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家兔实验性弥散性血管内凝血

家兔实验性弥散性血管内凝血. Experiment of d isseminated i ntravascular c oagulation (DIC) in rabbit. 目的. 应用静脉注射 兔脑浸液 方法，复制家兔实验性 DIC 。通过实验和几项血液学指标的测定及结果分析，了解实验室诊断 DIC 的常用方法，联系理论知识加深理深 DIC 的病因及发病机理。. 实验内容. 称重、固定（ 清醒状态 ）、 局部浸润麻醉 手术：颈动脉插管，采集正常血标本 造模： i.v.2 ％兔脑浸液， 60mg/kg （慢 ,<2ml/min ， 注意兔子挣扎 )

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家兔实验性弥散性血管内凝血

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Presentation Transcript

  1. 家兔实验性弥散性血管内凝血 Experiment of disseminated intravascular coagulation (DIC) in rabbit

  2. 目的 应用静脉注射兔脑浸液方法，复制家兔实验性DIC。通过实验和几项血液学指标的测定及结果分析，了解实验室诊断DIC的常用方法，联系理论知识加深理深DIC的病因及发病机理。

  3. 实验内容 • 称重、固定（清醒状态）、局部浸润麻醉 • 手术：颈动脉插管，采集正常血标本 • 造模：i.v.2％兔脑浸液，60mg/kg（慢,<2ml/min，注意兔子挣扎) • 采集DIC血标本，离心分离血浆备用 • 测定样本：①KPTT,②PT,③Fg,④3P • 结果汇总

  4. 测定指标和方法 • 白陶土部分凝血活酶时间（Kaolin partial thromboplastin time , KPTT）玻片法（挑丝法） • 凝血酶原时间(prothrombin time, PT)玻片法（挑丝法） • 纤维蛋白原（fibrinogen, Fg）含量，饱和盐水法 • 血浆鱼精蛋白副凝固试验（Plasma Protamine Paracoagulation test，3P）

  5. KPTT测定方法 清洁平皿和试剂37℃预热 滴加20ul血浆和20ul KPTT试剂,用清洁针头混匀预热3min 滴加20ul 0.025mol/L氯化钙溶液,立即启动秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨 一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值35～45s）

  6. PT测定方法 清洁平皿和试剂37℃预热 滴加20ul血浆预热1min 滴加40ul PT试剂，立即启动秒表， 同时用清洁针头不断混匀和挑拨 一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值11～13s）

  7. 纤维蛋白含量测定方法 37℃孵浴3min，520nm波长比色，读取OD值

  8. 1 2 3 4 纤维蛋白含量测定方法 正常血浆各0.5ml DIC血浆各0.5ml 各加生理盐水4.5ml 各加饱和盐水4.5ml （调零管） （测定管）

  9. 3P试验 轻轻摇匀，37℃水浴孵浴15min，黑色背景观察沉淀物

  10. 结果

  11. 注意事项 1.采血时不得将动脉夹移开，以免放血后不能及时夹闭动脉造成放血过量和失血。 2.采集抗凝血需掌握好血液:抗凝剂之比例(1:9)并充分混匀（颠倒混匀）。 3.注射兔脑浸液前，要做好第二次采血的一切准备工作，并向导管内注入生理盐水（因原来插管内可能已有血栓阻塞）。 4.注射兔脑浸液是实验成败的关键步骤，要缓慢推注(<2ml/min)，密切注意家兔反应，如有明显的呼吸急促和躁动不安，应立即放血。

  12. 注意事项 5.离心分离血浆前，必须先平衡离心管。分离出血浆吸入清洁试管备用。 6.测KPTT、PT的平皿必须清洁、干燥、无油脂。KPTT试剂使用前须摇匀。 7.测Fg时，血浆一旦与饱和盐水接触。要立即进行充分混匀，以防产生局部沉淀，同样，比浊前亦要再次混匀。 8.测3P时，要先加血浆，再加鱼精蛋白，以免鱼精蛋白接触管底不洁物造成假阳性。

  13. 讨论 • 兔脑浸液引起DIC的原因和机制？ • KPTT、PT、Fg和3P各指标的临床意义是什么？分别反应什么变化? • KPTT、PT、Fg和3P的测定原理及发生变化的原因和机制?

  14. DIC动物模型的复制方法 • 凝血酶 • 蛇毒 • 兔脑浸液 • 内毒素 • 羊水

  15. 实验室诊断DIC的方法 筛选指标： • 血小板计数（platelet，PLT） • 凝血酶原时间(prothrombin time，PT) • 纤维蛋白原含量（fibrinogen，Fg） • 纤溶指标：FDP测定、3P试验、优球蛋白溶解时间、D-二聚体，等

  16. 实验室诊断标准(以下三项以上异常) • PT延长或缩短3s以上，KPTT延长或缩短10s以上； • 血浆血小板活化产物含量增加：β-TG、PF4、TXB2、P-选择素； • 凝血激活分子标志物含量增加：F1+2、TAT、FPA、SFMC； • 抗凝活性降低：AT-Ⅲ：A降低、PC活性降低； • 血管内皮细胞受损分子标志物增高：ET-1和TM。

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