Au-BSA 的连接

1. Au-BSA的连接 主讲人：张萍

2. AuNPs的介绍 纳米金即指金的微小颗粒，其直径在1-100nm，具有高电子密度、介电特性和催化作用，能与多种生物大分子结合，且不影响其生物活性。可通过氯金酸还原法可以方便地制备各种不同粒径的纳米金，其颜色依直径大小而呈红色至紫色。

3. 牛血清蛋白（BSA）的介绍 • BSA有98%的氨基酸序列与人类的血清蛋白相同。 • 包含583个氨基酸残基，其中有11个疏水的区域，66个带正电的赖氨酸，和一个自由的巯基。分子量是66.430KDa • 在生理学PH条件下，带负点，等电点为4.7

4. 油相AuNPs的合成

5. 2NaBH4+2AuCl4H+4H2O=2Au+2NaBO2+9H2+8HCl

6. Polymer 的合成

7. 聚马来酸酐 十二烷胺

8. Polymer 包裹疏水的AuNPs Amphiphilic polymer 油相金颗粒 蒸发 SB 12 buffer

9. 物理吸附 BSA与金颗粒的连接

10. 化学连接（EDC）

11. 技术 EDC反应 EDC·HCl 中文名为：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，是个可溶于水的碳二亚胺。 化学式：C8H17N3·HCl 在酰胺合成中用作羧基的活化试剂，也用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联和免疫偶连物的制取。使用时的pH范围为4.0-6.0，常和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）或N-羟基硫代琥珀酰亚胺联用，以提高偶联效率。

13. 琼脂糖电泳 琼脂糖 琼脂糖：用氯化十六烷基吡啶或聚乙烯醇等将琼脂中带负电基团（碘酸基和羧基）的琼脂胶沉淀除去所得的中性多糖成分即为琼脂糖。 结构：β-D-半乳糖与3,6-脱水-L-半乳糖以α-1,3-和β-1,4-糖苷键相间连接而成的链状分子。

14. 方法 1：微波 1. 确定制胶所需的琼脂糖溶液量。 注意：记住考虑凝胶的厚度，因为它影响了孔体积和电源需求。 2. 称取一定质量的琼脂糖放入能容纳 2-4倍琼脂糖溶液体积的三角瓶中加入室温的缓冲液 （ TAE 或 TBE ）。 3. 小心拿开三角瓶，并轻柔旋转，以重悬任何琼脂糖颗粒。（小心微波加热过的溶液在搅动时可能过热，且有泡沫溢出）。 4. 再次加热溶液，直至溶液沸腾，且所有琼脂糖颗粒溶解。 5. 轻柔混匀，冷却至 50-60o C ，再将溶液倒至制胶板中

15. 方法 2：沸水浴 1. 确定制胶所需的琼脂糖溶液量。注意：记住考虑凝胶的厚度，因为它影响了孔体积和电源需求 2. 在一个能容纳 2-4倍琼脂糖溶液体积的烧瓶中加入室温的缓冲液 （ TAE 或 TBE ）。在烧瓶中放置一个磁力搅拌棒。 3. 将烧瓶放在磁力搅拌器上，并在溶液搅动时向烧瓶中缓慢洒入所需量的琼脂糖粉末，以避免琼脂糖结块。 4. 在加热之前对烧瓶和溶液称重。 5. 用保鲜膜覆盖烧瓶的瓶口，并将 保鲜膜戳一个小洞，以便通气。 6. 将溶液放置在沸水浴中，不时晃动，让它温和沸腾约 10   分钟或直至琼脂糖完全溶解。 7. 将烧瓶放置在天平上，用温的蒸馏水补足至初始重量。 8. 轻柔混匀，冷却至  50-60o C ，再将溶液倒至制胶板中。

16. 优点 因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗 对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象 凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物，核酸，病毒等大分子物质 透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色 不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定 有热可逆性 缺点 机械强度差，易破碎，浓度不能太低 易被细菌污染，不易保存，临用前配制。 琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色 与PAGE相比，分子筛作用小，区带少 琼脂糖凝胶电泳的特点

17. 影响电泳迁移率的因素 • DNA分子的大小 • 凝胶的浓度 • DNA的构象 • 使用的电压 • 琼脂糖的种类 • 电泳缓冲液 • 嵌入染料的存在

18. 注意事项 • TBE可以使用10次左右，而TAE用2-3次就要更换。电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下降。 • 电泳缓冲液刚好没过凝胶1mm为好，太多则电流加大，凝胶发热

19. Thanks