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Polymerase-Kettenreaktion

Polymerase-Kettenreaktion. Inhalt. 1. Geschichtliches 2.1 Grundprinzip 2.2 Materialien 3. Varianten. 1. Geschichtliches. Erfunden 1983 von Karry Banks Mullis Nobelpreis für Chemie (1993). 2.1 Grundprinzip. 3 Phasen: Denaturierung 92-98°C Primer-Annealing 55-80°C

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Polymerase-Kettenreaktion

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Presentation Transcript

  1. Polymerase-Kettenreaktion

  2. Inhalt 1. Geschichtliches 2.1 Grundprinzip 2.2 Materialien 3. Varianten

  3. 1. Geschichtliches • Erfunden 1983 von Karry Banks Mullis • Nobelpreis für Chemie (1993)

  4. 2.1 Grundprinzip 3 Phasen: • Denaturierung 92-98°C • Primer-Annealing 55-80°C • Primer-Extension 72°C

  5. 2.2 Materialien • DNA-Polymerase • Thermus aquaticus (taq) • Tth, Pwo, Pfu • Primer • sequenzspezifische • degenerierte • Random • Oligo-(dT)

  6. 2.2 Materialien • Nucleotide • Desoxynucleotidtriphosphate (dNTP) • Puffer

  7. 3. Varianten RT-PCR = Amplifikation von RNA 1. Umschreiben der RNA in DNA mittels Reverser Transkriptasen 2. PCR

  8. 3. Varianten • Asymmetrische PCR • ein Primer im Überschuss • Quantitative PCR • Vergleich mit Referenzstandard • Multiplex PCR • mehrere spezifische Primer

  9. 3. Varianten In-vitro-Mutagenese • Deletion Analog dazu: • Insertion • Substitution

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