análisis químico se obtienen valores de r elevadas, iguales o superiores a 0,999, si bien en análisis de trazas se aceptan valores mas bajos (iguales o superiores a 0,99). • Sin embargo, el mejor indicador del modelo lineal no es r sino un test estadístico, en el cual se calcula un valor tr (n-2 grados de libertad y se compara con el valor de t tabulado para el nivel de confianza requerido. En este caso si tr es mayor que el t de tabla, significa que existe una correlación lineal entre x e y, para el nivel de confianza requerido. • tr = r(n-2)__ • (1-r2) • Donde: • r = coeficiente de correlación • n = numero de mediciones

  9. Curva de calibración que relaciona respuesta • área, alturas, absorbancia, etc., con concentración o cantidad de analito. La cual posteriormente se gráfica para su documentación e interpretación estadística. La recta de calibración es del tipo: • y = bx + a • Donde: • x = corresponde a la concentración • y = corresponde a la respuesta • b = el valor de la pendiente o variación de respuesta por unidad de concentración. • a = el termino independiente o intercepto sobre el eje Y. • Interpretación estadística de la regresión lineal. • La representación gráfica suele ser suficiente. Sin embargo conviene efectuar una interpretación estadística de la regresión lineal.

  10. b) Significación estadística de la varianza de la pendiente b • La pendiente b se llama también coeficiente de regresión, y se determina como parámetro indicativo de la sensibilidad, el cual a mayor pendiente, mayor sensibilidad (respuesta del método frente a los cambios de concentración del analito). La varianza de la pendiente Sb2 se utiliza como expresión matemática de la linealidad, a menor varianza mejor linealidad, para expresar la linealidad también se utiliza la desviación estándar de la pendiente Sb y el coeficiente de variación (%CV) • A su vez los limites de confianza de la pendiente se hallan a partir de la expresión: • b + t Sb • Donde: • b = valor de la pendiente • t = valor de la distribución de Student para n-2 grados de libertad para el grado de confianza escogido. • Sb = desviación estándar de la pendiente.

  11. c) Significación estadística de la varianza de la ordenada al origen El valor de a ( ordenada al origen), se determina para verificar si la recta pasa por el origen y que cualquier desviación puede adjudicarse únicamente a valores aleatorios, por lo que en un caso ideal debe ser cero. Al igual que en el caso de la pendiente para poder obtener los intervalos de confianza de la ordenada al origen se calcula en función de su varianza Sa2, su desviación estándar Sa. Y estos se hallan a través de la formula: • a+ t Sa • Donde: • a = valor de la ordenada al origen. • t = valor de la distribución de student para n-2 grados de libertad para el grado de confianza escogido. • Sa = desviación estándar de a

  12. Precisión • La precisión es el grado de concordancia entre los valores de una serie repetida de ensayos analíticos efectuados sobre una muestra homogénea o, expresado de otra forma, la dispersión de los valores analíticos alrededor de su media. La precisión indica la capacidad del método para dar resultados semejantes cuando se aplica repetidamente a una muestra. • La precisión se expresa matemáticamente por la media para el valor central y la desviación estándar para la dispersión de los resultados, y más comúnmente por la desviación estándar relativa (RSD). • La precisión requiere del análisis sobre una muestra y la precisión así obtenida se denomina del método, puesto que incluye todo el procedimiento analítico, desde la preparación de la muestra hasta la lectura instrumental. También se puede determinar directamente la precisión del sistema, hallando la variabilidad de respuesta de una solución patrón. Por lo que la precisión se distinguirá en 2 tipos de estudios:

  13. Precisión • -Precisión del sistema: la cual evalúa la dispersión de al menos 6 inyecciones del estándar o repeticiones de lecturas de absorbancias. • -Precisión del método: evaluando la dispersión de varias preparaciones de la muestra final homogénea • A su vez la precisión deberá medirse en condiciones repetitivas, es decir, mismas condiciones, sobre la misma muestra, por un mismo analista, en el mismo laboratorio, el mismo día y con los mismos aparatos y reactivos. • También debe medirse en condiciones reproducibles, es decir, medir la precisión de un método, efectuado sobre la misma muestra pero en condiciones diferentes, analistas, aparatos, días, etc. • El cociente repetibilidad/reproducibilidad, es de gran utilidad para evaluar la precisión de un método analítico. Su valor según estudios realizados por la AOAC es normalmente comprendido entre 1,5 y 2. Valores mayores a 2 son indicadores de un método muy personal y valores inferiores a 1,5 indican pobre repetibilidad.

