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20. 叶绿体色素含量的测定 ---- 分光光度法

20. 叶绿体色素含量的测定 ---- 分光光度法. 实验原理 利用 80% 丙酮提取叶绿体色素，叶绿素 a 、叶绿素 b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是 663nm 、 646nm 和 470nm 。 根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出丙酮提取液中叶绿体色素含量。. 实验目的 掌握分光光度法对叶绿素 a 、叶绿素 b 、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。. 实验器材和试剂 1 、材料：菠菜叶片 2 、 用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等

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20. 叶绿体色素含量的测定 ---- 分光光度法

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Presentation Transcript

  1. 20. 叶绿体色素含量的测定----分光光度法

  2. 实验原理 利用80%丙酮提取叶绿体色素，叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是663nm、646nm和470nm。 根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出丙酮提取液中叶绿体色素含量。

  3. 实验目的 掌握分光光度法对叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。 实验器材和试剂 1、材料：菠菜叶片 2、 用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等 3、试剂：80%丙酮、石英砂和碳酸钙

  4. 实验步骤 1.叶绿体色素的提取 取新鲜菠菜叶片5克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;加入少许石英砂和CaCO3,再加入80%丙酮3ml,研磨成匀浆,再加80%丙酮10ml,静置10分钟;用漏斗滤去残渣,用丙酮反复冲洗研钵、残渣至无色;用容量瓶定容至50ml 。 2.吸光度的测定 取光径1cm比色杯，注入上述叶绿素提取液,以80%丙酮注入另一同样的比色杯内作为空白对照,在波长663、646和470nm下测定吸光度。 3.结果计算 依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。

  5. 计算公式 80%丙酮提取液中色素浓度的计算 Ca（叶绿素a）=12.2A663-2.81A646 Cb（叶绿素b）=20.13A646-5.03A663 CT（叶绿素）=Ca+Cb=17.32A646+7.18A663 Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470-3.27Ca-104Cb)/229 叶绿体色素含量=

  6. 附录：722分光光度计的使用 1、选择灵敏度旋纽至3；将波长调节到600nm，打开样品室盖，打开电源开关预热20min。 2、打开样品室盖，将测定旋纽调至T（透光度），用调节旋纽0调0；盖上样品室盖，用调节旋纽100调100。 3、将空白样品放入样品槽，按上述方法调0和调100。 4、将测定旋纽调至A（吸光度），用Abs旋纽调0，测定待测样品的光密度。

  7. 作业 计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。 思考题 1. 叶绿素a、b在蓝色区也有吸收峰，能否用这一吸收峰波长进行叶绿素的定量分析？为什么？2．为什么提取叶绿素时干材料一定要用80%的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？

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