第二章植物组织培养的基本技术

第二章植物组织培养的基本技术

第一节实验室结构、仪器设备及操作技术 一、植物组织培养实验室的结构及设计要求：完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需要和条件进行设计。但从功能上至少包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。

（一）化学实验室（准备室）： 1. 主要功能：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。

2. 主要仪器设备及用品： 冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。

百分之一天平 千分之一天平万分之一天平

各种型号的高压灭菌锅

移液器

（二）接种室（无菌操作室）： 1、功能：植物材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。接种室要求保持洁净，与化学实验室之间应设置缓冲室。

2、仪器设备及用品： 超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）等。

超净工作台

（三）培养室： 1、功能：主要用于植物材料的培养。要求室内洁净并能保持一定的温度、光照以及湿度以适合植物材料的生长和分化。

2、仪器设备及用品： 培养架及灯管、摇床（振荡器）、空调、自动定时器、加湿及除湿器、光照培养箱、温湿度计灯等。

培养架

光照培养箱

多用振荡器 恒温振荡器

（四）细胞学实验室： 1、功能：主要用于培养材料的显微观察及照相等。

2、仪式设备及用品： 体视显微镜、普通显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、配套显微照相装置、普通相机或数码相机、切片机及配套制片及染色用品等。

体视显微镜 普通光学显微镜倒置荧光显微镜倒置显微镜

二、实验室基本操作： （一）洗涤： 1. 普通器皿：采用洗衣粉、洗洁精等中性洗涤剂洗涤。 2. 难清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用重铬酸钾洗液浸泡，最后清水冲洗，或用超声波仪清洗。

（二）灭菌： 1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。（1）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱内，150 ℃保温2小时，成本较高。（2）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内120 ℃ 15－20分钟。（3）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入95％乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。

2、培养基灭菌： 采用高压蒸汽灭菌。120℃ 15－20分钟。培养基体积越大，灭菌时间越长。 3、不耐高温化合物：采用过滤灭菌，如IAA等。

4、外植体的表面灭菌： 采用70－75％乙醇（10-30秒）、有效氯1％的次氯酸钠（5-30分钟）、0.1－0.2%的氯化汞（2-15分钟）等。杀菌剂中加入几滴吐温－20或80（Tween－20或80）效果较好。

（三）无菌操作： 1、保持接种室的无污染环境，定期熏蒸或喷雾处理，进行消毒。接种前打开超净工作台及紫外灯照射20-30分钟，关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。 2、保持超净工作台的洁净：接种前用70％乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前，将手和手臂用70％乙醇消毒，所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。

3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交叉污染。3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交叉污染。 4、保持培养室的洁净，发现污染及时挑出，并在灭菌后清洗，以减少污染源。 5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。

20050912

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