180 likes | 462 Vues
UNIVERZITET U NOVOM SADU PRIRODNO MATEMATIČKI FAKULTET DEPARTMAN ZA BIOLOGIJU I EKOLOGIJU. VIRUSI PROKARIOTA. mr Petar Knežević Novi Sad, 2007. MORFOLOGIJA. ADSORPCIJA. RECEPTORI: transportni proteini, glikokaliks, tejhojne kiseline, peptidoglikan, itd.
E N D
UNIVERZITET U NOVOM SADU PRIRODNO MATEMATIČKI FAKULTET DEPARTMAN ZA BIOLOGIJU I EKOLOGIJU VIRUSI PROKARIOTA mr Petar Knežević Novi Sad, 2007.
ADSORPCIJA • RECEPTORI: transportni proteini, glikokaliks, tejhojne kiseline, peptidoglikan, itd. • Prvo se reverzibilno vežu za primarne receptore, a zatim ireverzibilno za sekundarne • Efikasnost povećavaju Mg2+ i Ca2+,a inhibiraju ugljenohidrati, žuč i dr. • Gubitak receptora→ rezistencija na infekciju → mutacija faga → infekcija
PENETRACIJA I DEKAPSIDACIJA • Kontrakcija omotača repa i ubacivanje NK • Enzimska razgradnja površinskih struktura • Zaštita NK- cirkulatorna forma, proteini i neuobičajeni nukleotidi
EKLIPSA • EKSPRESIJA RANIH VIRUSNIH PROTEINA • SINTEZA NK • EKSPRESIJA KASNIH VIRUSNIH PROTEINA • INTRACELULARNO SKLAPANJE I AKUMULACIJA
LIBERACIJA • LIZA, RETKO PUPLJENJE • HOLINI PRAVE OTVORE NA MEMBRANI BAKTERIJE, ŠTO OMOGUĆAVA DA ENDOLIZINI DOĐU DO ĆEL. ZIDA • ENDOLIZINI: • Endo- β- N glukozaminidaza i N- acetilmuraminidaza- glavne veze u peptidoglikanu • endopeptidaze deluju na transpeptidne mostove • N- acetilmuramil- L alanin amidaze (ili samo amidaze) deluju na amidne veze koje povezuju šećerne i peptidne komponente peptidoglikana • KOD MALIH ssDNK I RNK FAGA- AMURINI- aktiviraju autolizine
KOD T4 OKO 100 VIRIONA/ĆELIJI • CEO CIKLUS TRAJE OKO 25 MIN.
LITIČKI CIKLUS • LIZOGENI CIKLUS (LIZOGENI ILI UMERENI FAGI) • U FORMI EPIZOMA (PROFAG) ILI CIRKULARNE DNK • REPRESORNI PROTEIN JEDINI AKTIVAN • UV INDUCIBILNI ILI NE • ZNAČAJNI U TRANSDUKCIJI
ZNAČAJ • NAJBROJNIJI MO- preko 1030 • EKOLOGIJA BAKTERIJA • LIZOGENA KONVERZIJA- patogeni • INDIKATORI U SANITARNOJ MIKROBIOL. • MODELI ZA ANIMALNE VIRUSE • KLONIRANJE- vektori • POLJOPRIVREDA I INDUSTRIJA • MEDICINA- dijagnostika i terapija
U sanitarnoj mikrobilogiji enterični virusi su od najvećeg značaja(enterovirusi, astrovirusi, enterični adenovirusi, ortoreovirusi, rotavirusi, kalcivirusi i hepatitis A i E virusi) • Karakteriše ih dugo preživljavanje u vodi, umerena rezistencija na hlor i visoka relativna infektivnost • Troškovi, dugo vreme inkubacije (3-12 dana) i opšta kompleksnost metoda onemogućavaju rutinsko praćenje njihovog prisustva u vodi
Indeks organizmi su bakteriofagi, zbog velike sličnosti sa humanim virusima • Koriste se: • KOLIFAGI (somatski i FRNK fagi) i • FAGI Bacteroidesfragilis-a
Kolifagi • Somatski kolifagi široko rasprostranjeni • F RNK kolifagi inficiraju samo F+ bakterije; specifični za crevni traktz ljudi i životinja (10% ljudi, 45% goveda, 60% svinja i 70% živine) • Postoje IV serotipa (I i IV animalni, III humani) Fagi Bacteroidesfragilis-a • Specifični za crevni trakt • domaćin anaeroban i nisu univerzalno prisutni • Odsustvo faga ne znači obavezno odsustvo enteričnih virusa; značaj pri dezinfekciji
ODREĐIVANJE BROJNOSTI • DIREKTNO- EM • INDIREKTNO- METODOM PLAKA • EFIKASNOST OKO 50% • PFU- PLAKE FORMING UNIT • 106/PLAK • MUTNE PLAKE- LIZOGENI
ZADATAK • ODREDITI BROJNOST KOLIFAGA U VODI DUNAVA METODOM PLAKA • RASTOPITI POLUTEČNU PODLOGU SA 0.7% AGARA • DODATI 100μl KULTURE BAKTERIJE KADA TEMPERATURA PODLOGE PADNE NA OKO 500C • DODATI UZORAK: • 1. I 2. KLUPA 1ml • 3. I 4. KLUPA 100μL • 5. I 6. KLUPA 10μL • BLAGO PROTRESTI EPRUVETU NEKOLIKO SEKUNDI I RAVNOMERNO PRELITI PLOČU SA MPA PODLOGOM • NA PLOČU NAPIATI GRUPU I ZAPREMINU UZORKA