CL-BIII 四通道残留农药测定仪使用说明

1. CL-BIII四通道残留农药测定仪使用说明 上海博纳新技术研究所 2006年2月

2. 农残常识1 有机磷和氨基甲酸酯类杀虫、杀螨剂的特点。两类农药的作用机理均为抑制动物体内乙酰胆碱酯酶的活性，破坏神经传导，引起一系列的神经中毒症状，直至死亡。二者的主要区别在于：有机磷类杀虫、杀螨剂对乙酰胆碱酯酶的抑制是不可逆的，而氨基甲酸酯类杀虫、杀螨剂对乙酰胆碱酯酶的抑制是可逆的 。

3. 农残常识2 酶抑制率法和酶系酶源：国家标准GB/T 5009.199-2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》推荐的酶抑制率法能方便、快速、准确、成本低廉检测出农产品中的农药残留，也同时肯定了乙酰胆碱酯酶酶系作为快速检测推荐试剂的活性量和具体要求。近年来，我们通过对动物源和植物源的多种丁酰胆碱酯酶、乙酰胆碱酯酶进行检测实验和比较研究，发现乙酰胆碱酯酶对农药的检测敏感度和综合指标优于丁酰胆碱酯酶；确定了有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酸有较专一性的抑制作用；分析出在抑制率70%以下，大多数农药浓度和乙酰胆碱酯酶抑制率呈较好的线性关系，并能实现对单种农药的定量分析；解决了酶的活性和稳定性控制等技术

4. 农残常识3 什么是间接比色法:由于只有当底物与产物之间，在光学性质或其它理化性质有显著差异时，才可能直接用分光光度计法测定，因此对酶活性浓度的监测大多是采用间接监测法。如对胆碱酯酶的测定：底物（硫代乙酰胆碱）及酶水解产物（硫代胆碱和乙酸）并不具有颜色，不能用分光光度计法测定。所以必须设法在原来反应体系中添加一些试剂，这些试剂必须不与酶作用也不影响酶活性，同时又能与酶反应物迅速作用，产生可以被直接测定的物质。这就产生了Ellman的胆碱酯酶测定法即间接连续监测法。目前国内大多厂家生产的快速农药测定仪都采用了 Ellman的胆碱酯酶测定法即间接比色法。该方法通过监测底物（硫代乙酰胆碱），酶水解产物硫代胆碱与添加的二硫代硝基苯甲酸（DTNB）作用立刻生成黄色化合物的反应速度来测定酶活性变化。

5. 农残常识4 什么是固定时间法:早期这类方法常被命名为“终点法”、“二点法”、“固定时间法”和“取样法”。该方法先选择一段固定的时间（固定为3分钟），先让酶与底物在一定温度下进行一段固定的时间（固定为3分钟）的化学反应，并根据呈色测出底物和产物的变化用比色法对反应结果进行评定。由于“二点法”容易受到干扰，并产生误差，使检测稳定性较低。

6. 农残常识5 什么是连续监测法：50年代，Warburg首先用分光光度计测定酶的活性。该方法不需停止酶反应就可测定反应物的变化，容易观察到反应的整个过程和干扰情况（通过绘制反应曲线）。因此逐步取代了固定时间法成为目前测酶活性的主要方法。该方法是利用连续对反应过程进行高灵敏度检测，并通过绘制整个酶反应曲线避开延滞期和非线性反应期，只在线性反应期测定最大反应初速度。由于仪器的高精密度，连续监测法能在很短时间，甚至在1分钟反应时间内就能准确测定出活性的抑制率。

7. 技 术 指 标 CL-BIII四通道残留农药测定仪的技术指标： Ø 测量波长：410nm Ø 通道数：4 Ø 检测用样品器皿：10mm比色皿 Ø 光电流漂移：<1%  (3min) Ø  暗电流漂移：<1%  (3min) Ø 抑制率显示范围：0-100%  Ø  抑制率测量范围：10-100% Ø  农药检测：（用甲胺磷农药标样测试） Ø 抑制率示值误差：±10 % Ø 抑制率重复性误差： 5 %

8. 目 录 第一部分 试剂配制 第二部分 联机使用 第三部分 单机使用 第四部分 相关技巧与常识

9. 第一部分试剂配制

10. 1、试剂的配制 提取液：把提取液甲乙粉末倒入大玻璃瓶中，并加510ml蒸馏水溶解。 酶试剂：用移液枪取3.1ml提取液，加入酶试剂瓶中。 显色剂：用移液枪取20ml提取液，加入显色剂瓶，溶 解后倒入棕色瓶中。 底 物：用移液枪取3.1ml蒸馏水，加入底物瓶中。

