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利用聚合酶鏈反應進行 fmr1 基因 剔除斑馬魚 之 基因型 篩選

利用聚合酶鏈反應進行 fmr1 基因 剔除斑馬魚 之 基因型 篩選. Genotyping of fmr1 knock out zebrafish by PCR. 作者：張佑邦、王秋涵、張茜 茜 指導 教授：師大生命科學 系 呂國棟教授 指導老師：吳曜如老師、朱哲民老師. 動機. 研究「 X 染色體脆折症 」. FXS. 使用魚種─斑馬魚. 1 ) 本魚分布於熱帶溪流的中上游 2 ) 卵直接產出並 沈於水中 3 ) 屬雜食性，以昆蟲、小型甲殼類等為主食 4) 性情溫和，喜群游，通常數尾成一群 5) 具 垂直紋路 ，與真實的斑馬不同.

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利用聚合酶鏈反應進行 fmr1 基因 剔除斑馬魚 之 基因型 篩選

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Presentation Transcript

  1. 利用聚合酶鏈反應進行fmr1基因剔除斑馬魚之基因型篩選利用聚合酶鏈反應進行fmr1基因剔除斑馬魚之基因型篩選 Genotyping of fmr1 knock out zebrafish by PCR 作者：張佑邦、王秋涵、張茜茜 指導教授：師大生命科學系 呂國棟教授 指導老師：吳曜如老師、朱哲民老師

  2. 動機 研究「X染色體脆折症」 FXS

  3. 使用魚種─斑馬魚 1) 本魚分布於熱帶溪流的中上游 2)卵直接產出並沈於水中 3) 屬雜食性，以昆蟲、小型甲殼類等為主食 4) 性情溫和，喜群游，通常數尾成一群 5) 具垂直紋路，與真實的斑馬不同

  4. 原 理 核 膜

  5. FXS疾病成因、症狀 • 成因 :CGG過度重複 • 症狀 : 腦部和生理構造異常 外顯子 內含子

  6. 乾浴槽 離心機

  7. PCR機器

  8. 微量滴管 微量離心管 滅菌過之二次水

  9. 注意事項 • 注意放置的時間…… • 注意抽取的速度…… • 滅菌且隨時替換……

  10. 實驗步驟 1 • 切尾鰭取組織

  11. 手術刀 尖鑷 化妝棉 電子秤 MS-222

  12. 實驗步驟 2 異丙醇 蛋白沉澱液 蛋白酶 萃取液

  13. 實驗步驟 2 • 抽DNA

  14. 實驗步驟 3 • 定量DNA

  15. 實驗步驟 4 • 檢測DNA純度與濃度

  16. 實驗步驟 5 • 進行PCR，基因放大

  17. Taqpolymerase(聚合酶) 10 nMdNTP (去氧核糖核苷酸) Primer(引子) primer 原本為粉末狀溶於水使用 二次水 Taqbuffer (緩衝溶液)

  18. 實驗步驟 6 • 第一階段電泳-測驗 • DNA限制酶切割 • 第二階段電泳 • 結果

  19. 結果 異型合子 Hetero zygote 野生型 Wild type

  20. ★★★★心得★★★★

  21. 謝謝大家

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