临床基因扩增检验实验室的设置、质量管理体系的建立及其技术验收

1. 临床基因扩增检验实验室的设置、质量管理体系的建立及其技术验收临床基因扩增检验实验室的设置、质量管理体系的建立及其技术验收 山东省临床检验中心 邵 松

2. 80年代以来，以核酸为基础的分子诊断技术发展很快，特别随着DNA序列分析、分子合成自动化技术的出现，基因检测技术已应用到生命科学工农业生产领域，极大的推动了人类社会的发展，基因扩增技术在医学领域已广泛应用于微生物学、遗传学、法医学等多个学科。80年代以来，以核酸为基础的分子诊断技术发展很快，特别随着DNA序列分析、分子合成自动化技术的出现，基因检测技术已应用到生命科学工农业生产领域，极大的推动了人类社会的发展，基因扩增技术在医学领域已广泛应用于微生物学、遗传学、法医学等多个学科。

3. 临床基因扩增检验实验室的设置 卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）。 卫生部临床检验中心《临床基因扩增检验实验室工作规范》

4. 临床标本的接收 • 地点 • 原始容器 • 防止泄露和污染 • 唯一性编号 • 保存条件

5. 基因扩增检验实验室设置的一般要求及工作流程基因扩增检验实验室设置的一般要求及工作流程 • 临床基因扩增检验实验室设立在二级以上医院。 • 四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区；标本制备区；扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区，如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。

6. 基因扩增检验实验室设置的一般要求及工作流程基因扩增检验实验室设置的一般要求及工作流程 • 各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。 • 进入各工作区域必须严格按照单一流向进行，即试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。

8. 临床基因实验室的设置基本要求 • 四个区域必须是相互独立的 • 各区的仪器设备及各种物品必须是专用的 • 各区间间不能直通，应有缓冲间，供换工作服及鞋帽用 • 产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置

9. 试剂准备区 仪器设备配置标准： 2～8℃和-15℃冰箱；混匀器；微量加样器（覆盖1～1000µl）；移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。超净台。

10. 试剂准备区 • 试剂分装应在超净台中进行 • 扩增反应混合液应使用分子生物学级的，试剂制备好后应有质检： 一是否有污染（是否有假阳性存在）、二是使用弱阳性质控物检测试剂的扩增效果。

11. 标本制备区 仪器设备配置标准： 生物安全柜 ，2～8℃冰箱，-20℃或-80℃冰箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器（覆盖1～1000µl）；可移动紫外灯（近工作台面）；超净工作台，消耗品；一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。

12. 标本制备区 标本的制备应在生物安全柜内进行，可防止气溶胶的扩散。标本制备全过程都应戴一次性手套，并经常更换，手套污染很容易导致标本间的交叉污染。处理具有传染危险性的标本时，最好戴双层手套，当手套与标本有接触时即可弃掉外层手套。

13. 标本制备区 实验时所用的加样吸头必须带滤塞，并注意滤塞不能是后插入的而是结合在吸头内壁上疏水性膜滤塞，这样才能有效防止气溶胶对加样器的污染。

14. 标本制备区 温育既可在加热模块也可在水浴中进行。加热模块和水浴应在每次使用时，都要对所设置的温度使用已经校准的温度计进行校准。 标本制备区内设备都应使用10%次氯酸钠溶液消毒，然后用水或70%乙醇去除残留的次氯酸纳.

15. 扩增区 仪器设备配置标准： 核酸扩增仪；微量加样器（覆盖1～1000µl）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。超净台。配备UPS电源。

16. 扩增区 加样时，先加提取的核酸模板样本，然后加阳性质控核酸模板，再就是标本制备阴性质控和仅含按样本一样稀释的主反应混合液的扩增阴性质控。这样做的目的是最大可能地测出以前扩增产物的交叉污染。

17. 产物分析区 视检测方法不同而定。基本仪器设备如下：微量加样器（覆盖1～200µl）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。

18. 产物分析区 • 本区是唯一能打开扩增后反应管的地方。由于本工作区应设置为负压状态，空气流向为由外向内，以防止扩增产物气溶胶流出，故本区可无缓冲间。 • 本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等，酶标仪应定期校准，洗板机每次使用完都应进行清洗，其它如加样器和水浴箱可按有关方法进行校准。

19. 质量管理体系的建立 • 质量手册 • 程序文件 • 标准操作程序（SOP）

20. 质量手册 定义：阐明一个实验室的质量方针，质量体系与质量工作的文件。 主要内容包括目录、批准页、前言、质量方针、组织结构、人员职责、实验室设施环境、仪器设备、溯源性、检验方法、标本管理、记录、报告等，是对上述各方面质量管理的一般性描述。