  14. Precisión • Los criterios de aceptación pueden ser variables, por ejemplo la USP indica una RSD del sistema de no más de 2%, inyectando 5 veces una solución estándar. Existen tablas que relacionan la RSD máxima aceptable para un método analítico en función de los límites de aceptación y del número de réplicas. • En muchos casos debe indicarse el intervalo de confianza de la medida, es decir el rango en el cual se encuentra presente el analito, preferentemente, cuando el numero de muestras es pequeño (menor de 30), las medidas independientes, y la distribución normal, puede calcularse de acuerdo a la distribución de Student según la formula: • X - t, x S <  < X + t, x S • n n • Donde: • X = promedio de las mediciones • t, = es el valor de Student, tabulado para n mediciones con = n-1 grados de libertad y para el nivel  de confianza empleado, generalmente 95%. • S = desviación estándar de las mediciones • n = numero de mediciones.

  15. Sensibilidad • La sensibilidad de un método analítico se relaciona con la cantidad mínima de analito requerida para dar un resultado significativo, cualitativo o cuantitativo. Debe distinguirse entre sensibilidad de calibrado y sensibilidad analítica. • a) Sensibilidad de calibrado: corresponde a la pendiente de la recta de calibración, es decir, la señal o respuesta por unidad de concentración. • b) Sensibilidad analítica: corresponde a la sensibilidad de calibrado dividida por la desviación estándar de la respuesta. • Los parámetros a definir para poder evaluar la sensibilidad de un método analítico son los limites de detección y de cuantificación.

  16. Los pasos a seguir son los siguientes: • a) Se determina la pendiente de la curva de calibración (concentración v/s respuesta) en el rango apropiado: • b) Se realiza otra curva de calibración, inyectando cada punto por triplicado, pero en este caso para concentraciones menores de analito, determinándose la ecuación de esta nueva recta de calibración y se extrapola la respuesta a concentración cero, obteniéndose un estimado de la respuesta del blanco: Ybl • c) Se determina la desviación estándar correspondiente a cada concentración del punto 2, se calcula la recta correspondiente a concentración v/s s y se extrapola como en el caso anterior la desviación estándar a concentración cero, obteniéndose el estimado correspondiente a la desviación estándar del blanco: Sbl

  17. a) Limite de detección: • corresponde según la USP XXII, a la menor concentración de analito en una muestra que puede ser detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo las condiciones experimentales establecidas y se expresa en unidades de concentración (%, ppm, ppb, etc.). Se calcula como: • Limite de detección = Ybl + 3 Sbl_ • b • Donde: • Ybl = valor estimado de la respuesta del blanco. • Sbl = desviación estándar estimada del blanco • b = pendiente de la curva de calibración.

  18. b) Limite de cuantificación: • según USP XXII, la menor concentración de analito de una muestra que puede ser cuantificada con precisión y exactitud aceptable bajo las condiciones experimentales establecidas y se expresa también en unidades de concentración. Se calcula según: • Limite de cuantificación: = Ybl + 10 Sbl_ • b • Donde: • Ybl = valor estimado de la respuesta del blanco. • Sbl = desviación estándar estimada del blanco • b = pendiente de la curva de calibración. • Los límites de detección y cuantificación se estiman a partir de la curva de regresión o calibración, siempre que se hayan considerado concentraciones bajas de analito, por extrapolación a concentración cero.

  19. Exactitud. • La exactitud de un método, también conocida como error sistemático o tendencia, corresponde a la capacidad del método analítico para dar resultados lo más próximos posibles al valor verdadero. La exactitud o bien podríamos llamarla inexactitud, debe ser tan pequeña como sea posible, para que el valor promedio se aproxime al de referencia, es decir, la recuperación del analito debe acercarse al 100%. • No deben confundirse exactitud y precisión. La precisión está relacionada con la dispersión de una serie de mediciones, pero no da ninguna indicación de lo cerca que están del valor verdadero. Se pueden tener mediciones muy precisas pero poco exactas.