11. 返回目录 2、试剂的保存及注意事项 1、本试剂适用的国家标准为：GB/T5009.199-2003。 2、未配制的试剂，要保存在0℃以下的冷冻箱里。 （保质期可达1年） 3、配制好的酶和底物试剂，要保存在4℃的冷藏箱内。 （保质期为一周） 4、配制好的提取液常温下可以长期保存。 5、配制好的显色剂需避光保存；常温或冷藏，可以 保存1年。

12. 第二部分联机使用

13. 第一步 仪器连接

14. 1、连接电源 将仪器的电源接头和数据信号线接好。 如图：

15. 2、连接电脑 把RS232/RS485的转换器接入电脑主机背后的COM口（串口）上，然后把数据信号线与转换器连接上，这样就完成了仪器与电脑的硬件连接。

16. 第二步 检测操作

17. 安装完成桌面上出现的图标 安装“农产品质量安全检测软件” 把“农产品质量安全检测软件”光盘放入电脑光驱中，等自动读取或在光盘目录下找到并双击“setup”后，按提示点击“下一步”安装。安装完成以后，桌面上会出现“食品质量安全检测平台”的图标。

18. 检测软件登陆 仪器设置 首先按仪器“设置”键，选择为“受控”。然后再打开检测软件，检测软件的用户名默认为“管理员”，密码是“111111”。这样检测软件对检测仪器进行控制了。

19. 操作步骤 整个的实验操作过程可以分为三个大部分： 调0、调100 空白对照 样品分析

20. 按“ ”键 放入黑块 等待10-15秒 按“ ”键 按“确定” 拿出黑块 等待10-15秒 按“ ”键 按“确定” 按“ ”键 调0/100 注：以上是一个检测窗口的步骤，其他三个窗口都是如此。

21. 用小移液枪取0.1ml酶试剂加入试管中 用小移液枪取0.1ml显色剂加入试管中 用小移液枪取0.1ml底物加入试管中 迅速摇匀并倒入比色皿 放入比色池 按“开始对照分析”键 等待对照结束 用大移液枪抽取2.5ml提取液放入试管中 空白对照

22. 选择所需对照 选择需要装入对照的通道号（在通道号码前√） 按“读取”键完成装入工作 装入对照 按“装入对照分析”键 注：对照结束后，对照曲线会自动保存. （标准对照库中已有30种蔬菜的对照，在做这30种蔬菜时，请参照这些对照。）

23. 选择所需的空白对照和相应的样品修正值 选择需要装入对照的通道号（在通道号码前√） 按“读取”键完成装入工作 装入标准对照库 按“装入对照分析”键

24. 剪成2cm见方 用天平称取1克果蔬 放入烧杯中，用大移液枪抽取5ml提取液加入到烧杯中 静置15分钟（或震荡1分钟） 用小移液枪取0.1ml酶试剂加入试管中 静置15分钟 用大移液枪从烧杯中抽取2.5ml浸泡液移至空试管中 用小移液枪取0.1ml显色剂加入试管中 迅速摇匀并倒入比色皿 放入比色池 等待检测结果 用小移液枪取0.1ml底物加入试管中 按“开始样品分析”键

25. 第三步 保存检测结果

26. 选择该通道所测蔬菜名 填写（选择）被检单位和生产单位 填写（选择）检测单位 按“保存”键，保存检测结果 按“退出”键 保存检测结果 样品结束后，系统自动弹出“检测结果”对话框

27. 返回目录 备 注 “统计分析” 中的“农残检测数据查询统计”对话框有所有保存过的检测数据，在该对话框中有“开始日期“、“结束日期”、“果蔬品种”、“被检单位”等九项选项，对这些选项进行组合选择后，再按“查询”键，就可以将您需要的信息从所有的数据中筛选出来。 另外，“农残检测数据查询统计”对话框中还有“统计分析”和“转存”等功能，当选择出需要的检测数据后，就可以按“统计分析”键或者“转存”键，对数据进行统计分析或制成相应报表。 如果需要打印单项检测结果，则点选该结果后，按“打印当前记录”键，浏览打印效果，再按打印键后打印。

28. 第三部分单机使用

29. 第一步 设置仪器

30. 1、连接电源 将仪器电源连接好，（如需打印，则要将专用打印机连接到仪器的打印接口上。）如图：

31. 日期设置 通道选择 2、仪器设置 打开仪器开关后，按提示进入仪器操作主界面。按“设置”键进入仪器设置功能，在“设置”里可以对“通道选择”、“日期”、“打印方式”、“对照查询”等进行设置。设置完成后再按“设置”键退回到主界面。

