1 / 21

Sterowanie metabolizmem

Sterowanie metabolizmem. Sterowanie metabolizmem. Wydajna produkcja metabolitu Zakłócenie procesów metabolicznych Przejściowe Trwałe zmiana warunków modyfikacja środowiska genotypu.

olina
Télécharger la présentation

Sterowanie metabolizmem

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Sterowanie metabolizmem

  2. Sterowanie metabolizmem Wydajna produkcja metabolitu Zakłócenie procesów metabolicznych Przejściowe Trwałe zmiana warunków modyfikacja środowiska genotypu

  3. Sterowanie metabolizmem Zmiany warunków środowiskowych • Indukcja substratowa i represja kataboliczna • Represja produktami reakcji enzymatycznych • Zwiększenie przepuszczalności osłon komórkowych • Zmiana preferencji metabolicznych • Dodatek prekursorów • Regulacja źródłem węgla • Regulacja związkami azotu • Regulacja fosforanowa • Regulacja parametrami fizyko-chemicznymi • temperaturą • pH • natlenianiem

  4. Sterowanie metabolizmem Modyfikacje genotypu • Zmiana aktywności enzymów • Mutanty auksotroficzne • Mutanty regulatorowe • Szczepy otrzymywane metodami inżynierii genetycznej

  5. Indukcja substratowa i represja kataboliczna • Indukcja substratowa – umożliwia syntezę określonych enzymów wyłącznie w obecności odpowiedniego substratu lub jego strukturalnego analogu • Represja kataboliczna – obecność łatwo przyswajalnego substratu hamuje syntezę enzymów potrzebnych do przyswajania innych potencjalnych substratów Represja kataboliczna jest mechanizmem dominującym

  6. Indukcja substratowa i represja kataboliczna Degradacja substratów wielkocząsteczkowych Przyswajanie związków małocząsteczkowych IPTG – izopropylo-β-D-tiogalaktopiranozyd

  7. Indukcja substratowa i represja kataboliczna • Brak represji katabolicznej nie wystarcza do syntezy białek, jeżeli nie ma induktora • Obecność induktora nie wystarcza do syntezy białek, jeżeli jest represja • Synteza białek zachodzi jedynie w obecności induktora i przy braku represji katabolicznej R – represor B1, B2, B3 – białka biorące udział w metabolizmie substratu A – struktura regionu regulatorowego

  8. Indukcja substratowa i represja kataboliczna Mechanizm często wykorzystywany przy konstrukcji systemów ekspresyjnych E. coli

  9. Przemysłowa produkcja aminokwasów

  10. Przemysłowa produkcja aminokwasów Aminokwasy egzogenne • Fenyloalanina • Izoleucyna • Leucyna • Lizyna • Metionina • Treonina • Tryptofan • Walina • Asparagina • Histydyna Kwas glutaminowy ??? Ponad 50% rocznej produkcji aminokwasów Glutaminian sodu – wzmacniacz smaku Składnik przypraw i żywności w proszku

  11. Produkcja kwasu glutaminowego Corynebacterium glutamicum • Gram + • Morfologicznie zmienne • krótkie pałeczki • maczugowce • ziarniaki • Tlenowe lub względnie beztlenowe • Optymalna temp. 28-30 °C • Wykazują auksotrofię biotynową

  12. Produkcja kwasu glutaminowego Wydajna produkcja wymaga usuwania kwasu glutaminowego z komórki • Zwiększenie przepuszczalności osłon komórkowych • deficyt biotyny • nadmiar nasyconych kwasów tłuszczowych • detergenty • antybiotyki hamujące syntezę peptydoglikanu ściany komórkowej Zmiana warunków środowiskowych

  13. Produkcja kwasu glutaminowego Wydajna produkcja wymaga usuwania kwasu glutaminowego z komórki • Zwiększenie przepuszczalności osłon komórkowych • auksotrofia glicerolowa • auksotrofia oleinowa Mutanty auksotroficzne

  14. Produkcja lizynyCorynebacterium glutamicum, Brevibacterium flavum Zmiana preferencji metabolicznych - hamowanie jednego z odgałęzień szlaku metabolicznego przez nadmiar produktu tego odgałęzienia 1 – syntaza dihydropikolinianowa 2 – dehydrogenaza homoserynowa 3 – transacylaza homoserynowa 4 – dehydrataza homoserynowa

  15. Produkcja lizynyCorynebacterium glutamicum, Brevibacterium flavum Mutanty auksotroficzne Hser- • Kinaza asparaginianowa (7) produkowana jest konstytutywnie • Podlega regulacji allosterycznej w obecności L-lizyny i L-treoniny (jednoczesny nadmiar obu aminokwasów) • Mutacja dehydrogenazy homoserynowej (8) znosi negatywną regulację kinazy asparaginianowej

  16. Produkcja penicyliny Prekursory • L-cysteina • L-walina • Kwas L-α-aminoadypinowy Enzymy • syntetaza L-α-aminoadypinoilo-L-cysteinylo-D-waliny (syntetaza ACV) • syntaza izopenicyliny N (syntaza IPN) • Acylaza penicylinowa • Acylotransferaza izopenicyliny N

  17. Regulacja źródłem węgla Produkcja penicyliny przez Penicillium chrysogenum • Wymaga zniesienia ogólnometabolicznego układu represji katabolicznej • Decyduje nie rodzaj źródła węgla, ale szybkość jego metabolizmu • Represja kataboliczna • synteza kwasu L-α-aminoadypinowego (L-α-AA) • synteza syntetazy L-α-aminoadypinoilo-L-cysteinylo-D-waliny (syntetazy ACV) • synteza syntazy izopenicyliny N (syntazy IPN)

  18. Regulacja fosforanowa Produkcja penicyliny przez Penicillium chrysogenum • Wymaga zniesienia ogólnometabolicznego układu represji katabolicznej • Nadmiar jonu fosforanowego pogłębia efekt represji katabolicznej • stymuluje transport glukozy do komórki • stymuluje metabolizm glukozy

  19. Regulacja związkami azotu Produkcja penicyliny przez Penicillium chrysogenum Wymaga obecności glutaminy jako donora grupy aminowej w syntezie aminokwasowych prekursorów penicyliny Nadmiar jonu amonowego powoduje represję syntetazy glutaminowej

  20. Dodatek prekursorów Produkcja penicyliny G przez Penicillium chrysogenum • Selektywna produkcja penicyliny G wymaga dodatku prekursora reszty benzylowej • fenylooctanu • fenyloalaniny

  21. Mutanty regulatorowe • mutageneza genów kodujących białka regulatorowe (represory) • mutageneza sekwencji operatorowych • mutageneza genów kodujących enzymy allosteryczne

More Related