  20. Exactitud. • Matemáticamente la exactitud se expresa en forma de porcentaje de recuperación de la cantidad de analito presente en la muestra, o bien en forma de diferencia entre el valor hallado y el valor verdadero. Si bien el valor verdadero de concentración no se conoce sino que solo puede estimarse, es posible preparar una muestra por un procedimiento más exacto, y utilizarla como referencia. • Recuperación: R= X_ x 100 • X • Donde: •  • X = valor verdadero • X = promedio de las mediciones

  21. Exactitud • En el análisis de trazas (micro componentes), no siempre se alcanzan recuperaciones tan elevadas y se consideran valores habituales de recuperación entre el 60 y 80%. Para determinar si el valor medio hallado y el valor considerado verdadero no difieren significativamente, para esto se efectúa un test estadístico, como lo es el test de Student, para un nivel de confianza determinado. El test de Student emplea, al menos, 3 concentraciones del analito, preparadas por triplicado, comprendidas dentro del rango de linealidad del sistema, en general se utilizan concentraciones correspondientes al 80, 100 y 120% del valor esperado.

  22. Exactitud. • En este caso, el valor de t se calcula como: • texp = (100-R)_ • RSD x n • Donde: • R = recuperación porcentual. • RSD = desviación estándar relativa de las mediciones • n = número de repeticiones • Los valores de texp se comparan con los tabulados para el intervalo de confianza requerido con n-1 grados de libertad, y la exactitud se evalúa para el promedio de recuperación de todas las concentraciones. Si texp < ttabla, no existe diferencia significativa con el 100% de recuperación y la exactitud es apropiada. (1)

  23. Test de ANOVA- homogeneidad

  24. Exactitud

  25. Sodio Método Espectrofotometría de Absorción atómica

  26. Papel biológico • El catión sodio (Na+) tiene un papel fundamental en el metabolismocelular, por ejemplo, en la transmisión del impulso nervioso (mediante el mecanismo de bomba de sodio-potasio). Mantiene el volumen y la osmolaridad. Participa, además del impulso nervioso, en la contracción muscular, el equilibrio ácido-base y la absorción de nutrientes por las células. • La concentración plasmática de sodio es en condiciones normales de 135 - 145 mmol/l. El aumento de sodio en la sangre se conoce como hipernatremia y su disminución hiponatremia

  27. Compuestos • Los compuestos de sodio de mayor importancia industrial son: • Sal común (NaCl). • Carbonato de sodio (Na2CO3). • Bicarbonato de sodio (NaHCO3). • Sosa cáustica (NaOH). El hidróxido de sodio, más conocido como soda cáustica, es una base muy fuerte y corrosiva usada en productos destinados a la limpieza de desagües y al desengrase de hornos. Cuando se disuelve en agua produce una reacción muy exotérmica (-42,9 kJ/mol). Su poder corrosivo hace de la soda cáustica un compuesto letal para los tejidos vivos y los compuestos orgánicos, e incluso puede atacar al vidrio en caso de que el contacto sea permanente. En presencia del dióxido de carbono atmosférico produce carbonato de sodio, por lo que sus soluciones son poco estables. • Nitrato de sodio (NaNO3). • Tiosulfato de sodio (Na2S2O3 · 5H2O). • Bórax (Na2B4O7 · 10H2O). • Yoduro de sodio (NaI)

  28. Sodio en la dieta • La mayor fuente de sodio es el cloruro de sodio o una ración común de sal, del cual el sodio constituye el 40%. Sin embargo, todos los alimentos contienen sodio en forma natural, siendo más predominante la concentración en alimentos de origen animal que vegetal. Aproximadamente 3 gr. de sodio están contenidos en los alimentos que se consumen diariamente, sin la adición de cloruro de sodio o sal común, esto es importante considerarlo en pacientes que tengan una restricción o disminución en la ingesta de sal diaria (pacientes nefrópatas, diabéticos, hipertensos). El requerimiento de sodio es de 500 mg /día aproximadamente (3). La mayoría de las personas consumen más sodio que el que fisiológicamente necesitan, para ciertas personas con presión arterial sensible al sodio, esta cantidad extra puede causar efectos negativos sobre la salud.

