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Vivian, Tamiris e Poliana

Vivian, Tamiris e Poliana. PCR - DEFINIÇÃO. PCR. Polymerase. chain. reaction. Reação em cadeia de polimerase. PCR – BREVE HISTÓRICO. Descrito por Kary Mullis em 1983. Patenteado em 1989 pela Hoffman La Roche & Perkin-Elmer Corporation. Prêmio Nobel da Química  1930.

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Presentation Transcript

  1. Vivian, Tamiris e Poliana

  2. PCR - DEFINIÇÃO PCR Polymerase chain reaction Reação em cadeia de polimerase

  3. PCR – BREVE HISTÓRICO Descrito por Kary Mullis em 1983 Patenteado em 1989 pela Hoffman La Roche &Perkin-ElmerCorporation Prêmio Nobel da Química  1930

  4. PCR - FUNDAMENTO 4º CICLO 3º CICLO 2º CICLO 1º CICLO ... AMOSTRA DE DNA CONTENDO A SEQÜÊNCIA ALVO

  5. PCR - CARACTERÍSTICAS SENSIBILIDADE PEQUENAS CONCENTRAÇÕES DA AMOSTRA SÃO NECESSÁRIAS ESPECIFICIDADE SEQUÊNCIAS -ALVO REPRODUTIBILIDADE CONSTÂNCIA NA REPRODUÇÃO DOS DADOS RAPIDEZ AMPLIFICAÇÃO EXPONENCIAL

  6. PCR - ELEMENTOS TAMPÃO DE REAÇÃO E CONCENTRAÇÃO ADEQUADA DE MgCl2 PRIMERS dNTP DNA-POLIMERASE TERMOESTÁVEL DNA

  7. PCR - TEMPERATURAS TERMOCICLADOR

  8. PCR- TEMP. DE HIBRIDIZAÇÃO A temperatura escolhida para a hibridização depende dos iniciadores utilizados. • [G/C]  Temp •  [A/T]  Temp SOFTWARES

  9. PCR - FUNDAMENTO Vídeo demonstrando a PCR e o aumento do número de moléculas conforme os ciclos. http://www.youtube.com/watch?feature=endscreen&v=QVeVIM1yRMU&NR=1

  10. PCR – DETECÇÃO DO PRODUTO

  11. PCR EM TEMPO REAL MENOR TEMPO MENOR RISCO DE CONTAMINAÇÃO

  12. CURVA DE AMPLIFICAÇÃO Ct= cyclethreshold = momento (PCR- ciclo) no qual o fluorescência é maior que o background.

  13. Ajuste da linha de base e threshold

  14. CURVA DE DISSOCIAÇÃO Temperature (°C) O produto específico apresenta uma temperatura de desnaturação de (Tm ) de 80.5 °C O dímero de primer apresenta Tm de 75 °C.

  15. PCR EM TEMPO REAL Vídeo demonstrando a PCR em tempo real e comparando com a PCR convencional http://www.youtube.com/watch?feature=endscreen&v=QVeVIM1yRMU&NR=1

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