21. 程序文件 程序文件则是对通用于整个实验室的某些方面工作的文件化描述。 主要包括实验室文件和档案等的管理、内审、管理评审、人员培训、投诉处理、保密、计算机管理、新项目开展、量值溯源、仪器设备及实验用品购买、标本管理、废物处理等方面

22. 标准操作程序 SOP最为具体，最具有可操作性，也是使用频率最高的文件，与实验室的日常工作密切相关。如某个具体的项目临床标本的收集、处理、保存、检测等，具体仪器的操作使用、校准及维护等。 SOP文件与程序文件之间的区别在于后者的原则性要强一些，针对的是一个系列或一个方面的工作。

23. 质量管理的内涵 • 写你应做的。 • 做你所写的。 • 记录你已做的。

24. 怎样编写SOP？

25. 临床基因扩增检验实验室技术验收意义 • 开创临床检验技术准入的先河 • 推动临床实验室标准化建设 • 规范检验市场 • 建立医疗事故预防机制

26. 临床基因扩增检验实验室技术验收 依据： • 《临床检验扩增检验实验室管理暂行办法》 卫医发[2002]10号 • 《临床基因扩增检验实验室工作规范》 卫检字2002第8号

27. 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》 卫医发[2002]10号 第二章 实验室设置和验收第七条 卫生部临检中心和省临检中心共同组织相关专业的专家组（以下简称专家组），按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》对提出申请的临床基因扩增检验实验室进行技术验收。验收完成后，在20日内将验收报告寄送至申请机构。

28. 第八条 经专家组技术验收合格的医疗机构将本办法第六条规定的材料及专家组验收报告送至省级行政部备案。在将符合规定的全部材料送达省级卫生行政部门后15日内未收到省级卫生行政部门不同意的意见，方可开展专家组技术验收合格的临床基因扩增检验项目。第九条 未经专家组验收合格并报省级卫生行政部门备案的医疗机构不得擅自开展临床基因扩增检验项目。

29. 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》 卫医发[2002]10号 第二章 实验室设置和验收第六条 拟设置临床基因扩增检验实验室的医疗机构按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》（见附件）筹建实验室；筹建完成后，由法定代表人向卫生部临检中心提出技术验收申请。申请时需提交以下材料：

30. （一）《医疗机构执业许可证》复印件；（二）可行性研究报告；1、 拟设临床基因扩增检验实验室机构的所在地医疗卫生资源状况、本机构的基本情况、对临床基因扩增检验的需求以及临床基因扩增实验室运行的预测分析； 2、 拟设临床基因扩增检验实验室的设置平面图；3、 拟设临床基因扩增检验实验室将开展的检验项目、实验设备条件和有关技术人员资料；

31. 临床基因扩增检验实验室技术验收申请表 • 基因扩增实验室基本情况 • 提供材料情况（十部分） • 《医疗机构执业许可证》 • 拟设置基因扩增实验室医院医疗资源状况、对该检测的需求及实验室运行的预测分析 • 拟设置基因扩增实验室的设置平面图 • 实验室主要负责人简历表 • 实验室工作人员一览表

32. 临床基因扩增检验实验室技术验收申请表 • 主要仪器设备表 • 拟开展的临床基因扩增检验项目 • 实验室相关程序文件和标准操作程序 • 检验报告单 • 其他有关质量文件名称或证明材料

33. 临床基因扩增检验实验室技术验收基本程序 • 材料初审（省中心）：实验室设置、人员、仪器设备、试剂、SOP文件 • 材料初审合格即安排人员现场初验（省中心），合格者准予试运行 • 上报部中心，部中心委派专家发出技术验收任务书、给被验收单位发出验收通知，同时通知相关省临检中心协调 • 不超过六个月，部省组成联合专家组进行现场验收

34. 临床基因扩增检验实验室技术验收内容 • 实验室设置和设备 • 设施和环境 • 人员 • 设备管理 • 检测方法 • 标本管理 • 记录 • 报告 • 质量控制 • 抱怨 等十章共三十七条

35. 一、实验室设置和设备 • 实验室分区：单一流向、明确的识别标记 • 使用全自动扩增检测仪,根据这些仪器的特点可以将扩增区和产物检测区合并为一个区 • 各区仪器设备物品配备的充分性和科学性 • 可移动紫外灯 必须有

36. 实验室设置和设备检查重点 • 实验室的规范化分区及相应标识 • 仪器设备及在用标识 • 保持实验室空气流向的措施 • 各区物品的专用标识

37. 二、设施和环境 • 要求实验室具备良好的工作环境，既在工作空间、能源、照明、采暖、通风等方面必须满足检测要求 • 环境和实验条件控制设施：配备温湿度计、UPS或稳压电源等 • 实验室进出的限制和控制 • 实验室“内务管理”（如人员流动、清洁、化学试剂等）制度和相应设施用具 • 化学试剂管理、废弃血清处理、生物防护等措施和相应设施用具。