  29. REFERENCIAS • AOAC Official Method 985.35. AOAC Official Methods of Analysis (2005). Cp. 50, p.15. • M Series Atomic Absorption, Manual de operación,1999-2006 Thermo Electron Manufacturing Ltda. • Spectrometers Manual de Métodos, 9499 230 24011, Issue 4 280804. Thermo Electron Corporation

  30. Optimización del equipo • 1.- Realizar la puesta a punto y optimización de las condiciones del espectrofotómetro (ajuste de quemador y lámpara) para el metal a determinar siguiendo las indicaciones del manual o instructivo del equipo de medición. • 2. Aspirar por el capilar del quemador blanco y haga autocero. Ajustar la sensibilidad con concentración de estándar referencial indicado en el manual para lograr la máxima sensibilidad. • 3. Aspirar las soluciones estándares de la curva de calibración en orden decreciente por el capilar del quemador y leer en E.A.A. Para realizar la calibración se deben usar a lo menos 3 estándar y un blanco. El coeficiente de correlación de la curva de regresión lineal debe ser > 0,99. • 4. Aceptar curva de calibración, aspirar un material de referencia control o una solución control del analito a analizar, verificar que se encuentra dentro del rango de aceptabilidad. • 5. Proceder a realizar las lecturas de las muestras en el EAA. • 6. Las lecturas son obtenidas por interpolación desde la curva de calibración y están expresados en mg/L del analito correspondiente. • 7. En caso, de que el valor este fuera de rango del máximo de la curva de calibración, realice una dilución y registre el valor del factor de dilución (F.D.) aplicado. • 8. Registre los valores obtenidos.

  31. Reactivos • 6.3.1. Solución estándar stock comercial de multielementos de metales, 100 mg/L, certificada. • 6.3.2. Solución estándar stock comercial de Sodio 1000 mg/L, certificada. 6.3.3. Gases calidad AAS: Acetileno 99.99% , Oxido nitroso 99.99%. • 6.3.4. Agua grado reactivo, destilada o desionizada, tipo I. • 6.3.5. Acido nítrico (HNO3) 65% 14 N, calidad AAS.(suprapur) • 6.3.6. Acido clorhídrico (HCl) 37%, p.a. • 6.3.7. Oxido de lantano (La2O3), 99.99%, calidad AAS. • 6.3.8. Solución de cloruro de lantano ( LaCl3, 1% p/v): Pesar 11,7 g (+/- 100mg) de La2O3 y llevar a un matraz aforado de 1L, agregar un poco de agua grado reactivo para disolver el polvo, agregar bajo campana lentamente 50 mL de HCl 37% ( Precaución: ¡Reacción exotérmica!). Agitar suavemente, hasta disolver todo el reactivo y luego aforar con agua grado reactivo. Estable 6 meses a temperatura ambiente. • 6.3.9. Solución de ácido nítrico 20% v/v para eliminación de trazas en lavado de material: En un contenedor de plástico para lavar material, agregar 5 l de agua grado reactivo, luego, medir 1L de HNO3 65% con una probeta, verter agitando lentamente al contenedor con el agua grado reactivo y mezclar suavemente. • 6.3.10. Solución de ácido nítrico 1M: en un matraz de 1 L agregar unos 200 mL de agua grado reactivo, luego medir 71,5 mL de HNO3 65% 14N y agregar bajo campana lentamente al matraz (Precaución: ¡Reacción exotérmica!), aforar con agua grado reactivo y agitar. Almacenar en frasco vidrio o plástico ámbar. Duración 6 meses a temperatura ambiente.

  32. Selectividad Sodio • Para determinar la selectividad se utilizó un material de referencia matriz liquida multielementos trazables al NIST, con adición de oxido de lantano acorde a la metodología analítica, con lo cual se pudo observar que el método presenta una buena selectividad.

