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小鼠肾细胞的原代培养

小鼠肾细胞的原代培养. 组员 : 钱宇峰 张晓宇. WHY. 另外我们骨髓瘤细胞的培养也都只是传代培养，并没有从最初步骤开始做起 因为之前细胞工程的那个班做细胞原代培养的结果基本都不理想 因此，我们组想尝试下. 实验目的. 离心机、培养皿、解剖剪刀、弯头镊子 普通镊子、细胞培养瓶、吸管、橡皮塞 血球计数板、不锈钢筛网、使馆、酒精灯 试管架以及表面皿、 75% 酒精及酒精棉球 0.25% 胰蛋白消化液、 PBS 、 1640 培养液 实验小鼠。. 所需仪器与材料. 先将小鼠断颈处死，浸入 75% 酒精中，迅速进入无菌室

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小鼠肾细胞的原代培养

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Presentation Transcript

  1. 小鼠肾细胞的原代培养 组员:钱宇峰 张晓宇

  2. WHY

  3. 另外我们骨髓瘤细胞的培养也都只是传代培养，并没有从最初步骤开始做起另外我们骨髓瘤细胞的培养也都只是传代培养，并没有从最初步骤开始做起 因为之前细胞工程的那个班做细胞原代培养的结果基本都不理想 因此，我们组想尝试下 实验目的

  4. 离心机、培养皿、解剖剪刀、弯头镊子 普通镊子、细胞培养瓶、吸管、橡皮塞 血球计数板、不锈钢筛网、使馆、酒精灯 试管架以及表面皿、75%酒精及酒精棉球 0.25%胰蛋白消化液、PBS、1640培养液 实验小鼠。 所需仪器与材料

  5. 先将小鼠断颈处死，浸入75%酒精中，迅速进入无菌室先将小鼠断颈处死，浸入75%酒精中，迅速进入无菌室 1.取出肾脏，经PBS漂洗三次后，放在表面皿中。 2.在表面皿中，用滴管加入少量培养液（ RPMI 1640 含20％小牛血清）用锋利的剪刀将组织块剪成约1mm3的小块。 3.用弯头镊子将组织块移入细胞瓶中，把它们排列成行，每块组织相距约0.5cm，每瓶细胞贴20～30小块，随即翻转细胞瓶，使贴组织块的一面朝上，然后加培养液3ml。 4.将细胞瓶置于37℃，5％CO2培养箱中静置2-3小时左右，然后将瓶轻轻翻转，使组织块浸入培养液中，继续培养。 5.24小时后在显微镜下检查，若见细胞自组织边缘长出，则继续培养2日，再换部分或全部培养液，待多数组织块的生长晕相接时，可进行传代培养。 步骤过程

  6. 24小时内不被污染： 培养液为橙红色，并且比较清澄 2-3天以后出现细胞生长晕： 即组织块周围生长出新的肾细胞 预期结果

  7. 实际结果

  8. 我们组在三天之内并没有观察到生长晕，虽然组织块周围有一圈比较明亮的，但很有可能只是组织块细胞分泌的粘液，因为它并没有扩展。可能是因为组织块表面细胞活性并不是很高.我们组在三天之内并没有观察到生长晕，虽然组织块周围有一圈比较明亮的，但很有可能只是组织块细胞分泌的粘液，因为它并没有扩展。可能是因为组织块表面细胞活性并不是很高. 但我们组的细胞培养液一直都比较理想，并没有被污染. 如果时间允许，我们相信培养下去，出现生长晕的可能还是很大的。

  9. 谢谢

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