1 / 10

دانشگاه آزاد اسلامي واحد كرج

دانشگاه آزاد اسلامي واحد كرج. پایان نامه های كارشناسي ارشد. گروه : علوم پايه. رشته تحصيلي : ميكروبيولوژي. جداسازي، غربالگري و بررسي خصوصيات آنزيم آلفا-گالاكتوزيداز از لاكتوباسيل هاي جداشده از محصولات غذايي. نام و نام خانوادگي دانشجو : ميثم فرزادي ، شماره دانشجويي : 86357019877.

iona
Télécharger la présentation

دانشگاه آزاد اسلامي واحد كرج

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. دانشگاه آزاد اسلامي واحد كرج

  2. پایان نامه های كارشناسي ارشد

  3. گروه : علوم پايه

  4. رشته تحصيلي : ميكروبيولوژي

  5. جداسازي، غربالگري و بررسي خصوصيات آنزيم آلفا-گالاكتوزيداز از لاكتوباسيل هاي جداشده از محصولات غذايي

  6. نام و نام خانوادگي دانشجو : ميثم فرزادي ، شماره دانشجويي : 86357019877

  7. به راهنمايي :شهره خاتمي • چكيده: • لاكتوباسيلوس ها نقش موثري در تقويت ميكروفلور روده ، توليد محصولات تخميري و يا توليد گليكوزيداز ها دارند. آلفاگالاکتوزيداز يك اگزو-گليكوزيداز است كه پيوندهاي انتهايي D- -گالاكتوز را در طيف وسيعي از اوليگوساكاريدهاي گالاكتوزيدي همچون : ملي بيوز ، استاکيوز ، اوربيکوز هيدروليز مي كند. اين آنزيم توسط انسان ساخته نمي شود ، بنابراين چنين اوليگوساكاريدهايي در بدن هضم نمي شوند و باعث مشکلات گوارشي چون : نفخ ، دل پيچه ، درد هاي شکمي مي شوند. • روشكار : جداسازي از باکتري هاي اسيد لاکتيک توليد كننده آلفا گالاکتوزيداز از چند محصول لبني انجام شد . ميکروارگانيسم ها در محيط MRS رشد داده شدند و سويه اي با بيشترين فعاليت آنزيم به روش رنگ سنجي با سوبستراي پارانيتروفنيل آلفا دي گالاكتوزيد ( pNP-aGal ) انتخاب شد . سويه منتخب در محيط MRS اصلاح شده با 1% رافينوز کشت داده شد. پس از برداشت با سانتريفوژ بوسيله سونيکاسيون ، سلولها پاره شدند و مخلوط حاصل، سانتريفوژ شد. سپس با سولفات آمونيوم 90% ترسيب گرديد. رسوب حاصل از مرحله قبل در بافر Mcilavine حل شد و بر روي‍ ستون ژل فيلتراسيون با Sephadex G-200 و كروماتوگرافي تعويض يوني با DEAE-cellulose خالص گرديد ، وزن مولکولي زير واحد آنزيم به روش SDS-PAGE تعيين گرديد. • نتايج : از ميان سويه هاي جداشده ، سويه YEG10 از ماست گلپايگان و سويه استاندارد DSM 20079 Lactobacillus acidofillus به ترتيب با فعاليت U/ml 3/11 و U/ml 4/15 بيشترين فعاليت آنزيم آلفا گالاکتوزيداز را نشان مي دادند. فرآورده آنزيم سويه استاندارد ، 5/18 برابر تخليص گرديد و وزن مولکولي آن kDa 45 بروش SDS-PAGE تعيين شد که مربوط به زير واحد آنزيم هوموتترامر بود. Km و Vmaxبراي اين آنزيم توسط سوبستراي pNP-aGal در حدود mM 47/0 و mol/min.mg 5/ 17 تعيين شد . حداکثر فعاليت آنزيم در دماي بهينه °C 45 و pH بهينه 5/5 بود . همچنين آنزيم ، دماهاي °C 25 تا °C 55 را تا 30 دقيقه براحتي تحمل مي کرد اما در دماي بيش از °C 60 بسرعت غير فعال مي شد . گالاکتوز درحدود 63 % فعاليت آنزيم را کاهش مي داد و Hg2+ به طور کامل فعاليت آنزيم آلفا گالاکتوزيداز را مهار مي کرد .

More Related