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  1. Resultados de laboratorio de efectos de drogas sobre músculo liso aislado. Paula Benavides Zamora A80906 Daniel Guevara Bertsch A82860 Sindy Mora Gutiérrez A84193 Karina Román Méndez A75697

  2. Objetivos Determinar y comparar el efecto sobre el tono, la amplitud y la frecuencia de contracción de la acetilcolina, adrenalina y pilocarpina sobre el músculo liso aislado de conejo en solución Tyrode con respecto a un control. Observar y analizar la modificación sobre el tono, la amplitud y la frecuencia de contracción que produce la atropina con respecto a un control, y el efecto sobre la atropina al añadir acetilcolina en el músculo liso de intestino de conejo aislado en solución Tyrode. Determinar y analizar la respuesta en torno a la excitabilidad y la contractibilidad del músculo liso aislado de conejo en solución Tyrode, al agregar sustancias que cambian las concentraciones de iones en el LEC, tales como EDTA y KCL, comparadas con un control.

  3. Generalidades del musculo liso. • Contracción depende de la concentración intracelular de calcio. • El calcio aumenta intracelularmente por diferentes medios lo cual le permite una variedad grande de maneras de contraerse y una variedad de estímulos que realizan esto. • Su regulación radica en la cadena liviana de miocina(MLC)

  4. Figura 1.0: Los 3 mecanismos responsables de la generación de Corrientes de calcio transientes que desencadena la contracción del musculo liso. En la figura A, vemos como canales operados por receptores o un oscilador de membrana inducen a la despolarización de la membrana que induce a la entrada de calcio y la contracción. En la figura B vemos como un oscilador citosolico induce la despolarización que induce una entrada de calcio que genera la contracción. En la figura C vemos como un oscilador en las células intersticiales de Cajal induce la despolarización de la membrana.(Berridge 2008) Fuente: Berridge, M. J.Smooth muscle cell calcium activation mechanisms.The Babraham Institute, Babraham, Cambridge UK.J. Physiol 586.21 (pp 5047–5061) 2008

  5. Fuente: Sanders, K.M. Regulación de la excitación de musculo liso y su contracción .Department of Physiology and Cell Biology, University of Nevada School of Medicine, Reno, NV, USA. Neurogastroenterol Motil (Suppl. 1), (pp 39–53) 2008. Fig 1.

  6. Control Inicial Figura 3.0: Registro de control sobre el músculo liso aislado de intestino de conejo en solución Tyrode. Fuente: Hoja de recolección de datos de mesa 4 , Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina. Universidad de Costa Rica.

  7. Figura 27. El oscilador Citosolico de calcio responsable de la actividad marcapaso de las células intersticiales de Cajal, libera pulsos periódicos de calcio que forman una onda de calcio. El incremento de Ca2+ activa canales de Cl- (CLCA) que dan corrientes de entrada espontaneas transientes (STICS) que se suman para formar la corriente espontanea de despolarización (STD) que resulta en la generación de ondas lentas de despolarización de la membrana. La corriente al moverse a través de la GAP junctions permite esas ondas de transmitirse a las células vecinas de musculo liso y se contraen. Fuente: Berridge, M. J.Smooth muscle cell calcium activation mechanisms.The Babraham Institute, Babraham, Cambridge UK.J. Physiol 586.21 (pp 5047–5061) 2008

  8. Resultados de Acetilcolina Figura 3: Registro del efecto de la acetilcolina sobre el músculo liso aislado de intestino de conejo en solución Tyrode. Fuente: Hoja de recolección de datos de mesa 4, Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina. Universidad de Costa Rica.

  9. Figura 4. Promedio de las variaciones en el tono del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de acetilcolina. Fuente. Anexo 1, cuadro 1

  10. Figura 5. Promedio de las variaciones en la frecuencia de contracción del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de acetilcolina. Fuente. Anexo 1, cuadro 2

  11. Figura 6. Promedio de las variaciones en la amplitud del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de acetilcolina. Fuente. Anexo 1, cuadro 3

  12. Fuente: Billington Charlotte K., Le Jeune Ivan R Young Kenneth W. and Hall Ian P. 2008. A major functional role for phosphodiesterase 4D5 in human airway smooth muscle cells. American journal of respiratory cell and molecular biology, 38(1), 1-7. Cuadros extraído de referencias del articulo.

  13. Resultados de Adrenalina. Figura 7: Registro del efecto de la adrenalina sobre el músculo liso aislado de intestino de conejo en solución Tyrode. Fuente: Hoja de recolección de datos de mesa 4, Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina. Universidad de Costa Rica.

  14. Figura 8: Promedio de las variaciones en el tono del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de adrenalina. Fuente: anexo 1, cuadro 4.

  15. Figura 9: Promedio de las variaciones en la frecuencia de las contracciones del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de adrenalina. Fuente: anexo 1, cuadro 5

  16. Figura 10: Promedio de las variaciones en la amplitud de las contracciones del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de adrenalina. Fuente: anexo 1, cuadro 6.

