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实验 芦丁的鉴定

实验 芦丁的鉴定. 实验目的 实验内容 思考题. 实验目的. 掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的鉴定方法. 实验内容. 一、化学检识 取芦丁 3 ~ 4mg ,用无水乙醇 5 ~ 6ml 溶解,分成 3 份做以下试验。 ( 1 )取上述溶液 1 ~ 2ml ,加 2 滴浓盐酸,摇匀,再酌加少许镁粉, 注意观察颜色变化情况 ( 2 )取上述溶液 1 ~ 2ml ,加 2%ZrOCl 2 的甲醇溶液,注意观察颜色变

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实验 芦丁的鉴定

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Presentation Transcript


  1. 实验芦丁的鉴定 • 实验目的 • 实验内容 • 思考题

  2. 实验目的 • 掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的鉴定方法

  3. 实验内容 一、化学检识 取芦丁3~ 4mg,用无水乙醇5~ 6ml溶解,分成3份做以下试验。 (1)取上述溶液1~ 2ml,加2滴浓盐酸,摇匀,再酌加少许镁粉, 注意观察颜色变化情况 (2)取上述溶液1~ 2ml,加 2%ZrOCl2 的甲醇溶液,注意观察颜色变 化情况,再继续向试管中加入2%柠檬的甲醇溶液,并详细记录 颜色变化情况 (3)α-茶酚反应(Molishs Reacfion) 取上述溶液1~ 2ml,然后加10%α-茶酚乙醇溶液,摇匀,沿 管壁滴加浓硫酸,注意观察两液面产生的颜色变化

  4. 二.纸色谱及薄层色谱鉴别 1. 纸色谱: 新化一号层析滤纸 样 品: 自制芦丁、槲皮素 对照品: 芦丁、槲皮素 展开剂: (1) 正丁醇-醋酸-水(4:1:5上层或4:1:1) (2) 25%醋酸水溶液 (3) 85%醋酸水溶液 显 色: (1) 可见光下观察,再在紫外光下观察 (2) 经氨气后再观察 (3) 喷三氧化铝试剂后再观察

  5. 2 .芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定: 新化一号层析滤纸 样 品: 自制芦丁、槲皮素 对照品: 芦丁、槲皮素 展开剂: 乙醇-水(7:3) 显 色: (1)可见光下观察,再在紫外光下观察 (2)经氨气后再观察 (3)喷三氧化铝试剂后再观察

  6. 3 .糖的检出一纸色谱析法: 取上述滤除槲皮素时保留的水解滤液20ml加Ba(OH)2的细粉(约2.6克)中和至PH7。滤除生成的BaSO4沉淀(可用滑石粉助滤)。滤液浓缩至约1ml。供纸层析点样用。 展开剂 正丁醇-醋酸-水(4:1:5上层或4:1:1) 对照品 葡萄糖、水解液鼠李糖水溶液 显色剂 苯胺邻苯二甲酸盐试剂喷后,105℃烘十分 钟。显棕色或红色斑点。

  7. 三、槲皮素五甲醚的制备 取槲皮素结晶4000mg,置于150ml的三颈瓶中,加50ml无水丙酮,装上电动搅拌器,冷凝管及温度计,加热回流搅拌,每间隔一适当时间加入无水碳酸钾0.2克和硫酸二甲酯0.2ml,大约在1.5小时左右加完4克无水碳酸二甲酯,继续加热回流搅拌直至溶液黄色完全消退为止,约需4~5小时,停止加热,取下烧瓶,反应液经过滤,沉淀用热丙酮洗涤数次,合并洗、滤液、蒸馏回收部分丙酮,留存10 ~ 15ml,放置,渐渐析出无色结晶,母液浓缩,复得一批结晶,如母液浓缩后呈糖浆状不能析出结晶,应加5%NaOH数滴,振摇使硫酸二甲酯水解,此时又可析出一小部份结晶,合并,以乙醇重结晶, 得皮槲素五甲醚(mp152 ~ 153℃)

  8. 四、槲皮素的降解 取槲皮素50mg,置于圆底烧瓶中,加水5ml,乙醇6ml,KOH2g,置水浴上加热回流10小时,蒸去乙醇,加水50ml溶解,用浓盐酸酸化至pH 2 ~ 3,用乙醚萃取三次,合并乙醚液,回收乙醚,供薄层层析点伴用。 五、槲皮素降解产物的薄层色谱 硅胶-CMC-Na薄层 对照品:原儿茶酸(Protocatechuic acid) 间苯三酚(Phloroglucinol)。 展开剂:氯仿-丙酮-醋酸(8:2:0.5) 显色剂:三氧化铁试剂

  9. 六、紫外吸收光谱测定槲皮素 (一)原理 利用紫外吸收光谱,测定黄酮化合物在加入各种电解质或络合剂后吸收峰的位移,根据位移的情况,以判断该化合物羟基的位置 (二)试剂 无水甲醇 甲醇钠溶液 氢氧化钠溶液 三氯化铝溶液 醋酸钠 硼酸饱和液

  10. (三)测定方法 1.黄酮羟基位置的测定: 精密称取黄酮样品(槲皮素)约1.2mg,用无水甲醇溶解,再稀释至100ml (1)黄酮光谱:取样品溶液约3ml,在200~500nm波段内进行扫描。 (2)氢氧化钠光谱:取样品溶液约3ml,加入氢氧化钠溶液2~3滴立即测 定。放置5分钟后,再测定。 (3)甲醇钠光谱:取样品溶液约3ml,加入甲醇钠溶液5~7滴后,立即进 行测定,放置5分钟后,测定。 (4)三氯化铝光谱:在盛有约3ml样品溶液的石英杯中,加入三氯化铝 溶液6滴,放置一分钟后进行测定,测定后,加入3 滴盐酸溶液(浓盐酸:水=1:1),测定。 (5)醋酸钠光谱:取样品溶液约3ml,加入过量的无水醋酸钠固体,摇 匀:杯底剩有约2mm的醋酸钠后,三分钟内进行测定

  11. (四)测定结果 槲皮素加位移试剂结果表(λnm) 克分子吸收系数的测定:根据已测定的黄酮光谱,测量吸收峰的波长和吸收峰前后20nm的波长范围。然后取样品溶液约3ml,置于1cm长的石英杯中,测UV,仔细测量在上述波长范围内各波长的吸收值,反复测定三次。

  12. 思考题及记录 • 思考题: (1)芦丁和槲皮素用不同展开剂系统展层将出现什么结果?为什么? (2)芦丁和槲皮素聚酰胺薄层色谱将出现什么结果?为什么? • 记录: (1)芦丁和槲皮素的纸色谱、聚酰胺薄层色谱结果。 (2)糖的检出纸色谱结果。 • 记录: (1)位移测定的结果 (2)测定克分子吸收系数、在吸收峰前后20nm波长范围内,依次测定波长和吸收值,用方格纸作图,精确的测出吸收峰的波长和吸收值,记录测定结果。

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