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硕 士 研 究 生 开题报告

硕 士 研 究 生 开题报告. COX2 对鼻咽癌细胞 粘附性的影响. 广东医学院病理教研室 研究生 : 罗伟仁 导师 : 陈小毅 教授. LMP1 COX2 对鼻咽癌细胞 粘附性的影响 Ecadherin (Ecad). 主 要 内 容. ◈ 立题依据 ◈ 研究内容 ◈ 技术路线 ◈ 预期结果 ◈ 进度安排 ◈ 经费预算. 一 立题依据. ◈ LMP1 与鼻咽癌之间的关系 ◈ COX2 与鼻咽癌之间的关系 ◈ ECAD 与鼻咽癌之间的关系. EBV 与鼻咽癌之间的关系.

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Presentation Transcript

  1. 硕 士 研 究 生 开题报告

  2. COX2对鼻咽癌细胞粘附性的影响 广东医学院病理教研室 研究生 : 罗伟仁 导师 : 陈小毅 教授

  3. LMP1 COX2对鼻咽癌细胞 粘附性的影响 Ecadherin(Ecad)

  4. 主 要 内 容 ◈立题依据 ◈研究内容 ◈技术路线 ◈预期结果 ◈进度安排 ◈经费预算

  5. 一 立题依据 ◈ LMP1与鼻咽癌之间的关系 ◈COX2与鼻咽癌之间的关系 ◈ECAD与鼻咽癌之间的关系

  6. EBV与鼻咽癌之间的关系 ◈ 几乎100%的NPC中有EBV基因组的 存在 ◈NPC患者及高危人群体内有高水平 的EBV抗体 ◈鼻咽癌上皮细胞中大多数是潜伏 感染

  7. LMP1与鼻咽癌之间的关系(1) ◈ 其被认为唯一与细胞转化相关的具 有瘤基因功能 ◈ 体内外实验显示LMP1 对鼻咽癌细胞有促进生长作用 ◈ 大约65 %鼻咽癌组织中表达LMP1

  8. LMP1与鼻咽癌之间的关系(2) ◈ LMP1阳性的NPC较LMP1阴性的NPC更容易侵袭鼻咽旁的正常组织及淋巴结 ◈LMP1通过各种诱导途径参与鼻咽癌的侵袭和转移

  9. LMP1主要的生物学功能 ◈ 促进及维持B细胞转化和永生化 ◈ 使鼠类成纤维细胞发生转化 ◈ 上调C33A细胞中EGFR和A20表达 ◈活化核转录因子NFκB

  10. LMP1的结构 ◈ LMP1 是一种完整的跨膜蛋白 ◈ 包括 N 末端胞浆域,跨膜疏水结构域,羧基端胞浆域 三个不同功能的区域 ◈羧基端胞浆域与LMP1的基本功能密切相关

  11. CTAR1 介导大约25 % 的NFκB 激活 羧 基 端 CTAR2 介导大约75 % 的NFκB 激活 胞 浆 域 CTAR3 介导ICAM1表达

  12. NFκB功能 ◈ 以IκB非活性 形式存在, IκB α的磷酸化 引起活化 ◈ 上调A20、bcl-2 、VEGF 、MMP9等,诱导端粒酶表达 ◈有研究表明NFκB可以诱导COX2的表达

  13. COX2与鼻咽癌之间的关系 ◈ COX的分类及功能 ◈COX2与鼻咽癌的研究

  14. COX的分类及功能 ◈ 有两种异构酶COX1 和COX2 ◈ COX1 是结构型表达蛋白，维持机体正常的生理功能 ◈COX2 是诱导型表达蛋白，在炎症、肿瘤的发生发展及转移中起重要作用

  15. COX2的结构和功能 ◈ 基因长8. 3kb,含有10 个外显子和 9个内含子 ◈5′非翻译区含两个NFκB 结合位点 ◈ 可以催化花生四烯酸产生多种PG

  16. COX2与肿瘤 ◈ 许多癌前病变和恶性肿瘤中均有COX2的高表达 ◈ 非甾体类抗炎药物可以抑制COX2的表达

  17. 参 与 机 制 PGE2 肿瘤细胞增殖 Bcl2 抑制细胞凋亡 COX2 MMP2/ECAD? 肿瘤侵袭转移 VEGF 促进血管形成

  18. COX2 与鼻咽癌 ◈ 国内最近有研究表明在鼻咽癌组织中COX2呈高度表达 ◈ 国外Yoshizaki研究结果：多数LMP1阳性的鼻咽癌组织表达COX2

  19. COX2与LMP1 ◈ Yoshizaki等研究:随着LMP1浓度的增大，转染LMP1的422F6细胞系中COX2的表达也增强 ◈LMP1通过CTAR1和CTAR2激活NFκB及AP1来诱导COX2表达

  20. CTAR1 LMP1 NFκB COX2 CTAR2

  21. E-CAD 与鼻咽癌之间的关系 ◈ E-CAD的结构和功能 ◈E-CAD与鼻咽癌的研究