  17. Adrenalina α GTP GDP MLCK PK-A β Receptor Membrana Celular Adenilato Ciclasa k+ G AMPc ﻻ β HIPERPOLARIZACIÓN Fuente: Presentación realizada por estudiantes de medicina, resultados de laboratorio “efecto de drogas en músculo liso aislado”, 2007. Modificada 2011

  18. Resultados de Pilocarpina. Figura 11: Registro del efecto de la pilocarpina sobre el músculo liso aislado de intestino de conejo en solución Tyrode. Fuente: Hoja de recolección de datos de mesa 7, Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina. Universidad de Costa Rica.

  19. Figura 12: Promedio de las variaciones en el tono del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de pilocarpina. Fuente: anexo 1, cuadro 7

  20. Figura 13: Promedio de las variaciones en la frecuencia de las contracciones del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de pilocarpina. Fuente: anexo 1, cuadro 8.

  21. Figura 14: Promedio de las variaciones en la amplitud de las contracciones del músculo liso de intestino de conejo al agregar 5 gotas de pilocarpina. Fuente: anexo 1, cuadro 9.

  22. Pilocarpina Achasa M3 B α γ PLC PIP2 Calmodulina IP3 DAG Ca++ Ca++ Ca++ Ca++ Fuente: Presentación realizada por estudiantes de medicina, resultados de laboratorio “efecto de drogas en músculo liso aislado”, 2007. Modificada 2011 Ca++ Ca++

  23. Resultados del Bloqueo competitivo de la Atropina sobre la Acetilcolina. Figura 15: Registro de efecto de atropina, en el efecto de la acetilcolina en el músculo de intestino de conejo aislado en solución Tyrode. Fuente: Hoja de recolección de datos de mesa 1, Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina. Universidad de Costa Rica.

  24. Fuente: Anexo 1, cuadro 10.

  25. Fuente: Mathias, E., et al. Frequency encoding of cholinergic- and purinergic-mediated signaling to mouse urinary bladder smooth muscle: modulation by BK channels.Am J Physiology Regulatory Integrative Comp Physiology292:616-624, 2007.

  26. Fuente: Sushil K. S.,  Molecular, functional, and pharmacological targets for the development of gut promotility drugs. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 291:G545-G555, 2006. Modificado 2011.

  27. Atropina Atropina Atropina Atropina Atropina Fuente: Sushil K. S.,  Molecular, functional, and pharmacological targets for the development of gut promotility drugs. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 291:G545-G555, 2006. Modificado 2011.

  28. Figura 15: Registro de efecto de atropina, en el efecto de la acetilcolina en el músculo de intestino de conejo aislado en solución Tyrode. Fuente: Hoja de recolección de datos de mesa 1, Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina. Universidad de Costa Rica.

  29. Atropina Atropina Atropina Atropina Atropina Fuente: Sushil K. S.,  Molecular, functional, and pharmacological targets for the development of gut promotility drugs. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 291:G545-G555, 2006. Modificado 2011.

  30. Atropina Atropina Atropina Atropina Atropina Fuente: Sushil K. S.,  Molecular, functional, and pharmacological targets for the development of gut promotility drugs. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 291:G545-G555, 2006. Modificado 2011.

  31. Figura 15: Registro de efecto de atropina, en el efecto de la acetilcolina en el músculo de intestino de conejo aislado en solución Tyrode. Fuente: Hoja de recolección de datos de mesa 1, Jueves 12 de mayo del 2011, Laboratorio de Fisiología para Medicina. Universidad de Costa Rica.

  32. Atropina Atropina Atropina Atropina Atropina Fuente: Sushil K. S.,  Molecular, functional, and pharmacological targets for the development of gut promotility drugs. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 291:G545-G555, 2006. Modificado 2011.

  33. Resultados de EDTA Figura 19: Registro de un minuto de control y tres minutos posteriores a la adición de 10 gotas de EDTA a músculo liso aislado de intestino de conejo obtenido mediante un quimógrafo. Fuente: Mesa 4 Laboratorio de Fisiología para Medicina, jueves 12 de mayo del 2011.

  34. EDTA quela los iones de calcio

  35. Aumenta la probabilidad de apertura de los canales de Na+ estabilizados por Ca+2

  36. La entrada de Na+ produce despolarización y así es como se explica la hiperexcitabilidad (efecto inicial)

  37. Figura 19: Registro de un minuto de control y tres minutos posteriores a la adición de 10 gotas de EDTA a músculo liso aislado de intestino de conejo obtenido mediante un quimógrafo. Fuente: Mesa 4 Laboratorio de Fisiología para Medicina, jueves 12 de mayo del 2011.

  38. La despolarización activa los canales de Ca+2 voltaje dependientes, y por el gradiente antes creado el Ca+2 SALE!!

  39. El Ca+2 que sale es quelado por EDTA y el efecto total es una disminución de la concentración de Ca+2 y por lo tanto RELAJACIÓN!!!

  40. Figura 19: Registro de un minuto de control y tres minutos posteriores a la adición de 10 gotas de EDTA a músculo liso aislado de intestino de conejo obtenido mediante un quimógrafo. Fuente: Mesa 4 Laboratorio de Fisiología para Medicina, jueves 12 de mayo del 2011.

  41. Fuente: Jankowski, R., et al. Development of an experimental system for the study of urethral biomechanical function. 2004. Am J Physiol Renal Physiol 286: F225–F232.