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管理肠道健康 · 实现无抗养殖. —— 霉菌毒素及仔猪腹泻的防控心得. 孙进华 博士、副研究员 东北农业大学动物科技学院. 引起仔猪腹泻的原因. 一、非传染性腹泻 ■ 营养性 ■ 生理性腹泻 ■ 应激性腹泻 仔断奶换料腹泻 大多数人认为断奶腹泻是由于换料应激造成的，其实不够准确。 酶系发育不健全，蛋白酶、脂肪酶配方设计要求仔猪易消化的营养物质。. 仔猪出生后消化酶的变化动态. 引起仔猪腹泻的原因. 二、传染性腹泻 （病原性） 病原菌引起： 1、 细菌性腹泻（主要是革兰氏阴性菌）
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管理肠道健康·实现无抗养殖 ——霉菌毒素及仔猪腹泻的防控心得 孙进华 博士、副研究员 东北农业大学动物科技学院
引起仔猪腹泻的原因 一、非传染性腹泻 ■ 营养性 ■ 生理性腹泻 ■ 应激性腹泻 仔断奶换料腹泻 大多数人认为断奶腹泻是由于换料应激造成的，其实不够准确。 酶系发育不健全，蛋白酶、脂肪酶配方设计要求仔猪易消化的营养物质。
引起仔猪腹泻的原因 二、传染性腹泻 （病原性） 病原菌引起： 1、细菌性腹泻（主要是革兰氏阴性菌） 2、病毒性腹泻 3、寄生虫性腹泻 4、霉菌毒素性腹泻
细菌性腹泻 主要致病菌： 大肠杆菌（黄、白痢）、沙门氏菌（副伤寒）、产气荚膜梭菌（红痢）、痢疾密螺旋体 （猪痢疾）。 致病机理： 致病菌能够吸附于肠粘膜绒毛细胞的表面，破坏小肠绒毛上皮细胞细胞； 影响营养物质消化吸收； 产生的毒素造成小肠脱水。
普通防控措施 添加抗生素 ■ 过量添加造成药物残留、危害人类健康；同时造成小肠绒毛及隐窝的破坏，抑制后期仔猪生长； ■ 常量添加效果不够明显，并且持续反复刺激容易造成耐药性的产生。
普通防控措施 改善养殖环境 ■ 养殖环境不是饲料企业所能控制的； 肠道环境 ■ 肠道环境 添加益生菌在饲料生产过程中损耗过大，效果不够明显。
霉菌毒素引起的腹泻 ■ 霉菌毒素破坏肠绒毛上皮细胞，造成营养物质消耗吸收受阻、直肠温度升高。 ■ 引起脱水、呕吐、粘膜炎、消瘦、腹泻。 ■ 主要引起腹泻的毒素：赭曲霉毒素（OTA） 、烟曲霉毒素（FUM） 、呕吐毒素（DON）等。
霉菌毒素 ■ 霉菌毒素是谷物或饲料中霉菌生长产生的次级代谢物。主要危害：致癌性、致突变性、致畸胎性、致雌激素异常、致出血、免疫毒性、肾毒性、肝毒性、皮肤毒性及神经毒性等 ■ 美国2002年就已经将霉菌毒素列为饲料安全的第二大危险因素。 ■ 大多数霉菌毒素在动物采食饲料后的30分钟内，就会释放到消化道中，小肠是霉菌毒素吸收的主要场所。
影响畜牧业的霉菌毒素种类 ■ 黄曲霉毒素（Aflatoxins，AFB1） ■ 玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEA） ■ 呕吐毒素（Vomitoxin DON） ■ T—2毒素（T-2 Toxin） ■ 赭曲毒素（Ochartoxins OTA） ■ 烟曲霉毒素（Fumonisins，FUM）
霉菌毒素认识误区 1、原料外观很好，没有霉菌污染变化（原料的隐蔽性）； 2、养殖场没有表现霉菌毒素的症状（危害的隐蔽性）； 3、只认为发生黑变是发霉（不知道霉变也有白变，红变）； 4、只知道原料储存时发霉，不知道原料在田间已经污染霉菌。
霉菌污染现状 ■ 玉米100%被霉菌污染，只是程度不同而已 ■ 受目前整体环境影响，已经不存在无污染的地区 ■ 传统认为北方干燥没有霉菌的概念，是完全错误的，玉米采购标准由霉粒2%以下，放宽至5%
