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BCA 法测定蛋白质浓度

BCA 法测定蛋白质浓度. 七年制 200603 班吴垣辕. BCA ( bicinchoninic acid ，二辛可酸 ). : 让我们来告诉你提纲吧！. 一 . 实验目的. 二 . 实验原理. 三 . 实验器材与试剂. 五 . 注意事项. 四 . 实验步骤. 一 .【 实验目的 】. 学习掌握 BCA 法测定蛋 白质浓度的基本原理。. ■. 二 .【 实验原理 】. 在碱性条件下蛋白质与二价铜离子 Cu2+ 络合，并将其还原成一价铜离子 Cu1+ 。 Cu1+ 和 BCA 试剂反应 , 形成稳定的紫蓝色复合物。.

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BCA 法测定蛋白质浓度

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Presentation Transcript

  1. BCA法测定蛋白质浓度 七年制200603班吴垣辕

  2. BCA ( bicinchoninic acid，二辛可酸 )

  3. : 让我们来告诉你提纲吧！

  4. 一.实验目的 二.实验原理 三.实验器材与试剂 五.注意事项 四.实验步骤

  5. 一.【实验目的】

  6. 学习掌握BCA法测定蛋 白质浓度的基本原理。 ■

  7. 二.【实验原理】

  8. 在碱性条件下蛋白质与二价铜离子Cu2+络合，并将其还原成一价铜离子Cu1+。 Cu1+和BCA试剂反应, 形成稳定的紫蓝色复合物。

  9. 反应所生成的复合物，在562 nm处有强烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，可用于蛋白质浓度的测定。 ■

  10. 三.【实验器材与试剂】 1．器材 2．试剂

  11. （1）仪器：分光光度计；恒温水浴箱；枪式移液管。（1）仪器：分光光度计；恒温水浴箱；枪式移液管。 （2）玻璃仪器：试管13支，吸管2ml 1支、O.1ml 3支。 1．器材

  12. 2．试剂 （1）试剂A：1％BCA二钠盐 2％无水碳酸钠 0.16%酒石酸钠 0.4％氢氧化钠 0.95％碳酸氢钠 混合，调pH值至11.25。 （2）试剂B：40/L硫酸铜。

  13. （3）BCA工作液：试剂A 100ml ＋ 试剂B 2ml，混合即成。市面有BCA法试剂盒销售。 （4）蛋白质标准液：用结晶牛血清白蛋白，根据其纯度用生理盐水配制成1.5mg/ml的蛋白质标准液。（纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定） （5）待测样品。 ■

  14. 四.【实验步骤】 1. 配备样品 2.绘制标准曲线 3.计算待测血清蛋白质的含量 4.求待测血清的蛋白质浓度

  15. 取试管13支，编号（除空白管只做1管外，其它各号测定管均重复做两管），按表操作并记录：取试管13支，编号（除空白管只做1管外，其它各号测定管均重复做两管），按表操作并记录： 1. 配备样品

  16. 以蛋白质含量为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。 2.绘制标准曲线

  17. 3.计算待测血清蛋白质的含量 用测定管平均光吸收值在标准曲线上查出相应的蛋白质含量，计算求出该待测血清蛋白质的含量(g/L)。

  18. 从标准管中选择一管与测定管光吸收值相接近者，按比色法计算公式计算求出该待测血清的蛋白质浓度(g/L)。从标准管中选择一管与测定管光吸收值相接近者，按比色法计算公式计算求出该待测血清的蛋白质浓度(g/L)。 4.求待测血清的蛋白质浓度 ■

  19. 五. 注意事项

  20. 1. BCA法测定蛋白质浓度的范围： 20μg/ml~200μg/ml; 2. 微量BCA测定范围： 0.5μg/ml ~10μg/ml。 ■

  21. 大 谢 家 谢

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