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+ 45 kDa. Environnement, exposition, sensibilisation allergique : Etude analytique d’un modèle de pollen de cyprès en Méditerranée

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Presentation Transcript

  1. + 45 kDa Environnement, exposition, sensibilisation allergique : Etude analytique d’un modèle de pollen de cyprès en Méditerranée 1- ESPCI ParisTech, PECSA, UMR 7195 CNRS, Paris, France; 2- Unité d’Immunologie, Autoimmunité et Hypersensibilité, Hôpital Bichat-Claude Bernard, Paris, France;3- Center of Molecular Allergology, IDIIRCCS, Rome, Italy, 4- Hôpital Nord, Marseille, France Y Shahali; LSABM, ESPCI-ParisTech, 24 novembre 2011 1 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  2. Allergie au pollen de Cupressacées dans le monde E Scala et coll. 2010 23,077 patients ISAC 75 allergènes Cup a 1: 43% 2 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  3. Les risques allergiques en France Source: RNSA 2003 Source: INRA 2010 3 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  4. Pollen de cyprès: aspects particulaires fragilité de l’exine • Pollen: 20-24 µm de diamètre • Orbicule: 300-600 nm de diamètre 5 µm Micrograph of an Arizonica cypress pollen Shahali et al. 2007, 2009 300 nm Orbicules 4 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  5. Exposition expérimentale du pollen de cyprès au NO2 Etude en collaboration avec le PC2A "Physicochimie des Processus de Combustion et de l'Atmosphère", Université Lille 1. 5 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  6. Extraction aqueuse ex cy in 6 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  7. Mécanisme de l’allergie et identification des allergènes 1 – évaluer le répertoire des allergènes 2- évaluer le répertoire des IgE des patients allergiques 2e contact antigénique 1er contact antigénique IL-4 Th2 Be IgE IL-13 Ag Ag cytokines enzyme HISTAMINE IgE du sérum, spécifiques des allergènes auxquels le patient est sensibilisé Sensibilisation APC leukotriènes masto ou baso prostaglandines chemokines PAF dégranulation symptômes cliniques 7 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  8. Différentes extractions des protéines du pollen *2 M Thiourea, 7 M Urea, 2% CHAPS 8 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011 méthodes d’extraction µg de protéine par gr de pollen Ratio H20 91 1.7 PBS 150.5 17 10 21 SDS 1496 *TUC 1975

  9. Serums anti-14 kDa Serums anti-HMW Criblage en SDS-PAGE 1-D avec un extrait SDS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 9 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  10. Electrophorèse 2-D sur des extraits polliniques c a kDa Cup s 1 - 94 H2O 1 1 - 67 - 43 - 30 - 20 - 14.4 4.45 5.1 7.0 6.0 4.45 8.0 6.5 7.5 5.1 9.6 7.0 6.0 6.5 7.5 8.0 9.6 pI pI b d kDa PG - 94 Cup s 1 2 2 - 67 1 PBS 1 - 43 1 - 30 3 3 - 20 ? - 14.4 10 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  11. Cinétique d’extraction des protéines du cyprès de Provence en PBS kDa 11 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  12. Comparaison de la réactivité IgE aux protéines du pollen de cyprès de Provence chez les patients Italiens et Français 60.1% 44.5% 23.3% 16.6% 30.5% 25% - 94 - kDa - 67 - - 43 - - 30 - - 20.1 - - 14.4 - 30 29 28 27 26 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 negative HMW BP14 BP14 negative HMW 12 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  13. Allergène de 14 kDa fortement exprimé dans le pollen de Cupressus sempervirens Cyprès de Provence Cyprès d’Arizona Ca Cs kDa 94 94 67 45 30 20.1 14.4 13 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  14. CONCLUSION • Le pollen de cyprès est une source importante de fines particules submicroniques • Optimisation de l’extrait de pollen de cyprès • utilisation de détergents et d’agents chaotropiques • Révélation de nouveaux allergènes • Deux profils d’immunoréactivité • allergènes de haute masse moléculaire • allergène de 14 kDa • L’importance des conditions d’exposition et de l’espèce sensibilisante • L’apport de la biochimie analytique et de l’allergologie moléculaire • l’étude du répertoire des allergènes • L’analyse de la diversité de la réponse allergique (pollen, moisissures, acariens, aliments…) 14 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

  15. Remerciements Pascal PONCET Jean-Pierre SUTRA Gabriel PELTRE Hélène SENECHAL ESPCI ParisTech, LSABM Iman HADDAD Emmanuelle DEMEY Joëlle VINH ESPCI ParisTech, LSMBP Sylvie CHOLLET-MARTIN Pascale NICAISE INSERM U996, Paris Denis CHARPIN Hôpital Nord de Marseille Philippe CHAFEY ICGM, Paris Adriano MARI CMA, Rome, Italy Laurence GUILLOUX Biomnis, Lyon

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