常规清除方法 1、物理脱毒： 高温、水洗、剔除、辐射等（费时、费力、费钱，不便规模操作）； 无机吸附剂：铝硅酸盐类矿物吸附剂，利用多层空间结构和表面形成的离子极性，吸附具有相同离子极性的霉菌毒素，对于没有相同极性和非极性的霉菌毒素吸附能力很差； 有机吸附剂（甘露聚糖、酵母细胞壁）吸附霉菌毒素。其对极性和非极性的霉菌毒素都有广泛的吸附作用。
常规清除方法 2、化学脱毒： 氯气、氨气、氢氧化钠、氢氧化钙、次氯酸钠等（可减少少量的霉菌毒素，但会造成二次污染）。
常规清除方法 3、生物脱毒： 微生物（乳酸杆菌等）、酶制剂（脂类氧化酶、葡萄糖氧化酶等）。
如何保持肠道健康 如何更好的解决霉菌毒素污染？ 如何更科学的防治仔猪腹泻？
亿霉脱 了解一个新产品 ——亿霉脱 霉菌毒素吸附与抗腹泻双重功效
亿霉脱特色结构成分 ■ 结构成分一 埃洛石为含水层状硅酸盐矿物，其显微结构为纤细型弯曲管状结构，这种管状结构对霉菌毒素具有优异的吸附固定作用，不受霉菌毒素自身极性影响，因而对于 ZEA等非极性的霉菌毒素具有良好的吸收效果。
亿霉脱特色结构成分 ■ 结构成分二 高络合有机酸载铜蒙脱石 强大的比表面积，对具有极性的霉菌毒素具有高效吸附及强有力的杀菌能力。
亿霉脱特色结构成分 ■ 结构成分三 酵母细胞壁提取物、甘露聚糖等多种有效成分。 提升免疫，修复动物受损脏器，恢复器官生理机能。
亿霉脱载体选择 ■ 蒙脱石是天然的层状硅酸盐纳米材料，每层厚度仅1 nm，颗粒细小，比表面积巨大，每立方毫米(半个米粒)能容纳三千亿个颗粒，每克粉剂就能覆盖110平米的篮球场大小的消化道表面，可加强黏膜屏障的作用；加上蒙脱石的不均匀电荷特性，基本层中带负电，层间带正电，使得蒙脱石具有强大的吸附能力。
亿霉脱载体选择 ■ 蒙脱石
生产工艺流程图 ■ 提纯 ■ 酸溶 ■ 酸洗 ■ 络合、加载
因蒙脱石硅氧四面体和八面体组成的层结构，层结构之间是易于被取代的阳离子层，将多核[Cu(AIO)n(H2O)4-n]Χ+络离子替代蒙脱石层间的Ca2+、Na+等离子，同时Cu2+离子还可进入蒙脱石Si-O四面体晶内孔和八面体中的空位，从而导致蒙脱石电价失衡，使矿物带有正电荷。而大多数细菌细胞壁表面带有负电荷，载铜蒙脱石与细菌之间的静电引力，能使细菌能够更有效地被大量吸附在矿物表面 。 蒙脱石、亿霉脱、大肠杆菌在pH为6时的Zeta电位分别为-21mV、928mV、-22mV 。 亿霉脱加载工艺特点
■有效的杀菌功能 ■有效的粘膜保护功能 ■强大的吸附脱霉、解毒能力 同时解决霉菌毒素污染及仔猪细菌性腹泻，有效地保护仔猪小肠绒毛和隐窝。 亿霉脱的优势
亿霉脱的杀菌作用 ■ 实验1：大肠杆菌培养实验结果显示： 培养液中天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、丙氨酸氨基转移酶活性显著升高 。 在正常情况下,细菌胞内酶很少释放到菌体外,只有当细菌细胞膜结构发生变化,通透性明显增强时,胞内酶才能释放到菌体外。 加入亿霉脱 （终浓度2ug/ml)
亿霉脱对天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶的影响亿霉脱对天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶的影响
杀菌原理 ■杀菌原理： 亿霉脱主要成分之一高络合酸洗载铜蒙脱石带有较高的正电荷，大肠杆菌细菌表面带有负电荷，库仑力的作用下，大肠杆菌被吸引到MMT-Cu表面，MMT表面富集的Cu2-使细菌细胞膜通透性增加或受损严重，酶从菌体内大量释放出来，从而导致细菌死亡。