  22. E-CAD的结构 细胞外区 ：介导同质细胞粘附 E-CAD 跨膜区 : 固定膜作用 细胞内区 ：“锚”定 ，发挥信号传递 和细胞稳定作用

  23. E-CAD的功能 ◈ 钙依赖性 ，以Ecad - Cat 复合体 形式发挥作用 ◈ 介导细胞与细胞之间的粘附 ◈ 起细胞骨架作用

  24. E-CAD与肿瘤 ◈其表达缺失导致肿瘤细胞接触性抑制丧失 ◈ 近年研究表明: E-cad与恶性肿瘤的分化程度、侵袭转移及预后密切相关

  25. E-CAD 与鼻咽癌 ◈ 有报道显示鼻咽癌组织中Ecad表达缺失 ◈Huang等报道Ecad的表达与鼻咽癌淋巴结转移呈负相关

  26. LMP1、COX2、E-CAD ◈ Chi-NeuTsai等最近研究发现LMP1可以通过诱导Ecad启动子甲基化下调其表达 ◈BaileyT发现在COX2 高表达细胞中,细胞粘附因子Ecad缺失

  27. 本课题研究所在 ◈在鼻咽癌组织和细胞中COX2和Ecad两者表达关系怎样 ◈LMP1能否通过诱导COX2从而下调Ecad的表达 ◈COX2对鼻咽癌细胞的粘附性有何影响

  28. 思路简图 表达性 LMP1 COX2 ECAD 运动性 粘附性 COX2抑制剂

  29. COX2抑制剂分类 ◈非选择性COX抑制剂 消炎痛 阿斯匹林 ◈ 选择性COX1抑制剂 SC560 氟布洛芬 ◈ 选择性COX2抑制剂 塞来昔布 尼美舒利

  30. COX2抑制剂抑癌作用 ◈ 已有研究表明COX2抑制剂对多种实验肿瘤有预防和治疗作用 ◈ 腺瘤性息肉、结肠癌等

  31. COX2抑制剂抑癌机制 ◈抑制肿瘤增殖 ◈诱导细胞凋亡 ◈抑制血管形成 ◈抑制侵袭转移 ◈调节细胞免疫

  32. 二 研究内容（1） ◈ 鼻咽癌原发灶及转移灶中LMP1、COX2 、Ecad的表达 ◈ 鼻咽癌细胞系中检测LMP1、COX2、Ecad的表达

  33. 研究内容（2） ◈ 在体外细胞应用塞莱昔布(COX2特异抑制剂),观察COX2、Ecad的表达 ◈ 检测瘤细胞运动和粘附性改变

  34. 三 技术路线 ◈ 分组 ◈ 技术路线图 ◈ 检测方法

  35. 分 组 (1) ◈临床标本：分慢性鼻咽炎、低分化鼻咽癌、鼻咽癌淋巴结转移灶三组，每组各30例 ◈ 鼻咽癌细胞系:分CNE1、CNE1-G、CNE1-GL、CNE2Z四组

  36. 分 组 (2) ◈ 塞莱昔布体外实验: ♦分CNE1、CNE1-G、CNE1-GL、CNE2Z四组;分别给予塞莱昔布40 umol/L 的浓度 ♦ 检测同一细胞系塞莱昔布（＋）/ （－）情况下，其运动性和粘附性的改变

  37. 技术路线图如下

  38. 体外实验 临床病理 CNE1 CNE1-G CNE1-GL CNE-2Z 慢性炎 原发灶 转移灶 塞莱昔布(-) 塞莱昔布(+) 免疫组化 免疫组化 蛋白印迹 RT-PCR 细胞运动粘附实验 LMP1 COX2 ECAD LMP1 COX2 ECAD ECAD 细胞运动、粘附性 综合结果分析 COX2对细胞粘附的影响

  39. 检测方法 ◈ LMP1的检测 免疫组织化学 Western blot ◈ COX2的检测 免疫组织化学 Western blot ◈ Ecad的检测 免疫组织化学 RT-PCR法 Western

  40. 四 预期结果(1) ◈ 在临床标本中, LMP1与 COX2表达成正相关;与Ecad成负相关 ◈ 在鼻咽癌细胞系中,LMP1诱导下,COX2表达升高及Ecad表达降低

  41. 预期结果(2) ◈ 塞莱昔布体外抑制COX2作用下, Ecad表达升高,说明LMP1通过上调COX2来抑制Ecad的表达 ◈ 细胞运动、粘附实验中, 塞莱昔布(+) /(-)组的同一鼻咽癌细胞系的运动及粘附性有统计学意义

  42. 五 进度安排 2004.10---2004.12 收集资料、写综述、开 题报告 2005.1---2005.3 培养和转染细胞 收集病理标本 2005.4---2005.10 体外、临床实验及完成相关 检测指标 2005.11---2005.12 数据处理和统计 2006.1---2006.4 撰写论文、答辩

  43. 六 经费预算 ◈细胞培养 2000 ◈ 免疫组化 3000 ◈细胞运动,粘附实验 3000 ◈ Western blot 3000 ◈RT-PCR 4000 ◈其他预算 2000 ◈合计 17000

  44. 恳请各位老师批评指正

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