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茄科枯萎病原菌致病性分化 及其与植株内生菌的相互关系

茄科枯萎病原菌致病性分化 及其与植株内生菌的相互关系. 报告人：朱磊. 福建省农科院农业生物资源研究所 农业微生物研究中心. 主要内容. 前期已经开展的工作 下一步实验计划. 前期已经开展的工作 病原菌采集分离. 枯萎病的发生. 菌落形态. 病原菌的鉴定. 形态学 分子鉴定 ITS4/ITS5 FU3/FU4 FOF1/FOR1 53-6F/53-6R Fusof/Fusor. FU3/FU4. Fu3:5’CCG AGT TTA CAA CTC CCA AA3’ ; Fu4:5’TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC3’.

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茄科枯萎病原菌致病性分化 及其与植株内生菌的相互关系

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Presentation Transcript

  1. 茄科枯萎病原菌致病性分化及其与植株内生菌的相互关系茄科枯萎病原菌致病性分化及其与植株内生菌的相互关系 报告人：朱磊 福建省农科院农业生物资源研究所 农业微生物研究中心

  2. 主要内容 • 前期已经开展的工作 • 下一步实验计划

  3. 前期已经开展的工作病原菌采集分离 枯萎病的发生

  4. 菌落形态

  5. 病原菌的鉴定 • 形态学 • 分子鉴定 ITS4/ITS5 FU3/FU4 FOF1/FOR1 53-6F/53-6R Fusof/Fusor

  6. FU3/FU4 Fu3:5’CCG AGT TTA CAA CTC CCA AA3’ ; Fu4:5’TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC3’

  7. FOF1/FOR1 FOF1：5′-ACA TAC CAC TTG TTGCCT CG-3′； FOR1：5′-CGC CAA TCA ATT TGAGGA ACG-3′

  8. 茄科枯萎病原菌的GFP基因标记 质粒PCT74，强组成型表达sGFP的载体，采用真菌Pyrenophora tritici-repentis的ToxA启动子，同时具有潮霉素B磷酸转移酶基因。

  9. 原生质体 初生转化子 • 原生质体制备: 20mg/ml Drease,20mg/ml 融壁酶，酶解消化3h

  10. 0 100 200 300 400 • 转化子对潮霉素（μg·mL-1）抗性水平分析

  11. 转化子的验证 Hmb验证 3601 3602 3606 3609 3611 3612 282 282 282 Hmb 200ug/mL

  12. PCR验证 PCR引物 P28：5/TAGTGGACTGATTGGAATGCATGGAGGAGT3/ P29：5/GATAGAACCCATGGCCTATATTCATTCAAT3/ 扩增片断大小为417bp，区域为约325 bp的启动子序列和约90bp ToxA基因5/端非翻译区。

  13. 分生孢子 菌丝

  14. 下一步实验计划 • 利用GFP菌株跟踪观察病原菌在植株体内的侵染特性、致病机理 • 共聚焦激光扫描显微镜 • 能检测到单个标记GFP菌株 • 能消除杂散荧光等的干扰，图像更加清晰 • 逐层扫描，可对活体、固定的细胞组织进行观察 • 了解菌株在植物体表、体内的定制和基因表达情况

  15. 健康和发病状态的茄科植物内生菌群落分析 平板分离 PLFA分析 • 健康和发病状态的茄科植物根系微生物群落分析 平板分离 PLFA分析

  16. Thankyou

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