32. 第二步 检测操作

33. 操作步骤 整个的操作步骤分为三个大步骤： 调0、调100 空白对照 样品分析

34. 调0/100 在主界面状态下，按0/100键，根据屏幕提示逐一调1-4通道的0值，再调1-4通道的100值，最后按“确定”键结束。

35. 用小移液枪取0.1ml酶试剂加入试管中 用小移液枪取0.1ml显色剂加入试管中 用小移液枪取0.1ml底物加入试管中 迅速摇匀并倒入比色皿 放入第一通道的比色池 按“对照”键，并选择“新建” 等待对照结束 用大移液枪抽取2.5ml提取液放入试管中 空白对照 注：对照的时间默认为3分钟，如需修改，则先要在“设置”中进行设置。

36. 剪成2cm见方 用天平称取1克果蔬 放入烧杯中，用大移液枪抽取5ml提取液加入到烧杯中 静置15分钟 用小移液枪取0.1ml酶试剂加入试管中 静置15分钟 用大移液枪从烧杯中抽取2.5ml浸泡液移至空试管中 用小移液枪取0.1ml显色剂加入试管中 迅速摇匀并倒入比色皿 放入比色池 等待检测结果 用小移液枪取0.1ml底物加入试管中 按“样品”键 注：按“样品”键后，四个通道同时进行检测。

37. 第三步 数据打印及退出

38. 按“确定”键 按“打印”键进行打印 用△/▽键选择检测数据的编号 按“确定”键退出打印状态 返回目录 数据打印及退出 按“打印”键

39. 第四部分相关技巧与常识

40. 常见问题及相关技巧1 1.仪器联机操作的情况下，在检测过程中或者开始检测时，电脑出现“没有检测到指定的设备……”，是怎么回事？ 一般来说出现这种提示说明您的检测仪与电脑硬件连接出现问题，检查的步骤如下： 第一步、确定检测软件的设备设置中相关设置与硬件连接相匹配； 第二步、电脑串口通讯故障，检测方法：重新启动电脑，确认是否故障依然存在，如果故障依然存在，检查下一步； 第三步、更换一下电脑串口，并在检测软件的设备设置中进行相应的改动，或者换一台电脑，确认故障是否存在，如果故障解决，则表明是电脑本身的问题，否则可进行下一步检查； 第四步、更换RS232485转换器，确认问题是否存在,如果故障解决，则表明为RS232485转换器连接不通。

41. 常见问题及相关技巧2 2.仪器联机操作的情况下，调100时看不到红线是怎么回事？ 首先我们要学会看图谱，图谱的横坐标为时间，纵坐标为投射比，我们所所的调100准确的所是指将投射比值调整为100％。 图谱在没有拖拉的情况下，最高只能显示到100，如果在调100的过程中，其投射比值大于100，那样就看不到红线了，但图谱右边的小白框中有数字显示，你只要正常的调0/100就可以了。 另外，对于小白框内数字，显示的是当前的投射比值。在做对照或调0/100时，小白框内的数字前有一短红线，在做样品时则为短绿线。大家不要把这个短线认为是负号。

42. 常见问题及相关技巧3 3.如何检测仪器的重现性？ 做一空白对照后，做一个双倍量的样品，然后一分为二，先后或同时做检测，即：取2克样品，加10ml提取液浸泡，然后取5ml检液，分别加0.2ml的酶、显色剂，15分钟后，如果直接加0.2ml底物，然后一分为二在两个通道中同时做检测，则是检查不同通道的重现性；如果15分钟后先将溶液一分为二，先后加入0.1ml底物做检测，则是检查同一通道的重现性。 4.如何添加品种名称？ 一般来说有两种添加方法： A.可以在基础数据维护中进行添加。 B.在检测结果弹出是，通过 进行添加。 另外，在添加时一定要按“增加”键，填好相关信息后按“保存”完成。

43. 常见问题及相关技巧4 5.如何升级检测软件？ 对于检测软件的升级有两种方法： A.在线升级：打开检测软件并连接因特网，然后在帮助中选择在线升级。 B.本地升级：执行新版检测软件的安装程序，选择“修复或升级”项，然后按照提示完成安装即可。 6.如何上传数据？ 上传数据有三个步骤： 1）打开“设备”菜单中的“系统选项”，并将注册ID号和ID密码填写好； 2）打开“统计汇总”菜单中的“农残检测数据查询统计”，通过查询项将需要上传的数据查询出来； 3）按“上传”键完成上传数据的操作。

44. 返回目录 常见问题及相关技巧5 7.检测中需要注意哪些事项？ A.蔬菜不能剪切的太小，一般以2cm见方为好； B.对于颜色深的蔬菜尽量取茎、叶各一半为好； C.对于果品，可以顺皮削下一块或取皮下部分； D.对于有味蔬菜可以使用检测软件的对照标样库来检测； E.对于有杂质或沉淀物及较浑浊的检液可以采用双倍取样，过滤后再检测； F.移液枪的枪头不能互相污染； G.在移液枪将试剂加入检液时，一定要保证枪头垂直于液面，不能将试剂加到试管壁上。

45. 谢谢观看！ 上海博纳新技术研究所 2006年2月