  33. Determinación de SodioDigestión de la muestra • Moler y homogeneizar la muestra .. • Pesar exactamente en un crisol + 3 g de muestra dependiendo de la concentración esperada del o los analitos. Registre el peso. • Colocar el crisol con la muestra sin tapar en placa calefactora, estufa o mufla a 100º C por 30 minutos. • Colocar el crisol con la muestra tapado en mufla a 525ºC por un periodo de 3 a 5 hrs (< 8 hrs), hasta obtener cenizas blancas. De obtenerse cenizas grises dejar enfriar y agregar al crisol de 0,5 a 3 mL aproximadamente de HNO3 65%, colocar el crisol destapado en placa calefactora a unos 100ºC, hasta evaporar. (realizar procedimiento bajo campana extractora de gases).Luego llevar nuevamente mufla a 525ºC por 1 a 2 hrs hasta cenizas blancas. • Digerir las cenizas blancas contenidas en el crisol con 5 mL de HNO3 1M en placa calefactora cuantitativamente llevar el licor de cenizas a un matraz aforado de 50 mL, a través de 2 lavados con porciones de alrededor de 3 mL de HNO3 1M, agregar al matraz 5 mL de LaCl3, 1% p/v y aforar con HNO31M. La solución esta lista para ser leída.

  34. Sodio 1

  35. Sodio 2

  36. Hierro Método Espectrofotometría de Absorción atómica con Llama

  37. Metabolismo del hierro • Aunque solo existe en pequeñas cantidades en los seres vivos, el hierro ha asumido en papel vital en el crecimiento y en la supervivencia de los mismos y es necesario no solo para lograr una adecuada oxigenacion tisular sino también para el metabolismo de la mayor parte de las células. El hierro es el elemento numero 26 en la tabla periódica y tiene un peso atómico de 55,85. Es el cuarto elemento en abundancia y el segundo metal más abundante en la corteza terrestre. El hierro fue seleccionado en la evolución de los tiempos de entre muchos metales transicionales para formar la ENERGIA VITAL en la fisiología de los vertebrados. • En la actualidad con un incremento en el oxigeno atmosférico el hierro se encuentra en el medio ambiente casi exclusivamente en forma oxidada (ó ferrica ó Fe+++) y en esta forma es poco utilizable. • En los adultos sanos el hierro corporal total es de 3 a 4 gramos ó 35 mg/kg en las mujeres a 50 mg/kg en los hombre se encuentra distribuido en dos formas: • 70% como hierro funcional (2.8g): • Eritrocitos (65%). • Tisular: mioglobinas (4%). • Enzimas dependientes del hierro (hem y no hem): 1% • Estas son enzimas esenciales para la función de las mitocondrias y que controlan la oxidación intracelular (citocromos, oxidasas del citrocromo, catalasas, peroxidasas). • Transferrina (0.1%), la cual se encuentra normalmente saturada en 1/3 con hierro. • La mayor atención con relación a este tipo de hierro se ha enfocado hacia el eritrón, ya que su estatus de hierro puede ser fácilmente medible y constituye la principal fracción del hierro corporal.

  38. 30% como hierro de depósito (1g): • Ferritina (2/3). • Hemosiderina (1/3). • Hemoglobina: transporta el oxigeno a las celulas. • Transferrina: transporta el hierro a través del plasma. • Ferritina: principal forma de deposito del hierro en los tejidos. • Estudios recientes de disponibilidad del hierro de los alimentos han demostrado que el hierro del hem es absorbido bien, pero el hierro no hem se absorbe en general muy pobremente y este ultimo es el hierro que predomina en la dieta de gran cantidad de gente en el mundo.[cita requerida] • Hem: como hemoglobina y mioglobina, presente principalmente en la carne y derivados. No hem. • La absorción del hierro hem no es afectada por ningun factor ni dietetico, ni de secreción gastrointestinal. Se absorbe tal cual dentro del anillo porfirinico. El hierro es liberado dentro de las celulas de la mucosa por la HEM oxigenasa, enzima que abunda en las celulas intestinales del duodeno. • Las absorción del hierro no hem, por el contrario se encuentra afectada por una gran contidad de factores dieteticos y de secreción gastrointestinal que se analizanran posteriormente. • El hierro procedente de la dieta, especialmente el no hem, es hierro férrico y debe ser convertido en hierro ferroso a nivel gástrico antes que ocurra su absorción en esta forma (hierro ferroso) a nivel duodenal principalmente. • Otros factores, independientes de la dieta que pueden influir en la absorción del hierro son:

