1 / 35

Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes. Gram+ rövid pálca 0,5-1 – 1-2 μm spóra nincs csilló 16 s zerotípus. Morfológia. Előfordulás. szaporodni képes: talaj (barna erdőtalaj) víz szennyvíz növények szilázs takarmány egészséges állatok és ember bélcsatornája élelmiszerek : nyers hús

dionne
Télécharger la présentation

Listeria monocytogenes

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Listeria monocytogenes Gram+ rövid pálca 0,5-1 – 1-2 μm spóra nincs csilló 16 szerotípus

  2. Morfológia

  3. Előfordulás szaporodni képes: talaj(barna erdőtalaj) víz szennyvíz növények szilázs takarmány egészséges állatok és ember bélcsatornája élelmiszerek: nyers hús húskészítmény baromfi tej

  4. Fertőzést okozó élelmiszerek nyerstej lágysajtok camembert, brie hús zöldség

  5. Ellenállóképesség Talaj, víz, szennyvíz: hónapokig túlél, sőt szaporodik is!!! >60°C, fertőtlenítőszerek: perceken belül elpusztul 10% NaCl koncentrációig szaporodik Min. pH=4,4 (szerves savak jobban elpusztítják, mint a szervetlenek) Fagyasztást, szárítást jól bírja

  6. Tenyésztés Fakultatív anaerob 0-42°C (optimum: 37°C) 20-25°C: csillós, bukfencező mozgás Közönséges agar: apró, kerek. Henry-féle megvilágításban kékesfehér fényű telep. Véres agar (juh, szm., ló): keskeny, β-hemolízises udvar.

  7. Dúsító Fraser leves LiCl, nalidixinsav, akriflavin-hidroklorid: gátlóanyagok eszkulin, ammónium-vas(III)-citrát: differenciáló rendszer glükóz-eszkulin → β-D-glükozidáz enzim → glükóz + eszkuletin → eszkuletin + Fe3+ → olívazöld, fekete komplex

  8. Fraser leves

  9. Szilárd táptalajok Oxford-agar LiCl, nalidixinsav, akriflavin-hidroklorid, eszkulin, ammónium-vas(III)-citrát Barnászöld, fekete udvarú telepek Palcam agar Polimixin-B, akriflavin, lítium-klorid, Na-ceftazimid, aesculin, mannit Szürkés-zöld, fekete udvarú telepek Ez jóval szelektívebb az Oxford agarnál

  10. Oxford & Palcam agar

  11. A vizsgálat menete minta + első dúsító (feles erősségű Fraser leves) ↓ Inkubálás 30°C, 24±2h ↓ ↓ Szélesztés Palcam és Oxford agarra0,1 ml tenyészet 10 ml második↓ dúsítóba (Fraser leves) Inkubálás 30, 35 vagy 37°C, ↓ 24±2h(+24hha szükséges) Inkubálás 35 vagy37°C, 48±2h ↓ ↓ Megerősítés Szélesztés Palcam és Oxford agarra↓ Inkubálás 30, 35 vagy 37°C, 24±2h(+24hha szükséges) ↓ Megerősítés

  12. Megerősítés Kataláz próba: + Gram festés: +, karcsú, rövid pálca Mozgásvizsgálat: telepet leoltani tripton-szója-élesztő levesbe, 25°C, 8-24 óra → 1 csepp tárgylemezre → körkörös, bukfencező mozgás lágy agarba szúrókaccsal mély leoltás, 25 °C 8-24 óra → esernyő formájú növekedés

  13. Megerősítés - Haemolysis Hemolízis: juhvéres agaron, 37°C, 24 óra L. monocytogenes: egyenletes, tiszta, világos, keskeny β-hemolízis L. ivanovii: széles, világos β-hemolízis L. innocua: nincs feltisztulás L. seeligeri: gyenge β-hemolízis

  14. Haemolysis

  15. Haemolyis

  16. Megerősítés – CAMP próba CAMP-próba (Christie, Atkins, Munch, Paterson) Juhvéres agarra oltókaccsal ismert β-hemolízáló Staphylococcus aureus- és Rhodococcus equi-csíkot húzunk →Listeria monocytogenes β-hemolízise felerősíti a Staphylococcus aureus haemolysisét →csésze, ásó alakú feltisztulás • (A L. ivanovii ugyanezt csinálja, csak a Rhodococcus equi-vel)

