1 / 10

RT(reversā jeb apgrieztās transkripcijas) -PCR

RT(reversā jeb apgrieztās transkripcijas) -PCR. Madara Zamberga LUBF 2.mag. kurss Stud.apl.Nr . mz09014. Kas ir RT-PCR?. Pamatprincips, kā PCR. RT-PCR - RT ( reverse transcription ) solī tiek veikta vienpavediena komplimentārās DNS ( cDNS ) sintēze, izmantojot mRNS. Vēsture.

roana
Télécharger la présentation

RT(reversā jeb apgrieztās transkripcijas) -PCR

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. RT(reversā jeb apgrieztās transkripcijas) -PCR Madara Zamberga LUBF 2.mag. kurss Stud.apl.Nr. mz09014

  2. Kas ir RT-PCR? Pamatprincips, kā PCR. RT-PCR- RT (reversetranscription) solī tiek veikta vienpavedienakomplimentārās DNS (cDNS) sintēze, izmantojot mRNS.

  3. Vēsture 1983.gadā atklāja PCR. 1993. saņemta Nobela prēmija. PCR tehnika ļauj amplificētmRNS, pēc pirmās mRNS sintēzes par cDNS, nodēvējot to par RT-PCR. (KaryMullis)

  4. Izmantošana • Ģenētisku slimību diagnostikā (Leši-Nīhana sindroms u.c.). • Pētot RNS vīrusu genomus (retrovīrusiem, A tipa gripas vīrusiem u.c.). • Tiek meklēts veids, kā izmantot RT-PCR audzēja diagnostikā.

  5. Nepieciešamie materiāli • mRNS • Oligo(dt) praimeris • dNTP (dezoksiribonukleotīdu) maisījums • PCR buferis • Nucleasefree ūdens • RevertAid enzīms (reversā transkriptāze) • RiboLockenzīms (traskriptāzesinaktivētājs) • SYBR Green (palielina fluorescences intensitāti) • PCR aparāts

  6. RT-PCRprincips

  7. PCR princips

  8. Metodes +/- (+) RT-PCR ir augsta jūtība uz mRNS. (+) RT-PCR tiek izmantoti specifiski praimeri, lai iegūtu cDNS sintēzi. (+)RT-PCR var ātri iegūt rezultātus. (-) RT-PCR detektē transkriptus, nevis funkcionālus proteīnus. (-) RT-PCR līdzīga tradicionālajam PCR.

  9. Izmantotie literatūras avoti • http://www.gene-quantification.de/poster-rt-pcr.jpg • http://biotech.about.com/od/proteintechnology/g/Reverse-Transcriptase-Pcr.htm • Carlossetal., 2004. Reversetranscriptionandpolymerasechainreaction: principlesandapplicationsindensity. ApplOral Sci;12(1):1-11. • Helmut etal. 2003.mRNA ExtractionandReverseTranscription-PCRProtocolforDetectionofnifHGeneExpressionbyAzotobactervinelandiiinSoil. AppliedandEnvironmetalMicrobiology, 69(4):1928-1935. • Moreletal. 1998.In situ reversetranscription-polymerasechainreaction. BiologyoftheCell 137-154.

  10. Jautājums! • Kāds ir RT-PCR metodes galvenais pamatprincips?

More Related