  39. Funciones Hierro • El hierro se encuentra en prácticamente todos los seres vivos y cumple numerosas y variadas funciones. • Hay distintas proteínas que contienen el grupo hemo, que consiste en el ligandoporfirina con un átomo de hierro. Algunos ejemplos: • La hemoglobina y la mioglobina; la primera transporta oxígeno, O2, y la segunda lo almacena. • Los citocromos; los citocromos c catalizan la reducción de oxígeno a agua. Los citocromos P450 catalizan la oxidación de compuestos hidrofóbicos, como fármacos o drogas, para que puedan ser excretados, y participan en la síntesis de distintas moléculas. • Las peroxidasas y catalasas catalizan la oxidación de peróxidos, H2O2, que son tóxicos. • Ejemplo de centro de una proteína de Fe/S (ferredoxina) • Las proteínas de hierro/azufre (Fe/S) participan en procesos de transferencia de electrones. • También se puede encontrar proteínas en donde átomos de hierro se enlazan entre sí a través de enlaces puente de oxígeno. Se denominan proteínas Fe-O-Fe. Algunos ejemplos: • Las bacterias metanotróficas, que emplean el metano, CH4, como fuente de energía y de carbono, usan proteínas de este tipo, llamadas monooxigenasas, para catalizar la oxidación de este metano. • La hemeritrina transporta oxígeno en algunos organismos marinos. • Algunas ribonucleótido reductasas contienen hierro. Catalizan la formación de desoxinucleótidos. • Los animales para transportar el hierro dentro del cuerpo emplean unas proteínas llamadas transferrinas. Para almacenarlo emplean la ferritina y la hemosiderina. El hierro entra en el organismo al ser absorbido en el intestino delgado y es transportado o almacenado por esas proteínas. La mayor parte del hierro se reutiliza y muy poco se excreta. • Tanto el exceso como el defecto de hierro pueden provocar problemas en el organismo. El envenamiento por hierro ocurre debido a la ingesta exagerada de esté (como suplemento en el tratamiento de anemias). • La hemocromatosis corresponde a una enfermedad de origen genético, en la cual ocurre una excesiva absorción del hierro, el cual se deposita en el hígado, causando disfunción de este y eventualmente llegando a la cirrosis hepática. En las transfusiones de sangre se emplean ligandos que forman con el hierro complejos de una alta estabilidad para evitar que quede demasiado hierro libre. • Estos ligandos se conocen como sideróforos. Muchos microorganismos emplean estos sideróforos para captar el hierro que necesitan. También se pueden emplear como antibióticos, pues no dejan hierro libre disponible.

  40. REFERENCIAS • Official methods of analysis AOAC 15 th edition, vol 2, pág 1106,1107, año 1990 • M Series Atomic Absorption, Manual de operación,1999-2006 Thermo Electron Manufacturing Ltda. • Spectrometers Manual de Métodos, 9499 230 24011, Issue 4 280804. Thermo Electron Corporation

  41. Selectividad • Dada que las líneas de emisión de la lámpara del cátodo hueco de Fe son muy estrechas es rara la interferencia. Si interfiere en la dispersión de la luz la combustión incompleta de la matriz orgánica o Interferente espectral hierro 213,859 nm y el Zinc 213,856 lo cual produce una sobreposición de 0,003 nm • Para determinar la selectividad se utilizó una matriz de harina sin fortificar (grado de extracción, 78%), y una matriz de harina con adición de estándar de hierro y sulfato y pirofosfato de hierro con lo cual se pudo observar que el método presenta una buena selectividad, ya que las matrices no se ven afectadas por la presencia de otros analitos interferentes