亿霉脱的粘膜保护作用 ■ 实验2： Caco-2细胞 是体外培养的肠上皮单层细胞 病原菌选用E.coli K88、S.choleraesuis
裂解细胞 用Hankˊs液洗 计数 亿霉脱的粘膜保护作用 ①病原菌吸附实验 亿霉脱 加入病原菌 分别培养1、3、6h DMEM 加入病原菌 Caco-2细胞 分别培养1、3、6h 涂板
亿霉脱对病原菌吸附Caco-2细胞的影响 用 MMT-Cu 处理过的 Caco-2 细胞，使病原菌 E.coli K88和 S.choleraesuis 被的数量明显增加，与对照组相比，差异显著。 吸附的病原菌是否能够入侵细胞？
庆大作用 裂解细胞 涂板 洗 计数 用Hankˊs液洗 亿霉脱的粘膜保护作用 ②病原菌入侵实验 亿霉脱 加入病原菌 分别培养1、3、6h DMEM 加入病原菌 Caco-2细胞 分别培养1、3、6h
亿霉脱对病原菌吸附Caco-2细胞的影响 对照组病原菌入侵到 Caco-2 细胞内的数量并随时间的延长入侵数量在增加。而用亿霉脱处理过的 Caco-2 细胞，均可明显减少 E.coli K88和 S.choleraesuis 侵入到 Caco-2 细胞内的数量，与对照组相比，差异极显著。并随着作用时间的延长，可持续抑制E.coli K88、S.choleraesuis的入侵。
亿霉脱对病原菌吸附Caco-2细胞的影响 入侵致病菌对细胞的破坏情况？
分别在1、3、6h取培养液 检测LDH活性 亿霉脱的粘膜保护作用 ③病原菌对细胞的破坏试验 用培养基中LDH 的活性来判断细胞膜的完整性 DMEM DMEM 分别培养1、3、6h C 加入病原菌 DMEM Caco-2细胞 分别培养1、3、6h Ⅰ 亿霉脱 加入病原菌 分别培养1、3、6h Ⅱ
检测1、3、6h培养液中LDH的含量 对照组为正常培养Caco-2细胞，试验组Ⅰ为致病菌感染组，试验组Ⅱ为添加亿霉脱致病菌感染组。 检测1、3、6h培养液中LDH的含量
电镜扫描细胞表面 图 A 表示正常生理条件下的 Caco-2 细胞表面绒毛密集而整齐； 图 B 表示加入亿霉脱后，可见细胞表面有一层膜状物覆盖，好象与外界形成一层屏障，绒毛仍然排列整齐、致密。
电镜扫描细胞表面 图 C，D 可见，当E.coli K88和 S.choleraesuis 粘 附 于 Caco-2 细 胞 上时，可见绒毛萎缩而凌乱，绒毛变短，甚至细胞上绒毛已脱落，而且细胞破裂。表明 E.coli K88和 S.choleraesuis 粘附肠上皮细胞后，可破坏细胞的完整性，使细胞死亡。 由于致病菌粘附细胞后，可分泌一种不利于细胞存活的毒素从而破坏细胞膜的完整性，使细胞绒毛受损。
电镜扫描细胞表面 从图 E，F 可见，亿酶脱与 Caco-2 细胞共同温育后，E.coliK88和 S.choleraesuis 再粘附细胞时，可见绒毛排列依旧很整齐、致密，肠上皮细胞完好。 这充分说明亿霉脱，能阻止病原菌对消化道粘膜的侵害，维护消化道正常的生理功能。
粘膜保护机理 是由于亿霉脱主要成分之一是高络合酸洗载铜蒙脱石（MMT-Cu），它能连续覆盖在肠上皮细胞表面与糖蛋白结合，又由于它们表面 Zeta电位的不同，对病原菌具有较强的吸附作用，可将病原菌固定在其表面，从而阻止细菌进入到肠细胞内（ 因为不能再与肠上皮细胞上的受体结合）。而且 MMT-Cu 中的 富集表面的高浓度Cu2+可将病原菌杀死。
亿霉脱体外对四种病原菌及两种肠道有益菌杀菌作用 亿霉脱对六种细菌的最小抑菌（MIC)和杀菌浓度(MBC)
