T megspektrometria

1. T�megspektrometria Mintaelok�sz�t�s, elv�laszt�stechnik�k OKLA 2011

2. Tematika Ioniz�ci�s m�dszerek T�meganaliz�torok Mintaelok�sz�t�s, elv�laszt�stechnik�k MS �s MS/MS m�dok Spektrum ki�rt�kel�s Biol�giai �s biok�miai alkalmaz�sok Proteomika, Peptid sequen�l�s, Protein anal�zis Di�k: http://applchem.science.unideb.hu (OKTAT�S)

3. Muk�d�si elv

4. Ioniz�ci�s m�dszerek Electron impact (EI) Chemical ionization (CI) Atmospheric pressure (API) Electrospray (ESI) Matrix assisted laser desorption/ionization (MALDI) Direct analysis in real time (DART)

5. T�meganaliz�torok Magnet (B) Time-of-flight (TOF) Quadrupole (Q) Ion Traps (2D, 3D IT) Ion-Cyclotron Resonance (ICR) Orbitrap (OT)

6. Mi�rt van sz�ks�g mintaelok�sz�t�sre? Az analitok sz�mos k�l�nb�zo m�trixban lehetnek Extrakci� (kinyer�s) Tiszt�t�s

7. Mintaelok�sz�t�s n�lk�l�

8. Zavar� hat�s pl. �Ion supression� A zavar� vegy�letek cs�kkenthetik az analit ioniz�ci�j�t �s a m�dszer �rz�kenys�g�t Verseng�s az ionforr�sban Nagy koncentr�ci�j� szennyezok elnyomhatj�k az analit jel�t

9. Hogyan kezdj�nk hozz�? Milyen muszer�nk van? Ioniz�ci�s m�dszer? Minos�gi/mennyis�gi meghat�roz�s �rz�kenys�g/koncentr�ci� Anal�zis ido Mintaelok�sz�t�s, derivatiz�ci� Min�l r�videbb ann�l jobb

10. Mintaelok�sz�t�s Az analit elv�laszt�sa a zavar� m�trixt�l Pl: metabolitok meghat�roz�sa v�rbol ? zavar� feh�rj�k elt�vol�t�sa sz�ks�ges Extrakci�, szur�s a s�tartalom elt�vol�t�s�hoz Kapcsolt elv�laszt�stechika (GC, LC) Analit koncentr�ci�j�nak n�vel�se Pl: n�v�nyv�do szerek kimutat�sa iv�v�zbol ? kinyer�s, bep�rl�s sz�ks�ges Derivatiz�ci� (egyszeru, gyors legyen) N�velheto a vegy�letek ill�konys�ga ? GC

11. Elv�laszt�stechnik�k

12. Folyad�k-folyad�k extrakci�

13. Elv�laszt�stechnik�k

14. Solid Phase Extraction (SPE) Kromatogr�fi�s elven muk�dik T�lt�tt kolonn�k J�l megalapozott technol�gia Sz�mos irodalmi referencia Tiszta extraktum J� visszanyer�s pol�ris vegy�letekn�l A mint�t folyad�kf�zisba kell hozni Gravit�ci�s, nyom�s vagy v�kuum seg�tett megold�sok Automatiz�lhat�

15. Oszlop t�pusok Norm�l f�zis� Pol�ris �ll�f�zis Apol�ris mozg�f�zis Ford�tott f�zis� Leggyakoribb m�dszer Apol�ris �ll�f�zis Pol�ris mozg�f�zis Ion cser�lo Kation/anion cser�lo oszlop Puffer vagy ionos mozg�f�zis

16. Szil�rdf�zis� extrakci�

17. Szil�rdf�zis� extrakci�

18. Szil�rdf�zis� extrakci�

19. Szil�rdf�zis� extrakci�

20. �Tiszt�t�s�

21. �Zip Tip�

22. Elv�laszt�stechnik�k

23. Szur�s

24. Elv�laszt�stechnik�k

25. Bep�rl�s

26. Elv�laszt�stechnik�k

27. Csapad�kk�pz�s Feh�rj�k kinyer�se vagy elt�vol�t�sa Pl. Acetonnal: Aceton hozz�ad�sa a feh�rje oldathoz Inkub�l�s: -20�C �jszak�n �t, sz�razj�gen 2-3 h Centrifug�l�s (-4�C, 10 perc), fel�l�sz� elt�vol�t�sa Mos�s 100% acetonnal (-20�C) Bep�rl�s v�kuummal, t�rol�s -20�C-on

28. Muszeres elv�laszt�stechnik�k

29. 1D �s 2D g�lelektrofor�zis PAGE: poli-akrilamid g�l elektrofor�zis SDS: n�trium-dodecil-szulf�t 2D Molekulat�meg izoelektromos pont

30. 1D �s 2Dg�lelektrofor�zis

31. Muszeres elv�laszt�stechnik�k

32. Folyad�kkromatogr�fia A szil�rd �ll�f�zis �s a folyad�k mozg�f�zis k�z�tti megoszl�son alapszik Az �ll�f�zissal erosebb k�lcs�nhat�sban l�vo anyagok k�sobb elu�l�dnak Norm�l �s ford�tott f�zis� kromatogr�fia Izokratikus �s gradiens el�ci� Nem a t�k�ltes elv�laszt�s, hanem a reproduk�lhat�s�g a fontos!

33. Mozg�f�zis (old�szer, eluens) Nagy tisztas�g�, 0.45 �m-es szuron leszurt, g�zmentes�tett old�szerek Polarit�si sorrend: (apol�ris ? pol�ris) Hex�n, sz�ntetraklorid, kloroform, acetonitril, izopropanol, metanol, v�z Pufferek: pl. foszf�t, tris helyett ill�kony pufferek

34. Kromatogr�fi�s oszlop (kolonna) Norm�l f�zis�, ford�tott f�zis� (szilika, C8, C18)

35. Kolonna param�terei Szemcsem�ret: 5 �m, 3.5 �m, 1.7 �m T�ltet minos�ge: coated, SD, XDB� Hossza: 30-150 mm Belso �tm�roje: 1 mm, 2.1 mm, 4.5 mm Polarit�sa (norm�l, ford�tott)

36. Old�szereross�g hat�sa az elv�laszt�sra (C18 kolonna)

37. LC �s MS �sszekapcsol�sa �raml�si sebess�g �s ionforr�s 1 ml/min APCI (nagyobb hom., �s g�z�ram) 0.1 ml/min ESI (splitter)

38. Ker�lendo szennyez�sek S� �s puffer koncentr�ci� <10 mM Cs�cssz�lesed�st, kisebb ioniz�ci�s hat�sfokot okozhat V�z �s Acetonitril prefer�lt old�szerek Minta t�rol�sa kis�vegekben, muanyag helyett Fel�letakt�v anyagok, glicerin elt�vol�t�sa!

39. Proteomika LC-MS/MS

40. Muszeres elv�laszt�stechnik�k

41. M�retkiz�r�sos kromatogr�fia

42. Muszeres elv�laszt�stechnik�k

43. Ioncser�s kromatogr�fia

44. Muszeres elv�laszt�stechnik�k

45. G�zkromatogr�fia Ill�kony vegy�letek (sz�rmaz�kk�pz�s) Interf�sz k�ti �ssze a kolonn�t az ionforr�ssal. EI, CI ioniz�ci�

46. GCMS kromatogram �s spektrum

48. Szachar�z TMS sz�rmaz�kaC36H86O11Si8 (MW = 918 m/z)