TRANSCRIPCIÓ

1. TRANSCRIPCIÓ En procariotes la transcripció i la traducció són simultànies En la transcripció nomes es copia un tros de la cadena de DNA

2. + - TRANSCRIPCIÓ Només s’utilitza com a motlle una de les cadenes La síntesi de RNA és fa en la direcció 5’  3’ L’RNA és complementari a la cadena motlle i equivalent a la cadena codificant

3. TRANSCRIPCIÓ La seqüència entre els llocs d’iniciació i de terminació s’anomena unitat de transcripció Una unitat de transcripció pot incloure més d’un gen

4. INICI La polimerasa s’uneix al promotor (Complex tancat) ELONGACÏÓ La polimerasa sintetitza avançant sobre el DNA, obre la doble hèlix i afegeix NTPs a la cadena de RNA FINALITZACIÓ Al lloc de finalització la polimerasa allibera el RNA i es dissocia del DNA TRANSCRIPCIÓ La polimerasa obre la doble hèlix a la regió d’inici i es forma la bombolla de transcripció (Complex obert) Es sintetitza l’enllaç fosfodiester dels dos primers NTPs (no cal encebador)

5. 100 75 50 nucleotide frequency (%) 25 0 T T T T T -35 -10 17–19 nucleotides A A A A A C G TRANSCRIPCIÓ EN PROCARIOTES Seqüència consens dels promotors de procariotes

6. TRANSCRIPCIÓ EN PROCARIOTES Pribnow box Les mutacions en els promotors poden variar l’eficiència de la transcripció Les mutacions a la regió -35 afecten la unió de la RNA polimerasa Les mutacions a la regió -10 afecten la separació de les cadenes

7. b’ s a w b TRANSCRIPCIÓ EN PROCARIOTES Estructura de la RNA polimerasa holoenzim “core enzyme” a2bb’w Catalitza la formació de l’enllaç fosfodiester entre NTPs El centre actiu esta format per regions de les subunitats b i b’ Les subunitats a i w tenen una funció estructural La subunitat s reconeix els promotors

8. TRANSCRIPCIÓ EN PROCARIOTES La subunitat s augmenta l’afinitat de la RNA polimerasa pels promotors i disminueix l’afinitat per la resta del DNA La subunitat s reconeix seqüències especifiques en el DNA a traves de la interacció d’algunes hèlix a amb les bases del solc major La subunitat a també participa en el reconeixement dels UP-elements presents en els promotors forts Subunitat s70 s4 reconeixement del DNA s2 separació de les cadenes

9. TRANSCRIPCIÓ EN PROCARIOTES La subunitat s es dissocia de la RNA polimerasa durant el procés d’elongació

10. TRANSCRIPCIÓ EN PROCARIOTES En la bombolla de replicació el DNA es manté desaparellat 14pb La RNA polimerasa no corregeix errors La síntesi de RNA és processiva

11. TRANSCRIPCIÓ EN PROCARIOTES Hi ha varies subunitats s que reconeixen promotors diferents Promotors reconeguts per diferents subunitats s Els promotors estàndard son reconeguts pel factor s70 El factor s32 s’uneix al promotors que responen al xoc tèrmic El factor s54 és activat quan no hi ha amoni al medi

12. TRANSCRIPCIÓ EN PROCARIOTES Finalització independent der (Rho) La presencia en el RNA de regions autocomplementaries que formen llaços desestabilitzen la regió híbrida DNA-RNA L’aparellament entre A i U és el més feble

13. TRANSCRIPCIÓ EN PROCARIOTES Finalització dependent de r (Rho) Mecanisme d’actuació de r Estructura de la proteïna r La proteïna r s’uneix a l’RNA i es desplaça en direcció a la polimerasa Quan arriba al dúplex DNA-RNA actua com una helicasa

14. TRANSCRIPCIÓ EN EUCARIOTES RNA polimerases d’eucariotes Per tal de que la iniciació sigui eficient i especifica, a mes de la RNA polimerasa es necessària la presencia d’unes proteïnes anomenades factors d’iniciació Els factors d’iniciació generals (GTF) permeten la síntesi de RNA in vitro In vivo el DNA forma complexos amb histones i altres proteïnes i no n’hi ha prou amb els GTF per a iniciar la transcripció

15. TRANSCRIPCIÓ EN EUCARIOTES TFIIB recognition element TATA box Initiator Downstream promoter element Promotors de la RNA polimerasa II Per a l’optima expressió dels gens sovint calen altres seqüències reguladores

16. Complex TBP-DNA CTD (C-Terminal Domain) (YSPTSPS)n TRANSCRIPCIÓ EN EUCARIOTES Formacio complex pre-iniciació

17. TBP TFIID TAFs (TBP associated factors) TRANSCRIPCIÓ EN EUCARIOTES Factors de transcripció

18. TRANSCRIPCIÓ EN EUCARIOTES

19. TRANSCRIPCIÓ EN EUCARIOTES Per tal de regular la transcripció in vivo calen a mes dels GTF, el complex mediador, reguladors transcripcionals i en alguns casos enzims que modifiquin els nucleosomes Mediador humà Assemblatge del complex de pre-iniciació en presencia d’activadors transcripcionals, mediadors i remodeladors dels nucleosomes

20. TRANSCRIPCIÓ EN EUCARIOTES Factors d’elongació Durant l’elongació s’uneixen a la polimerasa una sèrie de factors diferents Alguns d’aquests factors estimulen l’elongació (factors d’elongació) i altres s’utilitzen durant el processament del mRNA

21. TRANSCRIPCIÓ EN EUCARIOTES RNA polimerasa I RNA polimerasa III Les RNA polimerases I i III reconeixen diferents promotors

22. Acridina Actinomicina D Rifampicina INHIBIDORS DE LES RNA POLIMERASES L’actinomicina D i l’acridina són agents intercalants que inhibeixen la RNA polimerasa La rifampicina és un inhibidor específic de la RNA polimerasa de procariotes S’uneix a la subunitat b i no permet l’elongació S’utilitza com antibiòtic en el tractament de la tuberculosi

23. INHIBIDORS DE LA RNA POLIMERASA a-amanitina Amanita phalloides L’a-amanitina és un Inhibidor de la RNApol II A altes concentracions també inhibeix la RNA polimerasa III