VOLUMEN CELULAR Y PRESION OSMOTICA

1. VOLUMEN CELULAR Y PRESION OSMOTICA • Membranas biológicas • Transporte de agua a través de membrana • Soluciones hipotónicas, hipertónicas, isotónicas • Ecuación de Van´t Hoff

2. Membranas celulares CARACTERISTICAS • Las membranas celulares son barreras selectivas que separan las células y forman compartimentos intracelulares. • Entre sus funciones están: Permitir la entrada o salida de moléculas de la célula Generar señales para modificar el metabolismo. Adherir células para formar tejidos.

3. Composición Doble capa de fosofolípidos, proteínas y carbohidratos: • Fosfolípidos: Barrera hidrofóbica entre los compartimentos acuosos de la célula. • Proteínas: Permiten paso de moléculas hidrofílicas a través de la membrana y determinan funciones específicas de la membrana, incluyen bombas, canales, receptores, moléculas de adhesión, transductores de energía y enzimas. • Carbohidratos: Comunicación intercelular y adhesión. • Colesterol: Determina la fluidez de la membrana

4. Y el transporte de qué depende? El acceso de las sustancias depende de: • La permeabilidad selectiva: para mantener la homeostasis de la célula. • El tamaño de las moléculas. • La carga eléctrica: no polares o hidrofóbicas (pasan por la capa de lípidos), las polares o hidrofílicas (pasan por los canales). • Gradiente de concentración • La solubilidad.

6. Difusión • Es el movimiento de moléculas de una región de alta concentración a otra de menor concentración producido por la energía cinética de las moléculas. • No requiere gasto de energía (movimiento pasivo). Movimiento activo requiere gasto de ATP.

7. Osmosis • El componente principal de la célula es el agua, que actúa como solvente de solutos orgánicos e inorgánicos. • El movimiento de agua a través de una membrana selectivamente permeable se llama osmosis (difusión de agua) y sucede siempre del área de mayor concentración de agua (con menor concentración de soluto) al área de menor concentración de agua (con mayor concentración de soluto).

8. Osmolaridad vs. tonicidad • Como las membranas biológicas no son membranas semipermeables sino que poseen una permeabilidad selectiva para los distintos solutos, el comportamiento osmótico de una célula es complejo y se define el término tonicidad para describir el comportamiento de una solución en contacto con células (generalmente se considera la membrana plasmática del glóbulo rojo) • La osmolaridad mide el gradiente efectivo para el aguaasumiendo que el soluto osmótico no atraviesa lamembrana. Es simplemente una cuenta del numero departículas disueltas. • La tonicidad es un término funcional que describe latendencia de una solución para provocar la expansióno contracción del volumen intracelular. • Dos soluciones son isoosmóticas cuando tienen elmismo número de partículas disueltas, independientementedel agua que pueda pasar a través de unamembrana que las separe. • Dos soluciones son isotónicas cuando no producenmovimiento de agua a través de la membrana,independientemente del número de partículas quetengan disueltas.

9. Y las soluciones... • Cuando la célula contiene una concentración de solutos mayor que su ambiente externo, se dice que la célula está en una solución hipotónica, y como consecuencia, el agua entra a la célula causando que se expanda. • Si la concentración de solutos es mayor fuera de la célula, se dice que la célula está en una solución hipertónica; lacélula pierde agua y se encoge. • Si las concentraciones de soluto son iguales en ambos lados de la membrana, se dice que la célula está en una solución isotónica, dondeel movimiento neto es cero

10. Presión osmótica • Se entiende por presión osmótica la presión que sería necesaria para detener el flujo de agua a través de la membrana semipermeable. • Cuando una célula se sumerge en un líquido con diferente concentración a la de su interior, la presión osmótica puede ocasionar plasmólisis o turgencia.

11. y Van’t Hoff dijo... P = RTC • C = concentración molar de solutos • R = constante de los gases • T = temperatura Es aplicable a soluciones ideales diluidas Hay que expresar la concentración en unidades que guarden relación directa con el numero total de partículas disueltas .... Solutos que no se disocian = molaridad Solutos que se disocian = osmolaridad (molaridad multiplicada por el numero de iones que cada molécula de soluto proporciona a la disolucion; osmoles por litro)

12. Presión osmótica y volumen celular • Si una celula se suspende en un medio de presion osmotica variable, se originará transferencia de agua que parara cuando la presiones enternas e internas se igualen • si Van’t Hoff se cumple ==> OSMe = OSM i ó OSMe = n1 Vt-Vs n1 = osmoles intracelulares Vt = volumen celular total Vs = volumen de sólidos contenidos en el medio intracelular Vt = Vs + n1 OSMe • La relación entre el volumen celular y la inversa de la osmolaridad del medio puede representarse por un recta de pendiente positiva e igual a n1, y ordenada igual a Vs.

13. Experimentalmente... • Cambio de volumen celular: se mide el volumen relativo (se divide el volumen total por el volumen a 300 mOsm): • Vrel = Vtotal / Vtotal 300 mOsm = (ns interior / OSMext . Vtotal 300 mOsm ) + ( Vs/ Vtotal 300 mOsm) • Haciendo despejes y cuestiones matemáticos y definiendo la tonicidad como T = OSMint / OSMext y el volumen de agua relativo de agua difusible como W, la ecuación se puede simplificar como: Vrel = (1-W) + 1/T . W

14. Entonces en el TP... 1) Conseguimos sangre de algún voluntario 2) Tomar 5ml de sangre y separamos el plasma por centrifugación 3) Se lavan los glóbulos rojos con una solución NaCl 200 mOsm tres veces (porque? ) 4) Suspender los glóbulos rojos en el mismo volumen de pellet 5) Medir 0.5 ml de esa suspensión en 5 tubos

15. 6) Agregar 0.25 ml de soluciones de NaCl de osmolaridad creciente 7) Medición de hematocrito: se mide con una regla luego de centrifugar por 3 minutos 8) Calculo de volumen relativo (Htc/Htc a 300mOsm) 9) Representar volumen relativo vs. 1/T (tonicidad = mOsm/300) 10) Calcular el volumen relativo para miliosmolaridad infinita 11) Calcular la pendiente de la representacion realizada. 12) Validar los resultados obtenidos comparando con el volumen celular teórico de la hemoglobina.

16. Adicional Tubo 1: agua alta concentración de sal + sangre (solución hipertónica). Tubo 2: agua baja concentración de sal + sangre (solución hipotónica). Tubo 3: solución isotónica. Procedimiento: Rotular y preparar 4 portaobjetos: Portaobjeto 1: gota de sangre, coloque el cubreobjeto y observe los eritrocitos bajo el microscopio. Portaobjeto 2: gota de la mezcla del tubo 1, coloque el cubreobjeto. Observe bajo el microscopio y compare con laminilla 1. Portaobjeto 3 y 4 : Repetir el procedimiento anterior con la mezcla del tubo 2 y el tubo 3 respectivamente. Eritrocitos en ambiente hipertónico: hemólisis Eritrocitos en ambiente hipotónico: crenación

17. La tonicidad de un fluído describe los solutos osmóticamente activos en una solución. osmolaridad eficaz (tonicidad) tonicidad (es decir su concentración de electrólitos) volumen relativo ajusta el volumen de una fuente en comparación con otras fuentes Volumen relativo de hematíes con respecto al total de la sangre