  17. CAMP test

  18. Megerősítés Henry-féle megvilágítás: 45°-ban alulról világított Petri-csésze kékes szín Savtermelés cukrokból: ramnóz(+) xilóz(-)

  19. Henry-féle megvilágítás

  20. Azonosítás

  21. Campylobacter jejuni Gram-, S-alakú, hajlott pálca öreg tenyészetben coccoid 0,2-0,8 – 0,5-5 μm, spórátlan Dugóhúzó-szerű mozgás poláris flagelluma sejt egyik v. mindkét végén

  22. Campylobacter jejuni

  23. Campylobacter jejuni

  24. Általános tulajdonságok Microaerophil (3-5% O2és 2-10% CO2) 30,5-45°C (optimum: 42°C – generációs idő még itt is hosszú: ~ 1 óra) Energiát aminosavak, trikarboxi-savak bontásából nyer, szénhidrátokat nem bont Kataláz+, Oxidáz+

  25. Általános tulajdonságok Metilvörös-, Voges-Proskauer- Indol-, lipáz-, lecitináz- Zselatint, keményítőt, kazeint nem bontja Nitrátredukció+ Fumarátot redukálja szukcináttá Hippurát-hidrolízis+ (csak C. jejuni!) Rezisztencia: nalidixsav- cephalotin+

  26. Előfordulás Állatok, ember bélcsatornájának természetes lakója; madarak tűnnek a természetes rezervoárnak; környezetben nem bizonyított, de feltételezhető a túlélése Közvetítő: főleg baromfihús (csirke), de más élelmiszerek (tej, víz) közvetítő szerepe is lehetséges

  27. Fertőzési források (fontossági sorrendben) Rosszul hőkezelt baromfi Nyers baromfi feldolgozása Háziállatokkal való érintkezés Utazás, kirándulás Nyerstej fogyasztása

  28. Ellenállóképesség Élelmiszerekben hűtve sokkal jobban túlél, mint szobahőmérsékleten Felületeken, kézen ~1 óráig túlél Fagyasztás sem pusztítja el teljesen Vákuumcsomagolást jól bírja, oxigénre érzékenyebb 55°C-on hamar elpusztul Szárítást nem bírja, de bizonyos (alacsony) hőmérsékleten így is túlél Sózásra, savanyú pH-ra érzékeny

  29. Tenyésztés 1. lépés: dúsítás 42°C-on, 24-48 óráig 2. lépés: izolálás szelektív agaron 42°C-on, 24-48 óráig, microaerophil körülmények között 3. lépés: megerősítés

  30. Dúsítók Preston leves: Fe(II)-szulfát, Na-metabiszulfit, Na-piruvát, vér: oxigén-gyökök megkötése Polymyxin-B Bolton leves: a ketolgutársav, Na-metabiszulfit, Na-piruvát, Na-karbonát Lóvér Cycloheximide, cefoperazone, vancomycin, trimethoprim

  31. Táptalajok Mikroaerofil tenyésztés!!! Skirrow agar, Butzler agar, Preston agar, Blaser-Wang agar: hasonlók, a különbség a szelektív adalékokból adódik: (vancomycin, polymyxin, thrimethoprim, bacitracin, cycloheximide, colistin-sulphate, cephazolin-sodium, novobiocin, cephalotin, amphoterecin B, stb.) Karmali agar: aktív szén, haematin mCCDA agar: modified charcoal cefoperazone deoxycholate agar: az oxigén megkötését az aktív szén végzi; telepek: cseppszerűek, színtelenek v. szürkék

  32. mCCDA

  33. Megerősítés 1. Kataláz+ 2. Oxidáz+ 3. Gram-festés: - 4. Natív kenet, függőcsepp-készítmény: dugóhúzó-szerű mozgás

  34. Megerősítés 5. Hippurát-hidrolízis: 0,4 cm3 Na-hippurát-oldat beoltása → 37°C, 2 óra → + 1 csepp ninhidrin-reagens → 5 perc 100°C → +: lila szín Csak C. jejuni + 6. Tenyésztés 25°C-on: nem nő 7. Rezisztencia- (érzékenység-) vizsgálat: nalidixinsavas korong → rátenni egy szelektív komponenseket nem tartalmazó, a vizsgált tenyészettel beoltott agarra → 42±1°C, 16-24 óra → pozitív esetben gátlási zóna figyelhető meg. A C. jejuni mindig érzékeny a nalidixinsavra!

More Related