38. 三、人 员 • 人员数量足够,必须经过培训，取得上岗证。 • 有培训计划及实施记录：每人有年度、季度、月度培训内容包括外出学习、进修、内部质量手册学习、业务学习、新项目开展等。 • 人员资格、培训、技能档案。 • 业绩档案。

39. 四、设备管理和质控物 • 所有设备应得到正确维护，应有设备维护程序文件 • 加样器、温度计、扩增仪和酶标仪等设备应有明显标识表明其校准状态 • 实验室应保存每一台仪器设备的档案材料，对档案材料的具体内容作了详细规定。

40. 四、设备管理检查重点 每一台设备的档案内容包括：（a）设备名称（b）制造商名称、型号、序号等（c）接收日期和启用日期（d）目前放置地点（e）接收时的状态（f）仪器使用说明书有复印件（g）校准和/或检定的日期和结果及下次校准和/或检定的日期（h）迄今所进行的维护和今后维护计划的细节（i）损坏、故障、改装或修理的历史。

41. 五、检测方法 标准操作程序（SOP）：仪器设备操作和校准程序；标本收集处理程序；扩增检测工作程序；仪器试剂的选购和质检程序；消耗性材料的购买、验收、质检和贮存程序。必须使用经国家有关部门批准的试剂和仪器.SOP应现行有效及便于使用。

42. 六、标本管理 • 建立唯一编号识别系统，避免标本混淆 • 标本采集标准程序 • 标本接收（拒收）标准、交接记录 • 标本的适用性和充分性 • 标本贮存的标准操作程序及贮存温度控制措施 • 标本接收及安全处置程序 • 维护实验室诚实性的必要措施。

43. 七、记 录 • 有记录管理制度：适合自身实际情况，符合现行规章制度； • 原始记录、计算和导出数据应归档并保存 • 校准和检测记录的重现性； • 记录应有有关人员的签字； • 所有记录和报告都要妥善保管并保密。

44. 八、报 告 • 检测结果的报告应准确、清晰和客观 • 定性测定报告“阴性”或“阳性;定量测定则以拷贝数/ml或IU/ ml报告；避免二者之间的混淆 • 每份报告应包括以下信息：标题、唯一性标识、检测标本说明、标本特性和状态、标本接收日期和检测日期、检测方法结果或参考范围、检测和校核人员签字及发出日期 • 如对报告有效性有疑问，实验室应立即通知临床相关科室予以改正 • 用电话、传真、电子邮件报告结果时的保密原则

45. 九、质量控制 室内质量控制（质控） 室间质量评价 （质评） 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》 第十三条 临床基因扩增检验实验室必须按照《临床基因扩增实验室工作规范》开展室内质量控制，并参加卫生部临检中心组织的室内质量评价。

46. 九、质量控制 《临床基因扩增检验实验室工作规范》 （九）质量控制 1、室内质量控制 必须对DNA和RNA分析的各步进行质量控制，以避免假阳性和假阴性，保证测定结果的准确性和重复性。由于核酸扩增测定的高敏感性，所以标本制备、逆转录、扩增本身和产物分析中的每一步都要求有质控措施。

47. 九、质量控制 室内质量控制 使用已知的弱阳性质控样本，与待测临床标本同样处理提取核酸及扩增，以判断扩增检测的效果，还可获得有关PCR试剂的检测下限和特异性的信息。 阴性质控，为判断扩增过程中污染出现的阶段，阴性质控包括以下几种；样品空白、扩增反应液反应管、阴性标本等，后者可评估PCR实验的综合质量。

48. 九、质量控制 《临床基因扩增检验实验室工作规范》 （九）质量控制 2、室间质量评价 所有开展临床基因扩增检验的实验室都必须参加由卫生部临床检验中心组织的全国临床基因扩增检验项目的室间质量评价，评价结果将作为其开展临床基因扩增检验的依据之一。

49. 十、抱 怨 • 实验室应制定抱怨及其处理的SOP • 有关资料要归档 • 如抱怨涉及到工作是否符合现行程序，或是否符合管理办法和工作规范，或对实验室校准及检测质量有疑问时，则实验室应立即对这些范围的工作和有关职责进行审核

50. 十一、现场实验考核目方法 • 目的：考核实验室是否按所制定的规程进行常规检测，检测结果是否与预期相符 • 方法：观察实验室从标本接受、编号、检测程序、检测过程中的记录、质控、结果判断、结果报告等是否按所制定的程序进行