  42. Reactivos, insumos • Matraces aforados de 50 mL • Piseta • Espátula, toalla absorbente, plumón permanente • Cápsulas de porcelana para digestión de 25cm de diámetro • Elementos de seguridad como guantes y anteojos • Balanza analítica sensibilidad 0.1 mg • Campana de extracción de gases • Espectrofotómetro de absorción atómica con llama • Homogeneizador de muestras • Plancha calefactora • Agua para análisis, desionizada • Ácido clorhídrico 37 % p.a. • Ácido nítrico 65% p.a • Estándar de Hierro o multielementos • Lámpara de hierro • Micropipeta de 100ul a 1000 ul

  43. Curva de calibración de estándares 1.- Estándares de hierro solución concentrada de 1000 mg/L. o St multielemenos 100 ppm 2.- Estándar de 5 mg/L: tomar 0,5 mL del estándar concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL concentrado y aforar a 100 mL con agua desionizada. 3.- Estándar de 2 mg/L: tomar 0,2 mL del estándar concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL concentrado y aforar a 100 mL con agua desionizada. 4.- Estándar de 1 mg/L: tomar 0,1 mL del estándar concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL concentrado y aforar a 100 mL con agua desionizada

  44. Condiciones del equipo de FLAA • Longitud de Onda 248,3 nm • Franja de paso (slite) 0,2 nm • Tipo de Llama Aire-acetileno • Flujo de Combustible 0,8 a1,0 L/min • Corriente de la lámpara 75 • Tipo de señal Continua • T° de ignición 800°C • T° de atomización 2300 °C • Corrector de background on

  45. Determinación de HierroDigestión de la muestra • Moler y homogeneizar la muestra .. • Pesar exactamente en un crisol + 3 g de muestra dependiendo de la concentración esperada del o los analitos. Registre el peso. • Colocar el crisol con la muestra sin tapar en placa calefactora, estufa o mufla a 100ºC por 30 minutos. • Colocar el crisol con la muestra tapado en mufla a 550ºC por un periodo de 5 a 6 hrs (< 8 hrs), hasta obtener cenizas blancas. De obtenerse cenizas grises dejar enfriar y agregar al crisol de 0,5 a 3 mL aproximadamente de HCL 1:1 colocar el crisol destapado en placa calefactora a unos 100ºC, hasta evaporar. (realizar procedimiento bajo campana extractora de gases).Luego llevar nuevamente mufla a 550ºC por 1 a 2 hrs hasta cenizas blancas. • Digerir las cenizas blancas contenidas en el crisol con 5 mL de HCL 1:1 en placa calefactora cuantitativamente llevar el licor de cenizas a un matraz aforado de 50 mL, a través de 2 lavados con porciones de alrededor de 3 mL de HCL 1:1, aforar con agua. La solución esta lista para ser leída.

  46. Test de ANOVA- homogeneidad

  47. Interpretación, cálculos, expresión e informede los resultados • Para calcular la concentración de sodio o hierro en la muestra en mg/kg, aplique la siguiente formula: • mg/Kg del analito = L x 50 x F.D. • P • L: Lectura de la concentración en mg/L obtenida por la interpolación de la curva de calibración. • FD: Factor de dilución. En caso de no realizar ninguna dilución, es igual a 1. • P: Peso de la muestra en gramos • Los resultados obtenidos se expresan en muestras sólidas mg/Kg o en muestras líquidas mg/L • ENO sodio en mg/100g y mg/porción de consumo habitual

  48. ÁCIDO ASCÓRBICO Método J.Tillman

  49. La Vitamina C o enantiómero L del ácido ascórbico, • es un nutriente esencial para los primates superiores y un pequeño número de otras especies. La presencia de esta vitamina es requerida para un cierto número de reacciones metabólicas en todos los animales y plantas y es creada internamente por casi todos los organismos, siendo los humanos una notable excepción. Es ampliamente sabido que su deficiencia causa escorbuto en humanos,123 de ahí el nombre de ascórbico que se le da al ácido. Es también ampliamente usado como aditivo alimentario. • El farmacóforo de la vitamina C es el ion ascorbato. En organismos vivos, el ascorbato es un antioxidante, pues protege el cuerpo contra la oxidación, y es un cofactor en varias reaciones enzimáticas vitales.