第三节病毒的检验

第三节病毒的检验 病毒的检验主要包括从临床样本中分离和鉴定病原性病毒。其中很多工作是应用血清学实验。因此在这里不再重复叙述。

一、样本的收集和保存 在大多数的病毒中，病毒可能在整个病程中一直持续存在，但是一般在临床症状刚刚出现或者稍后病毒存在最多，随后逐渐减少而消失。从病死或剖检动物采集样品，必须越快越好，不能迟于几个小时，否则病毒可能被干燥、温度或细菌腐败而破坏。

要根据病毒病的机理，例如呼吸道疾患应采集鼻液、气管和肺；中枢神经系统的疾患采集脑和脊髓；全身性疾病则采取血液和各内脏器官如肝、脾等。要根据病毒病的机理，例如呼吸道疾患应采集鼻液、气管和肺；中枢神经系统的疾患采集脑和脊髓；全身性疾病则采取血液和各内脏器官如肝、脾等。猪瘟：脾、淋巴结狂犬病：脑、唾液腺新城疫：脑 PRRS: 肺样品的采集

1、无菌手术 2、特殊处理污染材料易污染：离心、加双抗或过滤。 3、初次分离可能盲目传几代才能分离到病毒 4、分离到病毒需进一步鉴定。注意事项

二病毒检验 病毒的鉴定主要用血清学的方法，中和试验、ELISA、荧光抗体、琼扩等。这里主要介绍两个血清学中比较少提到的检测方法。

1、血球凝集、血球凝集抑制试验 1）血球凝集试验原理：红血球上的粘蛋白受体与病毒囊膜上突起的血凝素（糖蛋白）结合，形成红血球--病毒的复合物，表现为血球凝集。鸡新城疫疫苗常用此法检测有无病毒及效价。这个试验并不是特异的。很多病毒也可凝集鸡的红血球。因此，要确知是否是新城疫病毒还要用相应的抗新城疫病毒抗体，作血球凝集抑制试验

2）、血凝抑制 原理：抗血清和病毒结合后，封闭了病毒与红血球结合的位点，病毒就不能再和红血球凝集，表现为血凝抑制。方法：各稀释度抗血清；加4单位病毒；作用30分钟；加1%红血球

2 空斑实验 空斑的含义：病毒接种于细胞单层，再加一层琼脂将细胞单覆盖，病毒自感染细胞释放出后不能悬浮于液体中，只能感染邻近与之接触的细胞，以至感染后由原始病灶向四周扩大，形成类似固体培养基上的菌落。这个所谓的菌落与正常的细胞不同，用中性红液体染料，则活的细胞是红色，病毒感染后的细胞是白色的，称为空斑。

空斑的形成，形状、大小都不同，边缘界线的清晰度也有差异，根据这些可鉴定病毒。但并不可靠，因此多用作病毒的数量测定和病毒的纯化。空斑的形成，形状、大小都不同，边缘界线的清晰度也有差异，根据这些可鉴定病毒。但并不可靠，因此多用作病毒的数量测定和病毒的纯化。

按常规的方法培养好病毒。然后将待检病毒稀释成1/10-6到1/10-8左右，每个稀释度接种3--4瓶细胞，覆盖上营养琼脂液。按常规的方法培养好病毒。然后将待检病毒稀释成1/10-6到1/10-8左右，每个稀释度接种3--4瓶细胞，覆盖上营养琼脂液。根据上述的理论，在这样稀浓度的病毒液体里，一般不可能成堆的病毒在一起，这个时候理论上病毒是一个个存在的，接种细胞后，经用琼脂覆盖限制了感染细胞后的病毒不能再感染其他细胞，而只能感染邻近的细胞，理论上，这样的一个空斑就是一个病毒。那么通过计数空斑即可得到病毒的数量。方法

事实上一个细胞不一定刚好由一个病毒感染，空斑是由最少病毒颗粒数形成，可能是一个也可能是几个病毒颗粒。因此常用空斑形成单位（plague forming unit PFU)表示。如果将这样有一个或几个病毒形成的空斑，单独挑出培养，就得到相对纯的病毒，这就是所谓纯化病毒（克隆）。

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